靶向多功能纳米造影剂对肝癌细胞MRI显像和基因传输的研究

目的观察叶酸靶向化聚乙烯亚胺包被的超顺磁性四氧化三铁(Fa-PEI-SPIO)转染Hep3B肝癌细胞的显像效果和基因传输效果。方法 Fa-PEI-SPIO纳米造影剂复合增强型绿色荧光蛋白(EGFP)真核表达质粒后转染肝癌Hep3B细胞。通过激光共聚焦实验检测纳米造影剂的靶向传输效率;通过MRI扫描检测纳米造影剂的显影效果;通过流式细胞术检测纳米造影剂的基因传输效率。结果激光共聚焦实验观察发现Fa-PEI-SPIO/EGFP纳米造影剂可以高效携带荧光分子进入肝癌细胞,转染后细胞中在细胞核的蓝色荧光周围出现大量纳米复合物的绿色荧光。MRI?T2扫描观察发现靶向化纳米造影剂中携带的SPIO发挥了良好的显影效果,转染后肝癌细胞的T2信号明显降低。流式细胞术检测发现,靶向化纳米造影剂明显提高了EGFP真核表达质粒在细胞中的表达效率,表达效率高达(97.72?±?8.23)﹪。结论多功能纳米造影剂Fa-PEI-SPIO可高效负载MRI和荧光造影剂实现对肝癌细胞的高效率敏感显像,并可同时实现目的基因的传输。

关于老年人弥漫性腹膜炎疾病预后因素的临床研究

目的探讨老年急性弥漫性腹膜炎(AGP)的临床特点和影响预后的因素。方法对92例老年AGP病人的临床资料进行回顾性分析。结果老年AGP以急性穿孔、恶性肿瘤和急性感染为主,下段消化道和恶性肿瘤引起的AGP并发症发生率和死亡率明显增高,并存疾病数量增多和发病至治疗时间延长也使并发症和死亡率增高。结论老年AGP临床表现不典型、病情重、进展快,需早就诊、早治疗;下段消化道疾病、恶性肿瘤、并存疾病数量多和发病至治疗的时间长是预后不良的因素。

携带缺氧诱导因子-1α-siRNA的叶酸靶向化的磁性纳米复合物抑制肝癌干细胞增殖的实验研究

目的本研究采用叶酸靶向化的聚乙烯亚胺包被的磁性纳米复合物(Fa-PEISPIO)携带HIF-1α-si RNA真核表达质粒转染CDl33+Hep3B肝癌干细胞,观察其对肝癌干细胞增殖能力的抑制效果并探讨其起效机制。方法采用CD133-PE荧光抗体流式分选Hep3B细胞中的CD133阳性细胞。采用流式细胞术检测分选前后细胞CDl33表达量。将Fa-PEI-SPIO纳米复合物与含HIF-1α小干扰RNA(HIF-1α-si RNA)、阴性对照(NC)-si RNA的真核表达质粒复合,分别形成Fa-PEI-SPIO/HIF-1α-si RNA和Fa-PEI-SPIO/NCsi RNA两种靶向化纳米复合物。分别应用两种纳米复合物转染CDl33^+Hep3B肝癌干细胞,建立Fa-PEI-SPIO/HIF-1α-si RNA(FH)组和Fa-PEI-SPIO/NC-si RNA(FN)组,另设立未转染对照(CT)组。Western-blot法检测各组细胞的HIF-1α和Cyclin D1蛋白表达。平板克隆形成实验检测各组细胞的克隆形成能力。流式细胞术检测各组细胞的细胞周期。CD133阳性细胞比例、蛋白平均相对表达量、有效克隆形成数量和细胞周期等实验数据以x±s表示,3组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验。结果分选前Hep3B肝癌细胞检测CD133阳性率为(2.95±0.04)﹪,分选后CDl33阳性率增加到(92.59±0.05)﹪,差异有统计学意义(t=34.88,P=0.00)。FH组CDl33^+Hep3B肝癌干细胞HIF-1α、cyclin D1蛋白平均相对表达量分别为0.11±0.02、0.38±0.03,CT组分别为0.38±0.07、0.59±0.05,差异具有统计学意义(LSD-t=15.88,23.75;P=0.01,0.00)。FH组和CT组CDl33+Hep3B肝癌干细胞的有效克隆数量为分别为(25.92±5.22)个/孔和(364.00±13.93)个/孔,FH组的有效克隆数量明显低于CT组(LSD-t=-37.67,P=0.00)。与CT组相比,FH组细胞G0/G1期的细胞数量明显增大,出现了明显的G0/G1期阻滞,S期和G2/M期细胞数量明显降低,分裂活跃性较CT组降低。结论纳米复合物Fa-PEI-SPIO可高效负载HIF-1α-si RNA真核表达质粒抑制细胞内HIF-1α表达,进而通过降低cyclin D1表达水平影响细胞周期,并抑制CDI33^+Hep3B人肝癌干细胞的增殖。

