2013-2016年广州市黄埔区综合性三甲医院血培养分离菌的分布及耐药性

目的了解2013-2016年广州黄埔区血培养分离菌的构成及耐药性,为临床合理使用抗生素提供参考。方法2013-2016年广州市黄埔区三家综合性三甲医院血培养标本分离菌采用Bact/Alert 3 D全自动血培养仪培养,VITEK-2 Compact微生物分析系统及Micro Scan Walk Away 96全自动微生物分析系统进行菌株鉴定及药敏试验,按CLSI 2016年版标准判断结果,数据采用软件WHONET 5.6分析。结果 2013-2016年共送检8 145份血培养标本,共获得分离菌804株,其中革兰阴性菌占52.24%,革兰阳性菌占47.76%。居前四位的分离菌分别为凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌,分别占26.00%、17.66%、13.68%、9.08%。甲氧西林耐药凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)和甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)分别占CNS和金黄色葡萄球菌的76.56%和43.84%,未检出对万古霉素、利奈唑胺耐药菌株。大肠埃希菌对碳青霉烯类耐药率为1.5%~10%,肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类耐药率为2.6%~4.0%。铜绿假单胞菌对碳青霉烯类的耐药率为20.0%~38.1%,鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类的耐药率为29.4%~38.9%。结论血培养分离菌革兰阴性菌分离率高于革兰阳性菌,分离株对常用抗生素耐药性仍严重,尤其非发酵革兰阴性菌对碳青霉烯类耐药率较高,应合理应用抗生素,尽可能缓解细菌耐药率的上升。

申克孢子丝菌TPS基因生物信息学分析

目的:分析和预测申克孢子丝菌海藻糖磷酸合成酶(TPS)基因及其编码蛋白的生物信息学特征及功能。方法:利用生物信息学软件和网站分析预测申克孢子丝菌TPS基因及其编码蛋白的结构和功能特征。结果:申克孢子丝菌TPS基因全长为2 864 bp,编码905个氨基酸。Target P和MotifScan预测该蛋白定位于胞浆中,具有糖基转移酶、海藻糖磷酸酶两大功能域及丰富的修饰位点,其中磷酸化位点尤为丰富,包含cAMP依赖性磷酸激酶、蛋白激酶C(PKC)和酪氨酸激酶(CK2)磷酸化位点。TPS蛋白是亲水性蛋白,无跨膜结构,未发现信号肽。结论:预测申克孢子丝菌TPS基因编码蛋白位于胞浆中,具有糖基转移酶、海藻糖磷酸酶两大功能域及丰富的修饰位点的结构功能特点,可行相应小分子抑制剂筛选以开发新型抗真菌药物。

无创性预测乙肝肝硬化门脉高压性胃病的Logistic回归模型

目的 探讨乙型肝炎肝硬化患者中门脉高压性胃病（PHG）发生的危险因素,建立无创性预测PHG的Logistic回归模型.方法 回顾性分析2012年3月至2014年3月中山大学附属第三医院诊治的234例乙肝肝硬化患者的临床资料,把是否发生PHG作为应变量,对各自变量进行单因素筛选分析,将有意义的各无创性自变量进一步行多因素非条件Logistic回归分析,建立Logistic回归 模型,计算各因素的优势比（0R）,并应用受试者工作特征（ROC）曲线评价该模型判断PHG的准确度、灵敏度和特异度.结果 经单因素Logistic回归分析,筛选出肝功能失代偿、白蛋白（ALB）、胆红素（TB）、凝血酶原时间（PT）、血小板（PLT）、白细胞（WBC）、门静脉管径、脾指数、脾门静脉内径、内径比、PLT脾脏体积比、食管静脉曲张（EV）及胃底静脉曲张（GV）对PHG发生的影响差异有统计学意义（P＜0.05）.多因素分析显示肝功能失代偿（X1）、TB（X2）、PLT（X3）和脾门静脉内径（X4）是PHG发生的危险因素,所建立的回归模型为Logit P=-2.667＋2.186X1-2.167X2＋0.725X3＋0.976X4.该模型对门脉高压性胃病综合判断准确率为79.1％,灵敏度77.2％,特异度80.8％.结论 肝功能失代偿、TB、PLT和脾门静脉内径是PHG发生的危险因素,由无创性各指标建立的回归模型为Logit P=-2.667 ＋2.186X1-2.167X2 ＋0.725X3 ＋0.976X4。

