疣状痣的整形外科治疗

目的探讨整形外科手术方法在疣状痣治疗的应用。方法对我科在1999年7月至2004年10月采用整形外科方法行手术切除及修复的10例疣状痣患者的临床资料,进行回顾性分析。结果10例患者28处手术部位除1处因面积过大及皮肤牵张带被过度牵引导致皮缘裂开需植皮修复创面,2处因局部病损刮除过浅致复发予再次手术外,余手术部位均治疗成功无并发症。结论手术切除为疣状痣的首选治疗方法。为了安全和取得良好疗效,对于病损面积大及头面部等关键部位的疣状痣,宜采用整形外科方法行肿物切除及创面修复。

镍钛尿道支架管在尿道下裂修复术中的作用

目的探讨镍钛记忆合金尿道支架管在预防尿道下裂术后尿瘘及尿道狭窄中的作用。方法2001年1月～2004年12月,应用镍钛记忆合金尿道支架管作为尿道支架修复63例尿道下裂,其中阴茎近端型19例,阴茎阴囊型22例,阴囊会阴型8例,为一期尿道重建;尿道下裂术后尿瘘行尿瘘修补术10例;尿道下裂术后尿道狭窄再次重建尿道4例。结果63例伤口均期愈合,术后获随访2个月～2年,排尿通畅,均无尿瘘和尿道狭窄发生。其中62例于术后2～3个月后拔除尿道支架,1例于12个月后拔除。结论镍钛记忆合金尿道支架管可有效预防尿道下裂术后尿瘘及尿道狭窄的发生。

复合型组织工程皮肤的体外快速构建

目的寻找一种体外快速构建复合型组织工程皮肤的方法,为大面积烧伤、创伤创面的覆盖提供足够的自体皮源。方法取人的包皮,进行表皮细胞及成纤维细胞的分离鉴定及体外培养扩增,对表皮细胞群行广谱角蛋白抗体-异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate,FITC）、角蛋白19（cytokeratin19,K19）-FITC免疫荧光染色及K19流式细胞仪鉴定;对成纤维细胞行波形蛋白-FITC免疫荧光鉴定。将表皮细胞接种于异体脱细胞真皮（acellular dermalmatrix,ADM）乳头面,于气-液平面培养构建表皮层,实验分两组进行,实验组培养基中添加25ng/ml角化细胞生长因子（keratinocyte growth factor,KGF）,对照组不添加。6d后,接种成纤维细胞于两组ADM的另一面,继续培养24h。收集构建的组织工程皮肤,切片行苏木素-伊红染色,观察所构建皮肤的镜下结构,并对比添加KGF对其影响。结果免疫荧光染色培养扩增的表皮细胞群广谱角蛋白抗体-FITC染色均为阳性、K19-FITC染色部分阳性,流式细胞仪鉴定其中K19阳性表达的细胞接近17%。成纤维细胞体外培养7d可扩增超过100倍,波形蛋白-FITC免疫荧光染色呈阳性。经过7d的体外培养构建,可以得到复合型皮肤,经苏木素-伊红染色镜下观察显示,实验组表皮层连续,形成细胞层数2-3层的复层结构,真皮中含有成纤维细胞;对照组表皮层不连续,细胞层数少,两组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论利用胶原酶结合胰蛋白酶消化法进行种子细胞的分离,应用添加KGF的条件培养基,采用分步接种构建的方法,可在7d内构建出复合型组织工程皮肤。

