细菌内同源重组高效制备含绿色荧光蛋白和抗凋亡基因bcl-X_L的重组腺病毒载体

目的 :制备含绿色荧光蛋白和抗凋亡基因bcl-XL 的重组腺病毒载体。方法 :采用PCR方法从质粒pEGFP -C3 -bcl-XL 中扩增出bcl-XL 基因 ,再亚克隆至腺病毒穿梭质粒中 ,形成转移质粒pAdTrack -CMV -bcl-XL;然后与pAdEasy - 1共转化BJ51 83菌 ,采用细菌内同源重组法构建重组腺病毒质粒pAdEasy - 1 -gfp -bcl-XL,筛选同源重组的阳性克隆 ;抽提的pAdEasy - 1 -gfp -bcl-XL 经PacI线性化后 ,再用LIPOFECTAMINETM2 0 0 0介导转染至人胚肾 2 93细胞内包装扩增出重组腺病毒颗粒 ;采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定 ;用氯化铯超高速梯度离心纯化获取高滴度的重组腺病毒rAd -gfp -bcl-XL。结果 :由pAdTrack -CMV -bcl-XL 和pAdEasy - 1共转化BJ51 83菌1 6 - 2 0h后 ,可获得 35 %的阳性重组体细菌克隆。由重组质粒DNA经 2 93细胞包装后产生的重组腺病毒 ,经PCR检测表明含有目的基因bcl-XL。氯化铯纯化所得重组腺病毒滴度约为 6 5× 1 0 1 2 PFU/L。结论 :用细菌内同源重组法可以高效、简便、快捷地制备出重组腺病毒质粒载体 ,重组体病毒质粒经 2 93细胞包装、扩增和氯化铯纯化后可制备出高滴度的重组腺病毒颗粒rAd -gfp -bcl-XL,为人类相关疾病的基因治疗提供良好的基因转染载体。

BD留置针在肝癌治疗中的应用

目的探讨BD留置针在肝癌局部治疗及全身化疗中应用的优越性。方法将103例行肝癌局部治疗及全身静脉化疗的患者随机分成两组,研究组采用静脉留置BD针行静脉输液;对照组常规手背头皮针静脉输液,比较两组患者用药时间、穿刺次数及穿刺处疼痛、肿胀、静脉炎的发生情况。结果在用药时间无差别的情况下,研究组的穿刺次数比对照组明显减少(P<0.01);对照组患者疼痛、肿胀、静脉炎的发生率均高于研究组,满意度低于研究组(P<0.05)。结论在肝癌局部治疗及全身化疗患者中应用BD留置针,能保护患者的静脉,减轻患者痛苦,增强患者对治疗的信心,同时减少护理工作量,并降低职业暴露的风险。

晚期肝癌患者应用PIAF方案治疗不良反应的护理

对2006年4月-2007年2月运用PIAF方案治疗的22例晚期肝癌患者的不良反应进行严密观察及护理,总结了该方案治疗过程中骨髓抑制、肝功能损害、消化系统反应、高热、末梢神经炎等不良反应的护理措施。通过采取针对性护理干预,有效地减轻了PIAF方案治疗所致的不良反应,提高了患者对不良反应的耐受力及生活质量,为患者顺利完成治疗提供了护理保障。

吸毒产妇在分娩过程中的心理分析及护理

目的探讨吸毒产妇在分娩过程中的心理问题及相对应的心理护理措施。方法选择11例吸毒产妇,在分娩期实施具有针对性的心理护理。结果11例吸毒产妇均能较好地配合医护人员的治疗及护理,以较为稳定的心理状态顺利渡过分娩期。结论通过与吸毒产妇建立良好的护患关系,制定并实施专业的心理护理措施可以疏导吸毒产妇的心理障碍,协助其顺利渡过分娩期。

重组腺病毒介导的gfp-bcl-X_L对视网膜变性鼠光感受器细胞保护作用的研究

目的 观察重组腺病毒rAd gfp bcl XL治疗视网膜变性 (retinaldegeneration ,RD)鼠的疗效。方法 40只RD鼠随机分成A、B组 ,每组 2 0只 ,右眼为治疗眼 ,左眼为对照眼。A、B组治疗眼分别于RD鼠生后 10d及 2 2d视网膜下腔注射含绿色荧光蛋白基因gfp和抗凋亡基因bcl XL 的重组腺病毒颗粒 ;术后 15、30d摘除治疗眼和对照眼行冰冻切片、透射电镜下观察、石蜡切片、HE染色并提取视网膜总RNA ;行逆转录聚合酶链反应分析bcl XL 基因的mRNA表达水平 ;免疫组化分析治疗眼和对照眼的Bcl XL 蛋白水平。结果 治疗眼视网膜有较广泛的绿色荧光蛋白表达 ,说明重组腺病毒成功的将bcl XL 转染至视网膜光感受器细胞 ,且有bcl XL 表达 ;术后 30d ,A组鼠治疗眼和对照眼bcl XL的mRNA表达水平及Bcl XL 蛋白含量有明显差异 ;透射电镜下可见治疗眼的内节段较对照眼完好 ;HE染色示治疗眼视网膜光感受器细胞层较对照眼厚。而B组鼠治疗眼和对照眼的视网膜光感受器细胞层的厚度无明显差异。结论 注射至早期RD鼠视网膜下腔中的rAd gfp bcl XL 能有效转染光感受器细胞并发挥抗凋亡作用 ,但对晚期RD鼠的疗效不明显。