中段尿分离病原菌的分布与耐药分析

目的探讨广州黄埔区三家医院尿培养分离菌的分布特点及耐药性,为临床合理使用抗菌药物提供参考。方法收集2013年1月-2016年6月广州黄埔区三家综合性三甲医院的中段尿标本分离菌2 978株,采用全自动微生物鉴定/药敏测试系统对分离菌株进行细菌鉴定及药敏试验,观察分析病原菌分布特点及耐药性情况。结果 2 978株病原菌中革兰阳性菌546株占18.33%、革兰阴性菌2 432株占81.67%;居前四位的病原菌分别为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、粪肠球菌、铜绿假单胞菌,分别占46.68%、12.29%、9.64%、6.01%;粪肠球菌对呋喃妥因、利奈唑胺、万古霉素及替加环素耐药率较低,均<10%,屎肠球菌对氨苄西林、高浓度庆大霉素、高浓度链霉素、利福平、环丙沙星、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药率较高,均>60%;产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌检出率分别为61.01%(848/1390)和53.01%(194/366);肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗菌药物较敏感。结论尿培养分离病原菌以革兰阴性菌为主,耐药菌株分离率高,定期监测和分析尿培养分离病原菌的分布特点及耐药性变化,对指导临床合理使用抗菌药物具有重要意义。

肝移植患者术后肺部感染阿萨希丝孢酵母菌的临床与药物敏感性分析

目的探讨肝移植患者术后肺部感染阿萨希丝孢酵母菌的临床表现及药物敏感性,提高临床有效治疗和前期预防意识。方法回顾性分析2014年9月-2015年4月中山大学岭南医院4例肝移植术后感染阿萨希丝孢酵母菌患者的临床资料,对送检标本做病原菌培养、鉴定及药敏试验,综合分析肝移植术后阿萨希丝孢酵母菌感染的临床特点,数据采用SPSS 17.0软件进行统计分析。结果肝移植术后阿萨希丝孢酵母菌肺部感染临床表现主要为呼吸系统感染的症状;肝脏移植、激素、免疫抑制剂、广谱抗菌药物、静脉置管、使用呼吸机等是肝移植术后阿萨希丝孢酵母菌肺部感染的高危因素,该菌对氟康唑、伏立康唑等多种抗真菌药物敏感,患者感染预后较差均死亡。结论肝移植术后相关治疗容易导致阿萨希丝孢酵母菌肺部感染,该菌感染预后差但对多种抗真菌药物敏感,及早发现及目标用药是控制肝移植术后该菌侵袭性严重感染的关键。