兔骨髓间充质干细胞构建组织工程化海绵体尿道的可行性

目的:探索以骨髓间充质干细胞为种子细胞构建组织工程化海绵体尿道的可行性。方法:实验于2004-11/2006-03在中山大学第二附属医院医学科研中心完成。①参照张金明等报道的方法,制备脱细胞尿道海绵体-尿道基质,并行组织学检查观察脱细胞效果。②分离兔骨髓间充质干细胞,鉴定其表型,体外培养增殖后种植于兔脱细胞尿道海绵体-尿道基质上。③48只兔随机均分为实验组、对照组,每组24只。实验组用种植有干细胞的脱细胞基质即组织工程尿道修复部分切除的兔海绵体尿道,对照组组仅用脱细胞基质修复。④术后观察动物排尿情况,并于术后1,2,4,8,12,24周切取标本,看有无狭窄及腔面一般性状并行组织学检查,比较两者差异。结果:两组共48只兔全部进入结果分析。①自行制备的组织工程支架和种子细胞鉴定结果:所制备脱细胞基质质地柔软,镜下未见细胞成份;分离培养的细胞表型为CD45阴性,CD166,CD29,CD105阳性,符合骨髓间充质干细胞特征。②术后动物及标本一般观察:实验组术后2周时发现1例尿瘘;对照组2周时发现1例尿瘘,8,12,24周时分别发现各1例尿道狭窄。其余实验动物在拔除导尿管后排尿通畅。③两组兔再造尿道组织学检查结果:实验组自术后2周开始,组织学检查见血管和平滑肌逐渐增多;24周时,尿道腔面光滑,可见和正常尿道海绵体类似的组织结构。对照组自2周起可见血管,4周起可见平滑肌再生,24周时血管和平滑肌形成仍较少,较多纤维瘢痕,且无窦样组织形成,再造尿道腔面不如实验组光滑。结论:以骨髓间充质干细胞为种子细胞,脱细胞尿道海绵体为基质,构建组织工程化尿道海绵体,移植修复兔海绵体尿道缺损,可形成类似于正常尿道海绵体的组织结构。

异种脱细胞海绵体尿道基质修复兔尿道缺损

目的:探索应用猪脱细胞尿道基质修复兔尿道缺损的可行性。方法:实验于2004-01/12在中山大学第二附属医院实验中心完成。实验分组及方法:取新西兰雄性大白兔52只,体质量2.5～3.5kg;雄性家猪6只,体质量100kg左右。将大白兔随机分为实验组:用猪脱细胞海绵体尿道基质修复兔尿道缺损;自体尿道黏膜组:用镶嵌有自体尿道黏膜上皮的猪脱细胞海绵体尿道基质修复尿道缺损;对照组:未行手术作对照,其中实验组和自体尿道黏膜组每组24只,对照组4只。实验评诂:术后1,2,4,8,12,24周行逆行尿道造影,麻醉后处死动物,取再造尿道标本作组织病理学检查。结果:纳入大白兔52只,均进入结果分析。所有实验动物存活,除2例发生狭窄、2例发生尿瘘外,其余均取得满意效果。组织学观察显示,术后2周自体尿道黏膜组再造尿道管腔完全上皮化,4周实验组再造尿道腔面完全上皮化。在再造尿道的组织中,术后1个月时开始有血管生长,3个月时有平滑肌细胞生长;6个月时平滑肌及胶原纤维排列整齐,血管数量接近正常尿道的血管数量。结论:猪脱细胞海绵体尿道基质可以一期再造兔尿道,镶嵌自体尿道黏膜可以加速再造尿道管腔的上皮化。

骨髓间充质干细胞体外诱导分化为平滑肌细胞的实验

目的:探讨新西兰兔骨髓间充质干细胞在体外不同条件下定向分化为阴茎海绵体平滑肌细胞的可行性。方法:实验于2004-10/2005-05在中山大学第二附属医院实验中心完成。采用全骨髓贴壁法分离骨髓间充质干细胞;分别通过添加血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子进行体外直接诱导以及与阴茎海绵体平滑肌细胞不同比例(据骨髓间充质干细胞与阴茎海绵体平滑肌根细胞数量比,共培养诱导分为4∶1组、2∶1组以及1∶1组。每6孔作为1个诱导组,每孔兔骨髓间充质干细胞终浓度为1×10L-1,阴茎海绵体平8滑肌细胞相应终浓度分别为0.25×10L-1、0.5×108L-1及1×10L-1)进行88共培养两种方法诱导干细胞分化为阴茎海绵体平滑肌细胞。培养2d后的细胞爬片进行荧光免疫细胞化学染色测定抗α平滑肌肌动蛋白抗体表达,全程避光进行。完成染色后,立即进行激光共聚焦显微镜镜检。每孔爬片随机取5个视野,计算出每孔中Hoechst33342与FITC(Cy3)或双阳性细胞数及Hoechst33342单阳性的细胞数的比值以计算每孔的诱导率,应用SPSS软件进行完全随机设计的方差分析。结果:①阴茎海绵体平滑肌细胞的生长特性、形态及鉴定:组织块贴壁后细胞渐游出,呈梭形或长条形,原代细胞汇合90%约需16～19d,传代后生长加快,90%汇合时1∶2传代后约3d可再次传代。细胞融合时呈现典型的“峰-谷”样形态。传至10代之后细胞生长放缓,胞体渐变宽大,胞内颗粒增多。荧光免疫细胞化学检测特异性抗α平滑肌肌动蛋白抗体见绝大部分细胞呈阳性。②直接诱导以及共培养诱导的初步分析结果:骨髓间充质干细胞之细胞核标记良好,诱导后见胞浆表达多量抗α平滑肌肌动蛋白抗体,与阳性对照组相似;高倍镜下可清晰见平滑肌肌动蛋白肌丝,而阴性对照组只有核显色,无抗α平滑肌肌动蛋白抗体表达。③不同组别诱导率方差分析S-N-K检验得各组总体均数差异性检验的(F=44.831P<0.05),表明统计学上有显著性差异;共培养1∶1,组效率最高,依次是共培养2∶1组、共培养4∶1组,血管内皮生长因子组、血管内皮生长因子+碱性成纤维细胞生长因子组最低,后两者间诱导效果在统计学上无差别。结论:骨髓间充质干细胞可通过添加生长因子和共培养的方法诱导分化为阴茎海绵体平滑肌细胞,其中以共培养的方法效率较高。

