MMP-2、MMP-9在大鼠氨基核苷肾病肾组织中的表达及作用探讨

[目的]探讨基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9在氨基核苷肾病大鼠肾组织中的表达及作用。[方法]将SD大鼠分 为正常对照组和实验组(氨基核苷肾病组),后者又分为未治疗组、泼尼松治疗组和依那普利治疗组。观察实验前后每组大鼠 的血生化和尿蛋白变化,同时检测肾脏组织中MMP-2和MMP-9蛋白表达。[结果]氨基核苷肾病大鼠第3天开始出现蛋白尿, 第8天蛋白尿达到顶峰。第4天起肾小球内MMP-2和MMP-9蛋白表达明显增强(与正常组比较均P<0.001)。MMP-2和 MMP-9蛋白表达变化与蛋白尿变化呈显著正相关。泼尼松和依那普利均能抑制氨基核苷肾病大鼠肾脏内MMP-2(P<0.01) 和MMP-9(P<0.01)的表达,并明显减少尿蛋白的排泄。[结论]在氨基核苷肾病大鼠肾脏中,MMP-2和MMP-9表达增强,可 能与该模型的蛋白尿发生有关;泼尼松和依那普利能减轻该模型的蛋白尿可能是通过抑制MMP-2和MMP-9的表达。

不同浓度葡萄糖透析液及LPS对腹膜透析大鼠腹膜组织VEGF及血管增生的影响及其意义

目的探讨不同浓度葡萄糖透析液及LPS对大鼠腹膜组织血管内皮生长因子(VEGF)表达及血管增生的影响,揭示其影响腹膜转运功能的机制。方法SD大鼠分成A、B、C、D、E五组,A组为正常对照组,其余各组分别每天腹腔注射1.50%、2.50%、4.25%和4.25%腹膜透析液,E组同时注射脂多糖。分别用RT-PCR、免疫荧光检测VEGF的表达及新生血管的数目,同时检测各组超滤量。结果VEGF的表达随着透析液葡萄糖浓度增加而增加,E组表达最强,RT-PCR结果显示:E组VEGF mRNA表达较A升高约11倍[(65±11.35)vs(5.33±2.3);P<0.001];同时CD31免疫组化也显示腹膜新生血管的数目也逐渐增多,E组较A组升高约8倍[(12.2±2.65)vs(1.33±1);P<0.001]。且随着透析液浓度增加其超滤量逐渐减少。结论腹膜组织可表达VEGF。高糖透析液和LPS均能促进腹膜VEGF表达、促进腹膜新生血管的增生,从而增加腹膜转运的有效滤过面积,减少超滤量。这可能是葡萄糖透析液及LPS影响腹膜转运功能的重要机制之一。

我国汉族人群Megsin基因C2093T、Uteroglobin基因G38A多态性分布特征的研究

[目的]研究我国汉族人群megsin基因C2093T及uteroglobin基因G38A多态性的分布特征,并与已报道的国外 人群数据比较。[方法]提取201例汉族人基因组DNA,PCR分别扩增含megsin基因C2093T、uteroglobin基因G38A片段,采 用限制性内切酶技术鉴定基因型,并以直接测序证实酶切结果。[结果]所调查的我国汉族人群megsin基因C2093T多态性 分布为CC型85例(42.3％),CT型83例(41.3％),TT型33例(16.4％),与国外人群相比,CC型分布频率显著高于匈牙利 人群(x2=7.917,P=0.005),而TT型分布频率显著低于匈牙利人群(x2=6.228,P=0.01)。C和T等位基因频率分析显示 我国汉族人群同样与匈牙利人群存在显著性差异(x2=11.485,P=0.001)。Uteroglobin GG、GA和AA 3种基因型及等位基因 频率和日本、匈牙利、意大利、朝鲜人群比较,均无显著性差异(P>0.05)。[结论]我国汉族正常人群mesgsin C2093T基因多 态性不同于匈牙利人群,T等位基因频率显著低于匈牙利人群。这种差异有可能是导致一些疾病在不同种族间发病率和临床 表现上存在显著不同的因素之一。我国汉族人群uteroglobin G38A多态性与已报道的国外人群则没有显著差异。