CD31内皮细胞抗体靶向荧光成像在肝段标记中的实验研究

目的探讨CD31内皮细胞抗体靶向荧光成像在肝段标记中的应用价值。方法采用免疫荧光法筛选具有快速结合特性的内皮细胞特异性抗体CD31,使用偶联荧光染料Alexa Fluor 647(AF647)定性及定量评价CD31抗体结合特性。采用体外内皮细胞染色分析CD31荧光抗体定位、半衰期及细胞毒性。单细胞悬液模型分析CD31抗体捕获效率。离体肝脏灌注模型分析CD31抗体灌注剂量及捕获效率的关系。荧光显微镜分析灌注肝段与非灌注区差异并定量分析荧光对比度。两组CD31抗体免疫荧光染色半最大效应浓度(EC50)比较采用t检验。结果抗小鼠CD31抗体能在10 s与内皮细胞快速特异性结合。定量分析显示,AF647荧光标记CD31抗体后仍具有快速结合特性;AF647荧光标记CD31抗体后孵育10 s和15 min,EC50值分别为(4.23±0.86)、(0.72±0.10)μg/ml,明显高于纯抗体的(1.21±0.24)、(0.32±0.07)μg/ml(t=5.877,5.928;P<0.05)。细胞染色显示CD31荧光抗体定位于细胞膜及细胞质,半衰期为5 h,无细胞毒性;单细胞悬液结合模型显示抗体捕获效率可达80%。体外灌注模型显示CD31荧光抗体可有效被血管内皮细胞捕获,捕获效率随着抗体浓度加大呈轻度下降趋势,灌注200 ng时捕获效率可达(47±8)%,灌注区域的荧光强度可达到非灌注区的(2.4±0.5)倍。结论CD31内皮细胞抗体靶向荧光成像具有安全、有效、快速、特异性标记特点,是肝段标记的一种潜在应用方法。

申克孢子丝菌PalI和PalI样蛋白生物信息学分析

为初步了解申克孢子丝菌Sporothrix schenckii基因组中真菌特有蛋白PalI和PalI样蛋白的生物学特征,利用在线生物信息学分析软件,对两蛋白理化特征、功能域、二级结构、抗原表位等进行分析预测。发现两蛋白理论分子量分别为24.6kDa和75.6kDa,等电点均偏碱性;属于同一蛋白家族,具有相同的功能域和多个PKC磷酸化位点;两蛋白在近氨基端区域相似度较高,并与其他模式真菌中同源蛋白有很高相似度;同时,两蛋白都有跨膜区,氨基端序列三级结构极为相似,并有丰富的抗原表位。通过生物信息学分析对申克孢子丝菌PalI和PalI样蛋白生物学特征有了初步的认识,为后续实验研究提供有力支持。

应用他克莫司治疗的肝移植术后患者凝血功能变化及意义

目的 探讨应用他克莫司免疫治疗的肝移植患者术后凝血功能的变化及意义.方法回顾性分析2012 年5 月至2014 年12 月在中山大学附属第三医院行肝移植治疗的63 例患者临床资料.其中男51 例,女12 例;平均年龄（45±15）岁.所有患者均签署知情同意书,符合医学伦理学规定.采用他克莫司＋ 吗替麦考酚酯＋ 肾上腺皮质激素三联用药方案.于术前、术后当天、术后1～5 d 测定患者PT、血浆纤维蛋白原（Fib）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）和Plt.检测数据的比较采用t 检验.结果 患者术前平均Plt 为（104±37）×10^9/L,术后1～5 d 分别为（73±21）×10^9/L、（60±19）×10^9/L、（64±20）×10^9/L、（50±17）×10^9/L、（52±17）×10^9/L,与术前比较,差异有统计学意义（t=-3.768,-4.462,-4.584,-2.048,-2.934;P〈0.05）.其他凝血功能检测指标（PT、Fib、APTT、TT）较术前逐渐改善.结论 肝移植患者术后凝血功能的恢复过程中可能会发生持续性Plt 降低,应用他克莫司时应警惕血小板变化.