兔肌源性干细胞的生物学特性及表型研究

目的:探讨兔肌源性干细胞(MDSCs)的分离及特征和表型研究。方法:取1.5月龄新西兰兔大腿肌肉,采用差速贴壁分离Prep late技术,分别用Ⅺ胶原酶、d ispase蛋白酶以及胰蛋白酶分步消化肌肉,并用差速贴壁法分离晚期贴壁的细胞,流式细胞仪(FCM)、免疫细胞化学以及W estern b lotting等检测初步确定细胞表型。结果:进行连续6 d的差速贴壁分离。第3 d开始得到较多量的圆形或短梭形细胞,簇样生长,体积明显小于骨骼肌细胞及其它杂细胞,10 d左右汇合,有极强的融合生长倾向。细胞在汇合度<30%传代可较好地保持原形态,流式细胞仪检测示MDSCs>80%为desm in+,>70%为Bc l-2+,>95%为CD45-,免疫细胞化学定性示desm in+。W estern b lot-ting检测显示随着细胞的纯化,α-SMA表达越来越弱。而细胞高汇合度(>50%)或低血清培养时极易融合成肌管或肌细胞链,skeletalmyosin+。结论:MDSCs具有desm in、Bc l-2高水平表达和CD45极低水平表达的特性,具有多向分化能力的MDSCs是组织工程研究的一种新型种子细胞。

微创手术在腋臭治疗中的应用

目的:总结应用小切口皮下剥离汗腺法治疗腋臭的经验。方法:沿腋顶部皮肤皱折线设计2～3cm小切口,于皮下组织浅层分离至腋毛区边缘,于皮下剪除脂肪组织、汗腺及部分毛囊组织,形成真皮下血管网皮瓣,加压包扎,必要时置橡皮引流条。结果:经临床96例患者手术观察,随访1个月～2年,治愈率92%,总有效率100%,切口痕迹隐蔽。结论:小切口皮下剥离汗腺法是一种疗效确切、瘢痕隐蔽、并发症较少的腋臭治疗方法。

细胞因子诱导杀伤细胞/自然杀伤细胞培养过程中CD16及CD11a的表达变化

背景:由于细胞因子诱导杀伤细胞、自然杀伤细胞上表达的CD16和CD11a均与其介导的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用和直接接触杀伤的抗肿瘤效应密切相关,因此了解两种细胞扩增过程中这两种分子表达的强弱,对根据免疫效应细胞的最终用途决定两种细胞的最佳收获时机具有重要意义。目的:了解细胞因子诱导杀伤细胞和自然杀伤细胞在培养过程中的CD16和CD11a表达的变化规律。设计、时间及地点:细胞移植免疫学动态观察,于2006-09/2008-03在中山大学附属第二医院完成。材料:脐血来自本院健康足月妊娠产妇。方法:采用Ficoll-Hypaque法分离脐血单个核细胞,接种于含体积分数为0.15胎牛血清的IMDM,双抗生素青、链霉素各1×105U/L24孔培养板中,在培养体系中加入白细胞介素2、白细胞介素7、白细胞介素15、干细胞因子及FLT3L制备细胞因子诱导杀伤细胞和自然杀伤细胞,每隔3天半量换液及全量补充上述细胞因子。主要观察指标:流式细胞仪检测CD3+CD56+细胞因子诱导杀伤细胞以及CD3-CD56+自然杀伤细胞在4周培养过程中CD16和CD11a表达的变化。结果:CD16在细胞因子诱导杀伤细胞、自然杀伤细胞上的表达随着培养时间的延长逐渐增加,在两类细胞上均在培养的第4周达到最高峰,分别为(55.99±3.90)%和(7.86±1.66)%,但CD16在自然杀伤细胞上表达比例较低,整个培养过程中自然杀伤细胞上CD16的均数表达没有超过8%。CD11a在细胞因子诱导杀伤细胞培养的第3周,自然杀伤细胞培养的第2周达到最高峰,分别为(49.32±6.32)%和(82.31±11.33)%,之后逐渐出现下降,到培养第4周几乎消失。结论:CD16和CD11a在细胞因子诱导杀伤细胞和自然杀伤细胞上的表达随培养时间呈动态变化,使用单克隆抗体联合细胞因子诱导杀伤细胞介导的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用效应时,细胞的收获期可在细胞培养的第4周,利用细胞因子诱导杀伤细胞和自然杀伤细胞的直接杀伤效应进行细胞过继免疫,那么收获细胞的时间以细胞培养的第3周为宜。

