地中海贫血“integration-free”诱导多能干细胞的建立及造血分化的研究

目的:建立无外源基因整合(integration-free)的地中海贫血患者特异诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,i PSC),并研究其向造血前体细胞分化的可能性。方法:用核转染的方法将表达Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc和Lin28转录因子的质粒p EB-C5以及表达SV40大T抗原的质粒p EB-Tg导入引产巴氏水肿胎皮肤成纤维细胞中,将其重编程为i PSC后检测其向3个胚层细胞分化的特性。将i PSC细胞与小鼠OP9细胞共培养向造血前体细胞诱导分化,检测造血前体细胞特异性抗原。结果:成功建立了巴氏水肿胎皮肤成纤维细胞来源的α地中海贫血患者特异i PSC系,其具有向3个胚层分化的能力,与OP9细胞共培养9 d后可检测到造血前体细胞标记CD34的阳性率为18.7%,CD34和CD45双阳性为12.2%。结论:巴氏水肿胎皮肤成纤维细胞可成功诱导成"integration-free"i PSC,该细胞系具有向3个胚层分化的能力,与OP9共培养可向造血前体细胞分化。

听觉行为观察及高危个体耳聋基因筛查对儿童迟发性听力损失早期诊疗的临床意义研究

目的:探讨基层医院对儿童迟发性听力损失早期发现、早期干预的方法。方法:对52例出生时听力筛查通过,但在后续随访观察及例行听力保健中发现听觉行为异常的儿童进行听力学及影像诊断并给予相应干预,7例有遗传性聋高危因素的儿童转诊到上级医院行耳聋易感基因筛查,根据筛查结果给予预防指导及听力随访干预。结果:儿童听觉行为观察发现迟发性听力损失及言语能力减退52例,其中听神经病4例,单侧感音神经性聋4例,分泌性中耳炎27例,双耳感音神经性聋13例,儿童孤独症4例。7例有遗传性聋高危因素儿童转诊行耳聋易感基因筛查,线粒体DNA 1555A>G异质性突变2例,GJB2 235delc杂合突变3例,随访至今听力正常;GJB2 235delC和299del AT位点复合杂合突变1例,对患儿密切随访发现其于2岁左右出现听力下降,及时给予助听干预;1例未查及阳性突变,密切随访。结论:儿童听觉行为观察及对口转诊行高危个体耳聋基因筛查能及时发现儿童迟发性听力损失,适合在基层医院推广。