降压、调脂、治贫血、控制骨病——肾脏疾病药物治疗全接触

肾脏疾病已成为危害人们身体健康和劳动能力的重要疾病,因而其发病和治疗均受到人们的高度重视。但由于肾脏解剖结构和生理功能的特殊性,肾脏病患者的药物治疗及选择都会受到不同程度的限制,如患者的肾功能情况、治疗的目标、药物的肾毒性及其他副作用等。本文将近年来肾脏疾病药物治疗的一些进展作简要介绍。

p38MAPK在大鼠梗阻性肾病肾组织中的表达及可能作用

目的 :探讨p38MAPK在大鼠梗阻性肾病模型肾组织中的表达及其在肾脏纤维化发病机制中的作用。方法 :采用单侧输尿管结扎制造梗阻性肾病模型 ,分别于造模后 1h、3h、6h、12h、1d、3d、5d、7d、14d、2 1d、2 8d取肾组织 ,应用免疫沉淀结合特异性底物磷酸化法测定肾组织p38MAPK活性 ,用免疫组织化学法检测磷酸化p38MAPK在肾组织中的表达 ;用免疫组织化学及原位杂交方法检测肾组织TGFβ1mRNA和蛋白水平的表达。结果 :正常对照组大鼠肾组织有一定的p38MAPK基础活性 (吸光度A值 ) (0 2 2± 0 0 6 )。UUO术后 1h ,p38MAPK即被激活(0 4 5± 0 14vs对照组 ,P <0 0 5 ) ,12h时达第一个高峰 (0 91± 0 0 7vs对照组 ,P <0 0 1) ,此后活性逐渐下降 ,3d后又进行性升高 ,7d达到第二个高峰 (0 93± 0 0 6vs对照组 ,P <0 0 1) ,此后又缓慢下降 ,2 8d降至最低水平 (0 12± 0 0 2 )。而TGFβ1的表达在UUO术后 1h、3h、6h、12h及 2 4h无明显增加 ,第 3d有明显增加 (13 5 5 %± 6 33%vs对照组 ,P <0 0 5 ) ,第 7d达高峰 (2 6 78%± 8 77%vs对照组 ,P <0 0 1) ,第 2 8d表达最少。梗阻肾肾组织p38MAPK的激活明显早于TGFβ1表达且p38MAPK早期活性水平与TGFβ1的表达水平呈正相关 ;

人血清白蛋白对近端肾小管上皮细胞骨调素和CD44表达的影响

目的研究人血清白蛋白能否刺激人近端肾小管上皮细胞产生骨调素(OPN)和CD44。方法用人血清白蛋白刺激人近端肾小管上皮细胞系(HK-2细胞),分不同时间(0-48h)、不同浓度(0.1-10g/L)两组,以RT-PCR方法分别检测两组细胞表达的OPNmRNA,以Westernblotting分别检测两组细胞表达的OPN。用免疫荧光法、激光共聚焦显微镜观察1g/L的人血清白蛋白刺激HK-2细胞24h、48h后OPN、CD44的表达。结果人血清白蛋白刺激HK-2细胞上调表达OPNmRNA和蛋白,呈时间和剂量相关性。CD44的表达与OPN同步。结论人血清白蛋白可刺激HK-2细胞表达OPN与CD44。

防御素α1、α3 mRNA在活动性狼疮肾炎患者PBMC中的表达

为了探讨活动性狼疮肾炎 (LN )患者外周血单个核细胞 (PBMC )中防御素α1、α3mRNA的表达 ,从 33例女性活动性LN患者及 2 1例健康女性PBMC中提取总RNA ,采用半定量RT PCR的方法 ,以GAPDH为内参照 ,测定防御素α1、α3mRNA的相对表达。发现LN患者的防御素α1、α3mRNA表达均较健康人升高 (P <0 0 1)。防御素α1、α3mRNA在活动性LN患者PBMC中的高表达提示防御素α1。