兔脱细胞尿道基质制备的可行性

目的:采用曲拉松与氨水混合液萃取制备脱细胞尿道基质材料,探讨此方法的可行性。方法:实验于2002-12/2003-03在中山大学附属第二医院整形外科完成。选用新西兰雄性大白兔4只,取标本前2天起每天肌注庆大霉素1万单位。将4只新西兰大白兔采用空气栓塞处死后,在无菌条件下取完整尿道组织,用曲拉松与氨水混合液萃取制备脱细胞尿道基质材料,分别于脱细胞处理3,7,11d后收集标本进行物理性状观察、组织学观察,找到脱细胞效果最佳的时间段。结果:实验纳入大白兔4只,全部进入结果分析。①脱细胞处理前后尿道基质的物理性状观察:经脱细胞处理后的尿道基质,其外观体积与脱细胞处理前相差不大,但颜色变为透白色,柔软,富有弹性及韧性。②脱细胞处理后不同时间尿道基质组织学观察:与正常尿道组织相比,脱细胞处理3d后组织中蓝染核物质大量减少,局部核物质聚集,有细胞碎屑残留,弹力纤维排列规整,管腔光滑;脱细胞处理7d后组织中蓝染核物质进一步减少,视野中剩余核物质呈线形或弧形排列,仍有细胞碎屑残留,弹力纤维排列整齐,但空隙较正常加大,管腔光滑;脱细胞处理11d后苏木精-伊红染色蓝染核物质和细胞碎屑已不存在,弹力纤维排列仍规整,空隙较前述增大,管腔光滑,脱细胞处理成功。结论:采用曲拉松及氨水混合液经脱细胞处理11d后,尿道基质组织材料中未见细胞存在,由排列规则的胶原及弹力纤维组成,管腔光滑,证明脱细胞尿道基质制备成功。

汉族青年正常颅面结构三维测量分析

【目的】为颅面美容整形手术设计及颅面颅底的生长发育机制研究提供正常颅面结构测量数据库和参照标准。【方法】应用电脑辅助颅颌面结构立体测量分析方法 ,对 2 0例正常青年的颅 眶 颧 颌诸结构的形态特征及其相互间的关系进行了研究。【结果】①医学三维影像不仅清晰地立体再现颅底、鼻筛、眶颧区解剖形态 ,而且提供了定量化研究颅颌面诸结构间相互关系的立体模型。②建立正常颅面结构测量数据库。③颅颌面诸结构表现出显著的性别特征差异。但是 ,反映颅颌面结构间比例关系的指数在两种性别间极为相近。④本组青年两侧颅面结构的非对称率未超过 5 % ,显示出良好的对称性。【结论】本研究建立的计算机辅助测量方法和项目可为颅面、颅底的生长发育研究提供客观依据 ;正常测量值数据库可为颅面美容整形手术提供参照标准。