中国汉族人群TCRCα基因-575A/G多态性与IgA肾病临床病理的相关分析

目的:探讨T细胞受体保守域α链基因(TCRCα)-575 A/G多态性与中国汉族人群IgA肾病临床病理的相关关系.方法:PCR-RFLP法和PCR产物直接测序法鉴定基因型,对IgA肾病患者的临床及病理资料进行相关分析,并对病例进行追踪随访.结果:①291例患者临床资料分析显示:在伴有肉眼血尿患者中AA基因型的出现频率显著性升高(P<0.05);在年龄、性别、血压、血尿、蛋白尿、血清IgA水平等临床指标中任何基因型的分布频率均无统计学意义(P>0.05).②294例患者病理资料分析显示:在IgA肾病Haas分级的Ⅱ+Ⅲ级的患者中,AA基因型其分布频率相对于其他基因型有显著增加(P<0.05).③219例IgA肾病患者,TCRCα基因-575 A/G不论是基因型还是等位基因,在肾功能稳定组与进展组相比较均未见显著性差异(P>0.05).结论:中国汉族人群中,TCRCα基因-575 A/G多态性可能和肉眼血尿的发生、系膜增生相关,但可能与肾功能进展不相关.

狼疮肾炎外周血单个核细胞IL-16活化的初步观察

目的:目的:观察狼疮肾炎(LN)外周血单个核细胞(PBMCs)白细胞介素16(IL-16)的分泌及IL-16mRNA的表达。方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测PBMCs IL-16分泌的水平;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测PBMCs IL-16mRNA的表达。结果:①LN患者PBMCs自发分泌IL-16,活动组较静止组、正常对照组增高,存在显著性差异(265.6±102.2vs.120.5±84.1;265.6±102.0 vs.50.9±32.4,P<0.05);②LN活动组与静止组PBMCs IL-16mRNA表达增强,较正常对照组存在显著性差异(5.090±1.815 vs.1.030 ±0.426;3.910±1.430 vs.1.030±0.426,P<0.05),但LN活动组与静止组之间IL-16-mRNA的表达差异没有显著性(5.090 ±1.815 vs.3.910±1.430)。结论:LN患者PBMCs存在IL-16mRNA的高表达和自发的IL-16过度分泌。IL-16可能参与介导LN的发病机制。

Iα1基因hs1,2区B等位基因与IgA肾病的易感性相关

目的研究Iα1hs1,2VNTR多态性与我国IgA肾病的相关关系。方法采集419例肾活检证实的IgA肾病患者及其一级亲属、条件相当的201例健康志愿者血样,提取基因组DNA。用PCR产物直接电泳法鉴定Iα1hs1,2VNTR基因型,采用以家庭为基础的传递/不平衡分析(TDT)和单倍型相对危险度(HRR),以及病例-对照研究分析Iα1hs1,2VNTR多态性与我国IgA肾病的相关关系。结果①TDT分析结果显示Iα1hs1,2VNTR B等位基因从杂合子父母向患者传递的频率显著高于预期值(101Trios,χ2=6.818,P<0.01,扩展TDT分析也得到相同结果(164家庭,χ2=7.583,P<0.01)。②与TDT结果一致,HRR分析同样显示Iα1hs1,2VNTR B等位基因的过度传递(P<0.05,χ2=4.122,HRR=1.180),而BB基因型具有更强的患病倾向(P<0.05,χ2=4.411,OR=1.538)。③病例-对照研究显示IgA肾病组B等位基因频率显著高于正常对照组(χ2=6.968,P<0.05)。结论Iα1hs1,2VNTR基因多态性与我国IgA肾病患者的易感性相关。

易卒中型肾血管性高血压大鼠脑大动脉重塑类型

目的观察易卒中型肾血管性高血压大鼠脑动脉的结构变化。方法将易卒中型肾血管性高血压大鼠第4周和8周时处死,脑大动脉切片用HE染色后,测量这些大动脉重塑参数,对免疫组织化学对纤维连接素蛋白表达进行图象分析。结果易卒中型肾血管性高血压大鼠组血压高于对照组。易卒中型肾血管性高血压大鼠第4周时颈总动脉平滑肌细胞总数(282.5±59.6个)和纤维连接素蛋白表达量(184.3±2.4)较对照组(344.7±50.9个和181.4±3.2)减少,单个细胞面积增加;第8周时,管壁厚度(74.8±12.3μm)、横截面积(233428.3±76487.9μm2)、壁腔比(0.086±0.007)、壁面积比(0.00030±0.00011)、单个细胞面积(547.9±111.8μm2)和纤维连接素蛋白表达量(180.8±2.3)均增加,单位面积细胞数(282.5±59.6个)减少。易卒中型肾血管性高血压大鼠基底动脉横截面积第4周和第8周时(15867.4±1316.9μm2和22556.5±6485.6μm2)均高于对照组(13598.9±1090.8μm2),纤维连接素蛋白表达量第8周时(166.2±5.1)增加。第4周时易卒中型肾血管性高血压大鼠大脑中动脉管腔内直径(208.6±59.6μm)增加,壁腔比(0.094±0.048)和壁面积比(0.00150±0.00040)减少;第8周时管壁厚度(23.3±7.2μm2)、横截面积(16236.2±6538.4μm2)和平滑肌细胞总数(52.2±16.1个)增加,管腔内直径和壁面积比与对照组的差异仍有统计学意义。