血管紧张素Ⅱ激活巨噬细胞株p38MAPK信号通路并诱导其增殖

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)激活巨噬细胞p38MAPK信号通路的模式变化及其对巨噬细胞株增殖的影响。方法:用Westernblot测定细胞p38MAPK磷酸化表达;用细胞免疫组化观察细胞p38MAPK激活后核移位;用MTT法观察细胞增殖。结果:AngⅡ(1μmol/L)可诱导RAW264.7细胞p38MAPK磷酸化表达,15-30分钟达到高峰,随时间呈峰形变化。AngⅡ呈剂量依赖性诱导RAW264.7细胞p38MAPK磷酸化。p38MAPK特异性抑制剂SB202190可显著抑制RAW264.7细胞p38MAPK磷酸化,并呈剂量依赖性。AngⅡ可诱导RAW264.7细胞增殖,SB202190可显著抑制AngⅡ诱导的RAW264.7细胞增殖。结论:AngⅡ可激活RAW264.7巨噬细胞株p38MAPK信号通路,并通过p38MAPK信号通路调控RAW264.7细胞增殖。

清道夫受体AⅠ/Ⅱ对小鼠脂质代谢的影响

目的 :鉴定清道夫受体AⅠ /Ⅱ (SR -AⅠ /Ⅱ )基因敲除小鼠 ,观察SR -AⅠ /Ⅱ基因敲除对小鼠脂质代谢的影响。方法 :应用SR -AⅠ /ⅡcDNA基因部分序列作探针 ,用Southernblot方法检测SR -AⅠ /Ⅱ基因敲除小鼠及其同系对照小鼠靶基因敲除结果 ,用生化分析仪检测血脂、载脂蛋白和血肌酐 ,观察SR -AⅠ /Ⅱ基因敲除和未敲除小鼠分别在普通饮食和高脂饮食情况下脂质代谢的改变情况。结果 :SR -AⅠ /Ⅱ基因敲除后小鼠的低密度脂蛋白 (LDL)、体重较正常对照小鼠明显增高 (P <0 0 5 ) ,出现了脂质代谢严重失衡 ,在高脂饮食情况下这种失衡更为明显 ,体重、LDL的升高幅度均大于对照组 (P <0 0 1)。结论 :SR -AⅠ /Ⅱ参与对组织和循环中的LDL的摄取和清除 ,有利于保持机体脂质代谢的正常调节。小鼠SR -AⅠ /Ⅱ基因敲除后脂质代谢发生了明显紊乱 ,机体对脂质代谢的调节功能减弱。

血液透析患者营养状态与生存质量关系研究

目的 探讨血液透析患者营养状态和生存质量之间的关系,为改善患者的营养状况以提高生存质量提供临床依据。方法 使用改良定量主观整体评估(MQSGA)表评估患者营养状况;同时测定患者Hb、ALB、握力、IGF - 1;使用KDQOL -SFTM表调查114例血液透析患者生存质量,根据HaysRonD等提供的方法计算生存质量评分;统计学分析营养指标与生存质量评分之间的相关关系。结果 ①按MQSGA评估,MQSGA >10作为营养不良的评估,营养不良发生率为6 4 .1% ;生存质量评分KDTA为(6 4 .8±6 .3) ,SF - 36为(74 .8±10 .2 ) ;②MQSGA与肾病、透析相关生存质量(KDTA)总分及其分支领域:症状与不适、认知功能、睡眠;和一般健康相关生存质量(SF - 36 )总分及其分支领域:体能、体力所致工作和生活受限、疼痛、总体健康状况、情感问题对工作和生活的影响呈显著相关性;③Hb与KDTA总分及其分支领域:症状与不适、肾病对日常生活的影响、认知功能、社交质量、性功能、睡眠;和SF - 36总分及其分支领域:体能、总体健康状况、社会功能、精力状况呈现显著相关性;④ALB与KDTA总分及其分支领域:症状与不适、肾病对日常生活的影响、睡眠;SF - 36总分及其分支领域:体能、体力所致工作和生活受限、总体健康状况、精力状况呈显著相关性;