TCR-T细胞免疫疗法治疗肝细胞癌的研究现状及策略

肝细胞癌是原发性肝癌的主要病理类型,目前的临床治疗方法难以达到理想的效果,迫切需要探索新的、有效的治疗方法。T细胞受体基因工程改造T细胞(TCR-T)疗法因在实体瘤中的成功应用,被认为是最有前景的免疫治疗方式之一。本文主要从TCR-T治疗在肝细胞癌中的研究进展进行综述,并针对性提出一些解决策略,包括优化TCR亲和力、降低毒性反应、减少外源性和内源性TCR双链错配、改善肿瘤微环境、促进TCR-T细胞扩增。

手术与经皮消融治疗复发性肝母细胞瘤的疗效比较

目的比较手术与经皮消融在复发性肝母细胞瘤(HB)患儿中的疗效。方法回顾性分析于2013年1月至2019年3月在中山大学附属第一医院接受手术(14例)或经皮消融(8例)治疗的22例复发性HB患儿。利用t检验、Wilcox秩和检验、χ2检验等方法比较2组患儿的基线指标或并发症发生率的差异,绘制首次复发治疗后患儿的生存曲线,并利用Log-rank检验比较2组患儿的3年总体生存率及无事件生存率的差异。结果2组患儿的基线指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。消融组和手术组患儿的3年总体生存率分别为75.0%和78.6%(P=0.814),3年无事件生存率分别为50.0%和40.0%(P=0.880)。并发症发生率手术组较消融组更高(78.6%vs 25.0%),差异具有统计学意义(χ2=6.044,P=0.026)。2组患儿均无严重并发症发生。结论经皮消融治疗复发性HB安全有效,与二次手术相比预后无明显差异。

等待手术时间影响因素分析及其对BCLC-B期肝细胞癌患者术后预后的影响

目的探讨等待手术时间影响因素及其对BCLC-B期肝细胞癌(肝癌)患者术后预后的影响。方法回顾性分析2008年6月至2017年6月中山大学附属第一医院肿瘤中心收治的118例BCLC-B期肝癌患者临床资料。其中男103例,女15例;平均年龄(53±2)岁。患者均签署知情同意书,符合医学伦理学规定。采用分段多项式Cox回归分析确定等待时间分组界值,多因素Logistic回归分析等待手术时间影响因素,生存分析采用Kaplan-Meier法和Log-rank检验,等待时间对预后的影响分析采用Cox比例风险回归模型。结果患者等待时间1～61 d,中位时间12 d。等待时间最佳界值为14 d,按此界值将患者分为等待时间≤14 d和>14 d两组。Logistic回归分析显示,肿瘤直径是患者等待手术时间的保护因素(HR=0.86,95%CI:0.76～0.99;P<0.05),而肝硬化是患者等待手术时间的独立危险因素(HR=2.46,95%CI:1.10～5.47;P<0.05)。多因素Cox回归分析显示,等待时间与患者无复发生存期无明显关系(HR=0.72,95%CI:0.39～1.31;P>0.05);等待时间与患者总体生存期亦无明显关系(HR=0.59,95%CI:0.25～1.38;P>0.05)。结论我国BCLC-B期肝癌患者的手术等待时间较短,肿瘤直径和肝硬化是手术等待时间的独立影响因素,但等待时间并不影响患者的生存预后。

环状RNA circEIF6在肝细胞癌中的表达及功能研究

目的探讨环状RNA circEIF6在肝细胞癌中的表达及其对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法从GEO数据库下载肝细胞癌与癌旁组织有差异表达的circRNA数据集GSE94508和GSE97332,选取在肝癌组织中高表达的circEIF6作为研究对象。选取2015年1月至2018年12月间中山大学附属第一医院确诊为肝细胞癌并行根治性切除术(术前均未经过放疗和化疗治疗)患者15例的肿瘤组织标本和配对的癌旁肝组织标本。采用qPCR检测circEIF6的表达;采用siRNA敲低circEIF6的表达,通过CCK8、EdU、平板克隆实验、Transwell实验方法检测肝癌细胞系Huh7细胞的增殖、侵袭与迁移能力的改变。结果筛选出肝癌差异表达circRNA共81个,对其中表达上调的73个circRNA对应的母基因进行GO分析。circEIF6在肝癌组织中的表达明显高于癌旁肝组织(P<0.05)。敲低circEIF6后,肝癌细胞系Huh7细胞增殖能力明显下降(P<0.05),Huh7细胞的侵袭能力和迁移能力明显下降(P<0.05)。结论circEIF6在肝癌组织中高表达,对肝癌细胞增殖、侵袭及迁移能力均有促进作用,值得进一步的机制探究。