单核苷酸多态性芯片与染色体核型分析在唐氏筛查高风险孕妇产前诊断中的比较研究

目的:探讨单核苷酸多态性芯片(SNP array)在唐氏筛查高风险孕妇胎儿染色体分析中的应用价值。方法:选取312例因唐氏筛查高风险的孕妇,行羊膜腔穿刺术后获得羊水,对羊水进行G显带核型分析和SNP array检测,比较核型分析与SNP array检测结果,并按年龄分组比较拷贝数变异(CNVs)的发生率差别。结果:核型分析和SNP array均准确发现2例21三体(0.64%),6例核型分析提示染色体平衡重组(1.92%)的样本经SNP array分析证实不存在重排片段重复或缺失。在303例核型正常的胎儿羊水细胞中,SNP array检测发现176例CNVs,其中良性CNVs 106例,临床意义不明确的CNVs(VOUS)61例,新发CNVs(de novo CNVs)9例,未发现已知的致病性CNVs。唐氏筛查高风险组与唐氏筛查高风险合并高龄组CNVs的分布差别无统计学意义(P>0.05)。此外,本研究中首次报道14种CNVs。结论:SNP array可进一步确定核型分析的平衡易位是否存在染色体微缺失/重复。在核型正常的胎儿中,SNP array可检测出大量拷贝数异常,发现14种新的CNVs但现有数据库无法判断其临床意义,需进一步研究确认。此外,孕妇年龄对胎儿基因组中新发CNVs的发生率无明显影响。

临床医生对儿童孤独症的了解状况抽样调查

目的抽样调查临床医生对儿童孤独症的了解状况。方法随机抽选中山大学附属第三医院195名临床医生,采用自编儿童孤独症知晓率调查表(共13题)对被调查医生进行问卷调查和结果分析。结果所调查的195名临床医生中,46.3%的被调查者对儿童孤独症的知识缺乏全面了解,对儿童孤独症的了解程度依次为:儿科医生>精神科医生>妇产科医生>神经心内科医生>心内科医生>普外科医生。Logistic回归分析表明被调查者的博士学历、工作时间大于5年以及中高级职称者相对对儿童孤独症比较了解。结论临床医生对于儿童孤独症的总体了解程度较低,不利于儿童孤独症的早期诊断和干预。

广州市地区7234例新生儿耳聋基因突变分析

目的分析广州地区7234例新生儿4个常见遗传性耳聋基因热点突变情况,为广州地区遗传性耳聋的防治提供依据。方法收集广州市天河区中山大学附属第三医院2015年6月至2019年1月分娩的7234例新生儿脐带血液标本进行耳聋基因热点检测,基因突变新生儿行Sanger测序验证及基因外显子测序。结果检测到耳聋基因突变携带者266例(3.68%),其中GJB2基因突变159例(22.0%),SLC26A4基因突变85例(1.18%)。在266例的基因携带者中,GJB2 c.235delC杂合突变占49.6%(132/266),SLC26A4 IVS7-2A>G突变占28.2%(75/266),其余位点占22.2%。携带者一代测序验证结果与耳聋基因筛查结果一致,基因外显子测序中发现有3名双重突变患儿,两例为GJB2 c.235 del C与GJB2 c.109G>A双重杂合突变患儿,另一例为SLC26A4 IVS 7-2 A>G与SLC26A4 c.1983C>A双重杂合突变患儿,3例患儿经父母血液标本验证,双重杂合位点分别遗传自父母。结论本研究7234例新生儿聋基因筛查中,GJB2基因突变频率最高,其次是SLC26A4基因,为耳聋儿童的早期发现与早期干预提供参考与指导。现行热点突变检测位点可能漏检其他突变位点,可根据本地检测情况调整或者制定适合本地的筛查方案。