敲除清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因对小鼠氧化型低密度脂蛋白组织分布和清除的影响

目的应用清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠及其野生对照小鼠,观察在正常饮食和高脂饮食情况下,清道夫受体AⅠ/Ⅱ对小鼠氧化型低密度脂蛋白分布和清除的影响。方法用Southernblot和免疫组织化学法鉴定实验小鼠清道夫受体AⅠ/ⅡDNA和蛋白的表达。将2月龄雄性野生对照小鼠和清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠各50只随机分为4组:清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠和野生对照小鼠各38只,给予高脂饮食(常规饲料加15%油脂和1.25%胆固醇)8周,观察实验前后血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、载脂蛋白A、载脂蛋白B及血肌酐等水平的变化;清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠和野生对照小鼠各12只,高脂饮食3天后从尾静脉注射125I标记的氧化型低密度脂蛋白,于10min、1、3和6h获取血液、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、肠、脂肪和肌肉等标本,分别称取质量并用γ射线计数仪检测其放射性强度。结果正常饮食下,清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠和野生对照小鼠血脂水平接近;高脂饮食下两组小鼠血脂水平均明显升高,但清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠血浆低密度脂蛋白水平明显高于野生对照小鼠;清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠在注射125I标记的氧化型低密度脂蛋白10min后的清除率明显低于野生对照小鼠,注射125I标记的氧化型低密度脂蛋白6h后其主要分布于肝脏,在心脏和肾脏也有高分布;高脂饮食条件下,敲除清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因对经尾静脉注射的125I标记的氧化型低密度脂蛋白在体内的分布不同于野生对照小鼠。结论敲除清道夫受体AⅠ/Ⅱ后,小鼠脂质代谢的调节能力受到损伤,机体对血液中氧化型低密度脂蛋白的清除能力下降,组织细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取减少,血低密度脂蛋白水平升高。

尿IgG亚类的分离纯化和鉴定

目的:建立一种简便快捷的分离纯化肾病患者尿IgG亚类的方法。方法:收集的肾病患者24h尿液经硫酸铵盐析、DEAE-cellu lose离子交换层析和葡萄球菌A蛋白(SPA)亲和层析等3步分离纯化,即可得到IgG1、IgG2、IgG3、IgG44种亚类,最后用W estern b lotting和SDS-PAGE电泳的方法鉴定样品及其纯度。结果:SPA亲和层析洗脱曲线显示有4个独立的洗脱峰,W estern b lotting和SDS-PAGE方法鉴定表明提纯的样品为高纯度的IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。结论:本方法通过3步即可一次性将样品中的4种不同的IgG亚类全部分离纯化,且纯度高,简便快捷,效果良好。

TGF-β1显著上调其信号蛋白Smad2在腹膜间皮细胞中的表达

目的 :探讨Smad2信号蛋白在腹膜间皮细胞中的表达及转化生长因子 - β1(TGF - β1)对其表达的影响。方法 :大鼠腹膜间皮细胞分别培养于不同浓度TGF - β1培养液 (0、1 2 5、2 5、10 μg/L)中 ,用RT -PCR和免疫组化的方法检测不同时间 (0、5、15、30、6 0、12 0min)Smad2表达的水平和Smad2细胞内定位变化。结果 :Smad2mRNA的表达在TGF - β1刺激后 5min开始升高 ,呈时间依赖性 ,在 30min达到高峰 ,而后逐渐减弱 ,在 12 0min降至接近正常水平 ;Smad2mRNA表达也呈浓度依赖性 ,随TGF - β1浓度的增高而表达增强。磷酸化Smad2蛋白的表达和核内聚集也与mRNA表达一致 ,呈时间和浓度依赖性。Smad2在TGF - β1刺激下从胞浆转位至核内聚集 ,并在 30min达高峰。结论 :腹膜间皮细胞内存在Smad2的表达。TGF - β1可刺激Smad2表达上调和活化 ,转位至核内发挥作用 。