间质性肾炎19例临床与病理分析

目的 探讨间质性肾炎的临床与病理特点。方法 回顾分析经肾活检证实的急、慢性间质性肾炎完整病历资料 19例。结果 本组 19例 ,急性患者 7例 ;慢性患者 12例 ,病因明确 9例 ( 4 7 4 % ) ,主要诱发因素是药物( 66 7% ) ;全部病例中以蛋白尿、浮肿、肾功能不全为主要表现 ,仅部分患者出现肾小管功能损害的临床表现 ;其病理特点以肾间质的炎性浸润为主 ,而肾小球、肾小血管基本正常 ;本组 6例急性肾功能不全患者在血透的基础上加用激素治疗 ,效果良好。结论 间质性肾炎的临床表现不典型 ,肾小管间质本身损害的临床表现并不突出 ,其病理的基本特征为 :间质的炎性细胞浸润、水肿或纤维化 ,肾小球、肾小血管基本正常。

我国汉族人群α1基因数目可变串联重复序列分布特征的研究

目的:研究我国汉族人群免疫球蛋白α1基因中3个数目可变串联重复序列(VNTR)多态性分布特征,及其与已报道的高加索人群相比较的特点。方法:从现存数据库中寻找α1基因内的3个VNTR位点,即α1基因3’端的hs1,2增强子内的VNTR1、其上游6Kb的VNTR2和位于α1基因第5外显子的E5VNTR。提取2 0 1例广东汉族人基因组DNA ,PCR分别扩增含上述3个VNTR位点片段,2 % - 3%凝胶电泳分带鉴定基因型,并以测序证实。结果:与高加索人群比较我国汉族人群α1基因VNTR1多态性分布特征表现为:C(3次重复)等位基因频率明显升高(10. 0 %vs 1 0 % ) ,A(1次重复)等位基因频率偏低(30 . 3%vs36. 1% - 39 .4 % ) ,差异显著(χ2 =72 .85 ,P <0 .0 1)。基因型BB占37. 8% ,AB占32. 3% ,AA占12 % ,BC占11 .4 % ,AC占4 5 % ,CC占2. 0 % ,BC、AC基因型分布频率显著高于高加索人群,而AB型分布频率显著低于高加索人群(χ2 =73. 77,P <0 .0 1)。另外两个数据库中报道的VNTR位点(VNTR 2及E5VNTR)在我们所测人群中呈均一分布,PCR产物长度分别为136bp(VNTR 2 )和5 35bp(E5VNTR)。结论:我国汉族人群α1基因VNTR多态性分布与基因组数据库中基于高加索人群的资料不尽相同,其中Iα1hs1,2VN TR1多态性不同于高加索人群。

FcαR1基因5′端调控及UTR区SNPs及其单倍型与华南地区汉族IgA肾病患者预后关系

目的研究我国南方汉族IgA肾病患者Fcct R1基因5’端调控及UTR区SNPs及其单倍型与我国南方IgA肾病患者预后的关系。方法采集266例肾活检证实的IgA肾病患者血样，提取基因组DNA。用PCR产物直接测序法鉴定基因型，每3～6个月查尿蛋白、血肌酐及其他指标随访，以血肌酐浓度比基础值升高1倍以上或死亡作为随访终点。采用单因素相关分析及Logistic多元回归分析各位点多态性及其单倍型与肾功能恶化及预后的关系。结果（1）该区域单倍型对及-27、56位点多态性与肾功能进展显著相关；（2）-27位点基因型TC与TT比较差异显著（P=0．003）；56位点基因型CC与TT比较，P=0．011；单倍型对TCC／CTC与TTT/TTT比较，P=0．000。结论Fcct R1基因第一外显子C56T多态位点基因型与我国南方IgAN患者预后相关。

