杆状病毒转导不同哺乳动物骨髓来源间充质干细胞

杆状病毒作为一种新型基因载体,若能有效转导不同哺乳动物骨髓来源间充质干细胞(bone marrow-derived mesen-chymal stem cells,BMSCs),将会成为干细胞基因修饰研究领域中更理想的一种基因载体。本文探讨了重组杆状病毒(BacV-CMV-EGFP)对不同哺乳动物BMSCs的转导效率。体外原代培养小鼠、大鼠、猪、恒河猴及人的BMSCs。用培养3代以上的哺乳动物BMSCs进行病毒转导实验,转导2d后用倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白在不同哺乳动物BMSCs中的表达,并用流式细胞仪检测重组杆状病毒对不同哺乳动物BMSCs的转导效率。结果显示:原代培养的小鼠、大鼠、猪、恒河猴及人的BMSCs于体外传代3次以上后,细胞呈现较均一的梭形,漩涡状生长;倒置荧光显微镜观察显示,与小鼠、大鼠、猪的BMSCs相比,恒河猴及人有更多BMSCs表达绿色荧光蛋白,且荧光强度较强;杆状病毒对小鼠、大鼠、猪、恒河猴及人的BMSCs的转导效率分别为(21.21±3.02)%﹑(22.51±4.48)%﹑(39.13±5.79)%﹑(71.16±5.36)%及(70.67±3.74)%。上述结果表明,重组杆状病毒对不同哺乳动物BMSCs的转导效率不同,对恒河猴及人的BMSCs转导效率较高,说明重组杆状病毒可作为人或灵长类动物BMSCs基因修饰研究领域中更理想的基因载体。

骨髓间充质干细胞诱导为胰岛样细胞后自体移植治疗糖尿病猕猴

目的观察胰腺提取物诱导骨髓间充质干细胞（BMSC）为胰岛样细胞（IC）的变化及其自体移植对糖尿病猕猴的影响。方法分离猕猴BMSC，纯化、扩增、鉴定后分别用Ⅰ液[含20ng/ml碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、20ng／ml干细胞生长因子（SCF）、2％B27和2％新生牛血清的DMEM／F12]和Ⅱ液（Ⅰ液加10％胰腺提取物和20mmol／L尼克酰胺）诱导培养，镜检法观察细胞形态的变化，免疫细胞化学法鉴定相关蛋白的表达。将IC自体移植到链脲佐菌素（STZ）所致糖尿病猕猴胰腺，观察移植对血糖、胰岛素和C肽分泌的影响。结果分离到CD105阳性的BMSC，经体外诱导后，由长梭形变为神经元样细胞（nestin染色阳性），随后细胞逐渐聚集呈丛状排列的IC（胰岛素和C肽染色阳性）。自体移植IC后，糖尿病猕猴血糖浓度逐渐降低，而胰岛素与C肽浓度则逐渐升高，3个月后分别与移植前的浓度相比差异均具有统计学意义（P〈0．01），但仍未恢复到注射STZ前的正常水平。结论BMSC可以在体外被含有10％胰腺提取物的条件培养基诱导为IC，自体移植IC到糖尿病猕猴后可以纠正血糖、胰岛素和C肽的分泌。