Defensin α1对大鼠系膜细胞增殖的影响

目的:探讨defensin α1对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞株1097增殖的影响以及可能的机制。方法:利用MTT掺入观察不同浓度的基因重组人类defensin α1在不同作用时间对系膜细胞增殖的影响,选择能够刺激系膜细胞生长的浓度及作用时间给予U0126预孵育,观察能否阻断defensin α1促系膜细胞增殖作用,使用Western blotting了解defensin α1对系膜细胞ERK1/2磷酸化及Ⅳ型胶原合成的影响。结果:Defensin α1在3-20mg/L范围内对系膜细胞具有促生长作用,12h达到峰值(P<0.01)。当浓度大于20mg/L时可抑制系膜细胞的生长,浓度在15-25μmol/L U0126可以阻断defensin α1对系膜细胞的促生长作用。浓度为3mg/L defensin α1刺激5min后可使ERK1/2磷酸化明显增加,作用12h后系膜细胞的IV胶原蛋白表达高于对照组并持续到48h(P<0.01)。结论:一定浓度的defensin α1可以促进系膜细胞的增殖和细胞外基质的合成,这种促增殖作用可能是通过MAPK途径实现的。

Defensinα1-3在狼疮肾炎患者肾组织中的表达及意义

目的探讨defensin琢1-3在不同病理类型狼疮肾炎(LN)肾组织中的表达及意义。方法收集47例LN患者的肾活检的肾组织,包括世界卫生组织(WHO)Ⅱ型7例、Ⅲ型6例、Ⅳ型29例、Ⅴ型5例,以及11例泌尿外科手术切除的远离肿瘤的肾皮质区的肾组织作为正常对照,使用defensin琢1-3单克隆抗体进行免疫组织化学染色,定量分析defensin琢1-3在各个病理类型LN肾组织及正常肾组织中的表达及分布,并分别与相应的增殖细胞核抗原(PCNA)、肾小球病变活动指数(GAI)和肾间质病变活动指数(TIAI)进行相关性的分析。结果各个病理类型LN肾组织及正常肾组织的肾小球、肾间质中均有defensin琢1-3的表达,其中肾小球的defensin琢1-3的表达在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型LN组明显高于正常对照组,肾间质中defensin琢1-3表达在Ⅳ型LN组高于其他类型的各组及正常对照组。Ⅳ型LN组的肾小球区域的defensin琢1-3的表达与Ⅳ型LN组的肾小球区域的PCNA阳性细胞数(r=0.785,P<O.05)、及GAI评分之间(r=0.749,P<0.05)呈正性线性相关。Ⅳ型LN组的肾间质的defensin琢1-3的表达与其TIAI之间呈正性线性相关(r=0.767,P<0.01)。结论defensin琢1-3可能参与了Ⅳ型LN的发病。

血管紧张素Ⅱ通过p38丝裂原蛋白激酶信号通路诱导巨噬细胞骨调素基因的上调表达

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激巨噬细胞骨调素(OPN)基因表达的模式变化,及p38丝裂原蛋白激酶(p38MAPK)信号通路在AngⅡ上调表达骨调素中的作用。方法 用反转录聚合酶反应(RT-PCR)测定AngⅡ体外刺激RAW264.7细胞骨调素基因表达及p38MAPK特异抑制剂SB202190的影响;用Western印迹测定Ang Ⅱ(1 μmol/L)诱导RAW264.7细胞p38MAPK及其转录因子-激活转录因子2(ATF2)表达的时间模式及SB202190对AngⅡ(1 μmol/L)诱导RAW264.7细胞p38MAPK磷酸化表达的影响。结果 (1)AngⅡ(1 μmol/L)诱导RAW264.7细胞骨调素基因表达呈时间依赖性,3 h骨调素表达略有升高,6、12、24 h骨调素分别升高0.9、2.3及2.4倍(P<0.01);而24 h阴性对照无明显变化,说明骨调素的表达呈诱导分泌性。(2)AngⅡ诱导RAW264.7细胞骨调素基因表达呈剂量依赖性,AngⅡ(1 μmol/L)孵育12 h即可诱导骨调素显著表达,升高2.6倍(P<0.01)。(3)SB202190(5 μmoL/L)在AngⅡ(1 μmol/L)刺激前30 min加入培养基抑制作用最明显,共同孵育12 h,抑制率达到61.7％(P<0.01);而同时和刺激后120 min加入SB202190(5 μmol/L),抑制作用不明显,抑制率分别为20.9％和20.1％。(4)不同浓度SB202190 1、5、10 μmol/L在AngⅡ(1μmol/L)刺激前30 min加入培养基,共同孵育12 h。