狼疮肾炎外周血单个核细胞MAPK^(ERK1/2)信号通路活化的观察

目的目的观察有丝分裂原激活的蛋白激酶-细胞外调节激酶(MAPKERK1/2)细胞信号通路在系统性红斑狼疮(SLE)并肾炎(LN)患者外周血单个核细胞(PBMC)活化状态,探讨MAPKERK1/2通路在LN患者免疫异常中的作用及临床意义。方法26例LN患者和21例正常健康对照者进入研究,取外周血分离PBMC进行体外培养,利用蛋白印迹法(Western Blot)测定PBMC MAPKERK1/2蛋白磷酸化活化水平,比较LN与正常对照PBMC MAPKERK1/2活化水平的差异,并分析MAPKERK1/2活化水平与临床狼疮疾病活动的关系。结果LN患者PBMC中MAPKERK1/2信号通路呈高度活化状态,与正常健康对照有显著性差异(P<0.05);MAPKERK1/2蛋白磷酸化活化水平与狼疮疾病活动评分(SLEDAI)、血清抗双链DNA抗体呈正相关关系(P<0.05)。结论LN患者PBMC MAPKERK1/2信号通路异常活化,并与临床狼疮疾病活动密切相关。

NAD(P)H氧化酶及其在高血压血管损害中的作用

血管活性氧簇 (ROS)尤其是超氧阴离子 (·O2 )的增加 ,在高血压引起的血管功能和结构改变中起重要作用。NAD(P)H氧化酶是血管产生·O2 的主要酶 ,并参与了这一损伤机制。

肾移植术后巨细胞病毒感染与排斥反应

人类巨细胞病毒(HCMV)感染是免疫抑制状态下的器官移植受者常见而严重的并发症。肾移植术后巨细胞病毒感染和排斥反应是密切相关的两过程,并通过产生一系列相似的细胞因子、化学因子和生长因子共同作用于移植肾,导致移植肾功能丧失。

多层螺旋CT血管造影评估血液透析患者导管相关中心静脉狭窄的前瞻性研究

目的比较多层螺旋CT血管造影(MDCTA)在评估血液透析患者导管相关中心静脉狭窄(CVS)的准确性。方法选取2016年5月至2018年4月在四川大学华西医院行MDCTA和DSA的导管相关CVS的血透患者122例,记录患者有无导管相关中心静脉狭窄或闭塞及病变部位和数量。统计分析MDCTA取代DSA诊断CVS的敏感性、特异性、准确性、比值比(OR)、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)、阳性似然比(PLR)和阴性似然比(NLR)。结果本研究共纳人122例患者的8 5 4个血管段进行分析,MDCTA检测到112处明显狭窄或闭塞的静脉,而DSA证实其中有8 6处狭窄,且未被MDCTA检测到的还有66处。MDCTA在诊断CVS上具有很高的特异性(96.30%),但其灵敏度却很低(56.58%)。其PPV、NPV、PLR、NLR分别是76.79%、91.11%、15.27、0.45,OR值为38.8 8,准确率为89.23%。不同的中心静脉分层分析显示MDCTA检测CVS的特异性分别为:上腔静脉88.7 5%、左无名静脉98.13%、右无名静脉95.12%、左锁骨下静脉99.15%、右锁骨下静脉97.44%、左颈内静脉97.44%和右颈内静脉95.12%,而敏感性分别为90.48%、66.67%、67.50%、80.00%、40.00%、20.00%和10.00%。结论MDCTA在检测导管相关CVS方面具有很高的特异性,MDCTA阳性表现有助于临床诊断,但因较低的敏感性而不宜用于排除CVS。

MAPK^(ERK1/2)信号通路在狼疮肾炎外周血单个核细胞表达白细胞介素-6mRNA中的作用

目的探讨有丝分裂原活化蛋白激酶-细胞外调节激酶1/2(MAPKERK1/2)信号通路在狼疮肾炎(LN)患者外周血单个核细胞(PBMC)中自发高水平表达白细胞介素(IL)-6mRNA中的作用。方法分离培养患者PBMC,利用蛋白免疫印迹法和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法分别检测MAPKERK1/2磷酸化活化程度和IL-6mRNA表达水平,并与正常人群比较。结果26例LN患者与21名健康对照者比较,LN患者PBMCMAPKERK1/2信号通路呈高度活化状态,体外培养可自发表达高水平IL-6mRNA,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。应用特异性阻断剂PD98059阻断LN患者PBMCMAPKERK1/2信号通路活化可显著抑制IL-6mRNA的自发高表达。结论LN患者PBMC中MAPKERK1/2信号通路异常活化,并在PBMC自发高水平表达IL-6mRNA中起作用。