一例无症状8号三体的遗传学构成初探

目的针对一例无症状的8号染色体三体的患者,研究其8号染色体的来源机制和作用机制。方法利用患者外周血进行淋巴细胞培养及G显带技术分析,以确定淋巴细胞核型;利用患者外周血总DNA进行SNP微阵列技术分析,以确定各类有核细胞的分子核型。结果患者外周血淋巴细胞核型为47,XX,+8;患者外周血各种有核细胞总DNA基因型为47,XX,+8。结论确诊患者外周血有核细胞的核型均为47,XX,+8,并且多出来的那条染色体可能由于第二次减数分裂不分离而导致的,尚不能明确该患者没有明显临床症状的机制。

抗戾解毒汤体内抑制小鼠高致病性禽流感病毒H5N1增殖

目的探讨抗戾解毒汤体内抑制高致病性禽流感病毒H5N1增殖的效果。方法小鼠麻醉后使用高致病性禽流感病毒H5N1的鼠适应株滴鼻以感染,感染后120 min内,实验组给予抗戾解毒汤灌胃,奥司他韦组给予奥司他韦溶液腹腔注射,对照组给予PBS缓冲液灌胃,之后观察体重变化和死亡率,并通过实时PCR方法检测肺部病毒负载水平。结果实验组存活率(80%)较奥司他韦组(53.3%)和对照组(3.3%)显著提高(P<0.01),实验组体重下降也低于其他两组;实验组肺部病毒负载水平较对照组显著降低(P<0.01),和奥司他韦组无明显差异(P>0.05)。结论抗戾解毒汤对感染H5N1病毒的小鼠的病毒增殖抑制作用明显,且保护作用强,可以作为流感病毒的备选或者辅助药物。

FISH检测石蜡包埋组织切片的理想消化时间

目的探讨石蜡包埋组织切片进行荧光原位杂交(FISH)检测前合适的酶消化时间。方法62例乳腺癌石蜡包埋组织切片,将其中的21张石蜡包埋的组织切片进行间隔5min的梯度时间酶消化,然后光镜下及加入DAPI后荧光显微镜观察。随后对剩余的41张切片继续杂交过程,对杂交信号进行观察。结果15～20min是一个比较理想的消化时间,背景干净,杂交信号理想,能够很好地进行判读。对剩余的41张石蜡包埋切片进行15～20min的消化后均获得了满意的杂交信号。结论15～20min是石蜡包埋切片理想的消化时间。不同组织标本及实验室间略有差异。故建议不同实验室甚至不同批次的标本在进行FISH技术杂交检测之前,应首先对酶消化时间进行调整。

中国儿童孤独症SHANK3拷贝数变异及其临床表型特征

目的检测典型孤独症患儿SHANK3基因拷贝数变异（CNVs）发生率并描述其临床表型特征，并探讨临床应用多重连接依赖探针扩增技术（MLPA）进行孤独症病因学诊断的可行性。方法收集本院确诊为典型孤独症的患儿及其直系亲属的基因组DNA，采用MRCP343-C1AUTISM-1MLPA试剂盒进行CNVs筛查。结果共收集来自102个家系的109例典型孤独症患儿，男女比例为4．45：1。发现2例患儿出现SHANK3微缺失，检出率约为2％（2／109）。结论SHANK3基因的CNVs可能解释约2％的典型孤独症病例，是孤独症的一个重要遗传学变异基础；阳性病例倾向于出现严重的三大核心症状及智力缺损的表型；MLPA作为快速、准确的CNVs检测方法，有助于临床开展孤独症的病因学研究。

医学遗传学“PBL”教学改革初试

目的:探讨PBL(Problem-based learning)在医学遗传学教学中的应用效果。方法:随机选取临床专业中的两个小班学生作为实验组,采用PBL教学方法,另选择进行传统教学的两个小班学生作为对照组。对PBL教学效果的主观评价采用实验组学生问卷调查方式,客观评价通过比较两组考核成绩的方式。结果:实验组80%以上的学生认为PBL教学方法在学习兴趣、学习主动性、临床思维培养和知识面扩展方面优于传统教学方法,两组学生的试卷在临床症状、诊断方法和发病机制的题目得分率,均明显高于对照组(P<0.05)。结论:PBL教学在医学遗传学中取得较好的教学效果,与传统教学相结合的综合教学,是未来医学遗传学教学改革的趋势。