肝移植受者术后肺炎克雷伯菌感染特征分析

目的探讨肝移植受者术后肺炎克雷伯菌(KP)感染的临床特点及病原学特征。方法回顾性分析2015年1月至2018年12月中山大学附属第三医院岭南医院诊治的54例肝移植术后KP感染患者临床资料。其中男48例,女6例;年龄7个月~75岁,中位年龄54岁。分析KP感染发生、分布及耐药性。PCR检测2018年33株耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(CRKP)携带的常见碳青霉烯酶基因(blaIMP、blaKPC等)和β-内酰胺酶基因(blaSHV)情况。结果同期共完成699例肝移植,KP感染率7.7%(54/699),其中CRKP感染率5.2%(36/699)。KP和CRKP感染率逐年增加,KP感染率2018年达高峰(9.7%),CRKP感染率2017年达高峰(7.7%)。KP和CRKP的感染时间集中在术后30 d内,占比分别为80%及81%。78株KP主要来源于呼吸道,其次分别是腹腔及血液。KP的多部位检出率逐年上升。药物敏感分析显示KP对于青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类及喹诺酮类药物耐药率逐年上升,在2017年达高峰;对于氨基糖苷类和氨曲南,2017年耐药率达最高;对于复方新诺明和四环素,2016年的耐药率最高。耐药基因检测显示33株CRKP中有16株携带blaKPC基因,3株CRKP携带blaIMP基因。结论肝移植受者术后KP感染以呼吸道为主,早期流行,多部位感染呈增长趋势,CRKP比例有所增加,耐药机制主要以产碳青霉烯酶为主,临床应加强早期综合防治,合理用药。

草酸钙结石晶体对人近曲肾小管上皮细胞蛋白质表达谱的影响

目的探讨肾结石草酸钙晶体对人近曲肾小管上皮细胞蛋白质表达谱的影响,筛选差异表达蛋白质并初步探讨肾结石与肾损伤的关系。方法选取临床经结石成分分析为草酸钙的肾结石标本,充分研磨后配制草酸钙晶体悬液,处理人近曲肾小管上皮细胞HK-2,提取总蛋白并通过SDS-PAGE对蛋白质量进行鉴定,通过BCA法测定蛋白浓度,然后通过TMT标记定量蛋白质组学分析法筛选实验组和对照组蛋白质表达谱的差异,最后通过生物信息学的方法进行聚类分析、GO富集分析以及差异基因相关的蛋白质相互作用网络分析。结果草酸钙晶体对HK-2细胞显示出明显的细胞毒性,细胞生长速度减慢且引起细胞形态以及培养基PH值发生显著改变。TMT标记定量蛋白质组学分析结果显示经草酸钙晶体处理后的HK-2细胞中差异表达的蛋白分子共1 141个,其中上调表达的699个,下调表达的442个。生物信息学分析结果提示这些差异蛋白在细胞外复合体、细胞器以及多种细胞学过程中发挥重要作用;差异蛋白共表达网络分析发现在细胞骨架维持(ACTB,CFL1)和细胞特殊功能如分泌和加帽中起作用的蛋白(MYH9,MYH14)关系最为密切。结论草酸钙结晶对人肾上皮细胞蛋白质表达有显著影响,并且这些差异表达的蛋白质分子可能与肾结石的形成以及肾损伤有关。

HLA-DR^(-/low)CD33^+CD11b^+CD15^+CD14^-多型核粒细胞在子宫内膜异位症中的作用

目的探讨HLA-DR^(-/low)CD33^+CD11b^+CD15^+CD14-多型核粒细胞(PMN,简称CD15^+PMN)在子宫内膜异位症(Endo)中的临床意义。方法用流式细胞术检测正常体检者(HC组,n=7)、不孕症患者(Control组,n=25)及Endo患者(Endo组,n=26)外周血单核细胞(PBMCs)中CD15^+PMN的水平并测定其体外免疫抑制功能,同时检测Control组和Endo组腹水单个核细胞(PFMCs)中CD15^+PMN的水平。结果与HC组和Control组相比,Endo组PBMCs中CD15^+PMN的水平明显升高;与Control组相比,Endo组PFMCs中该细胞群的水平也明显上升,且Endo组患者晚期阶段PBMCs和PFMCs中CD15^+PMN的水平明显高于早期阶段,差异均有统计学意义(P<0.05)。体外T细胞增殖实验发现Endo组患者PBMCs中CD15^+PMN不具有抑制T细胞增殖的能力。结论 Endo患者PBMCs和PFMCs中存在异常增多的CD15^+PMN,提示CD15^+PMN可能参与子宫内膜异位症的发生和发展。