孕母血清游离β绒毛膜促性腺激素时间分辨荧光免疫试剂盒的研制与评价

目的研制一种用于产前筛查孕母血清游离β绒毛膜促性腺激素（freehCGβ）的时间分辨荧光免疫（TRFIA）试剂盒。方法采用2株freehCG13单克隆抗体（McAb），一株用于固相包被（3μg／ml），另一株用于标记铕（Eu3＋）制备Eu3＋-freehCG13MeAb，以β-萘甲酰三氟丙酮为主要成分的增强液，应用双抗体夹心法建立freehCGBTRFIA法，并对其进行性能评价。采用线性回归分析及配对t检验进行统计学分析。结果该试剂盒的剂量一反应曲线线性相关系数（r）达0．9990；分析内、分析间变异系数（CV）均小于10．00％；标准品各点实测值与标示值的偏差（DIFF）均小于5．00％；灵敏度不高于0．20ng／ml；以国家标准品为对照，标准品效价比在0．9130～1．100间；与人促甲状腺激素（hTSH）、人黄体生成素（hLH）、人卵泡刺激素（hFSH）和人绒毛膜促性腺激素（hCG）交叉反应低；线性范围为2．00—200ng／ml；与同类国外试剂比对，线性回归方程为y=x＋0．0565，r=0．9771，检测结果间差异无统计学意义（t=0．1839，P〉0．05）；国内外同类仪器比对检测，线性回归方程为y=0．9894x＋0．0957，r=0．9995，检测结果间差异无统计学意义（t=-0．9669，P〉0．05）；室间质量评价实测值与靶值偏倚（-11．93％～7．01％）符合标准；干扰实验表明乙二胺四乙酸钾（EDTA．K2）≥0．54mmol／L、柠檬酸钠≥1．06mmol／L、草酸钾（K2C204H20）≥2．12mmol／L、氟化钠（NaF）≥29．76mmo]／L时，自制试剂盒检测结果明显偏低（干扰程度均〉10％），肝素≤150U／L、血红蛋白≤12g／L、三酰甘油≤21．54mmol／L和胆红素≤818txmol／L对该试剂盒检测结果无明显干扰（干扰程度均〈10％）；温度升高会使样本检测结果偏高。结论该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、准确度好、线性范围宽等优点，与国外的同类产品性能相仿，能满足临床需要。

时间分辨荧光免疫法定量测定孕妇血清中甲胎蛋白含量

目的探讨孕妇血清甲胎蛋白(MSAFP)含量与孕周、孕妇体质量和孕妇年龄的关系。方法自建MSAFP时间分辨荧光免疫测定法(TRFIA)并对其进行评价,采用自建方法定量检测孕妇血清3711例,建立实验室参考值,分析AFP浓度与孕周、孕妇体质量和孕妇年龄的关系。结果自建AFP-TRFIA方法灵敏度优于1.0U/ml,线性范围为1.00～1000.00U/ml,分析内、分析间变异系数(CV)分别不超过10.0%、15.0%,与国外同类试剂比对结果相关性好(r=0.9856)。在13～13周+6d,14～14周+6d,15～15周+6d,16～16周+6d,17～17周+6d,18～18周+6d,19～19周+6d,20～20周+6d,21～21周+6d各孕周的MSAFP含量中位数(M)分别为16.51U/ml,23.81U/ml,29.98U/ml,32.96U/ml,36.86U/ml,43.01U/ml,49.61U/ml,59.66U/ml,71.11U/ml。各孕周MSAFP平均浓度或浓度中位值与孕周呈线性正相关,r分别为0.9766,0.9832。各体质量段MSAFP浓度与孕妇体质量呈负相关,r在-0.9929～-0.9142。同孕周组内,各年龄段间的MSAFP浓度均数差异无统计学意义(P>0.05)。结论自建AFP-TRFIA法检测性能能满足临床应用的需要。MSAFP浓度与孕周和孕妇体质量密切相关,在产前筛查时要准确校对以上因素。