游离腹直肌瓣加植皮修复小腿及足踝部软组织缺损

目的 探讨应用游离腹直肌瓣加中厚游离植皮修复小腿和足踝部软组织缺损的方法和疗效。 方法1998年 5月～ 2 0 0 2年 12月 ,采用以腹壁下动、静脉为蒂的一侧腹直肌瓣游离移植加中厚植皮修复 2例小腿、9例足踝部因外伤所致软组织缺损伴有骨、肌腱外露及骨髓炎患者。病程为 1个月～ 10年。缺损范围 3cm× 4 cm～ 8cm× 14 cm;切取腹直肌瓣 4 cm× 6 cm～ 8cm× 15 cm。 结果 术后 11例移植肌瓣均成活 ,8例创口 期愈合 ,3例移植中厚皮片坏死经再植皮后愈合。 11例术后获随访 6个月～ 4年 ,外形及功能良好。 结论 游离腹直肌瓣加中厚游离植皮修复小腿与足踝部软组织缺损具有血运好、抗感染力强和顺应性好等优点 ,可用于填充缺损及修复不规则创面 ,术后外形良好 ,克服了肌皮瓣肥厚臃肿的缺点。

荷载角质细胞生长因子纳米微囊脱细胞真皮的制备、特性及其对表皮干细胞群生长的作用

目的:构建一种荷载有角质细胞生长因子且能控制释放的新型组织工程化皮肤。方法:实验于2006-03/12于中山大学附属第二医院干细胞研究中心及中山大学高分子研究所进行。①材料:角质细胞生长因子(CytolLAB公司),牛血清白蛋白(Amresco公司),聚乳酸-羟基乙酸共聚物(由中山大学高分子化学研究所合成,聚乳酸与聚羟基乙酸摩尔比为75∶25,相对分子质量为50000),脱细胞真皮(北京桀亚莱福生物技术有限公司)。②方法:采用超声乳化-溶剂挥发及低温干燥方法,将角质细胞生长因子以牛血清白蛋白作联接包裹在聚乳酸-羟基乙酸共聚物内制成纳米微囊,根据公式计算微囊成球率、载药量及包封率;将微囊溶解于二氯甲烷中,进行体外释放实验检测不同时间牛血清白蛋白吸光度,作出牛血清白蛋白释放曲线;将角质细胞生长因子纳米微囊交联于脱细胞真皮表面,制成荷载角质细胞生长因子纳米微囊脱细胞真皮(KGF-ADM),在扫描电镜下观察微囊形态、分布及其与脱细胞真皮连接情况;采用Ⅰ型胶原酶复合胰蛋白酶消化的方法,从门诊健康患者无菌手术切除的包皮组织中获取表皮细胞单细胞悬液,经免疫荧光检测,证实其中含表皮干细胞,将表皮干细胞群分别接种于KGF-ADM及聚乳酸-羟基乙酸共聚物上,于恒温箱中培养3d后,在扫描电镜下观察细胞形态、生长情况及其与材料连接情况。结果:①纳米微囊成球率为85%,载药量为17.3%,包封率为73.5%。②纳米微囊中牛血清白蛋白可以控制缓慢释放,其释放曲线显示初期释放速度较快(前5d累计释放约40%),后进入缓慢释放期(30d累计释放约75%)。③扫描电镜检测显示纳米微囊形态规则,在KGF-ADM表面分布均匀,与KGF-ADM联接良好,部分分布于KGF-ADM深面;表皮干细胞群在KGF-ADM上生长活跃,细胞形态良好,部分形成克隆。结论:采用该方法可成功构建荷载角质细胞生长因子纳米微囊的新型组织工程化皮肤。

颅面立体结构三维可视化研究及其意义

目的 :为实现颅面结构三维可视化并对其全面、准确的定性和定量分析。方法 :应用VisualC+ + 语言设计开发出一个多功能应用软件包 ,其功能模块包括 :三维重建、精确测量、电子解剖等。借助所开发的软件包 ,将面向多边形的表面绘制显示方法应用于颅面软组织、骨组织结构的三维重建研究。结果 :由二维断层CT图像构建出颅面皮肤软组织和骨组织立体结构模型 ,其立体模型可旋转以利于不同角度的观察分析 ,可以任一剖面显示及操作其局部结构。结论 :为颅面外科临床提供了定性和定量诊断分析的新技术 ,实现了颅面电子解剖。为解剖学。

两种阴茎海绵体增粗手术方法的探讨

目的 探讨用自体大隐静脉或ePTFE人工血管增粗阴茎海绵体术式的可行性。方法 应用自体大隐静脉移植或ePTFE人工血管置入切开分离的双侧阴茎海绵体白膜 ,扩大阴茎海绵体周径及其体积。结果 用上述两种方法完成阴茎增粗并延长术 17例患者 ,随访 12～ 2 4个月 ,阴茎外形、勃起功能及性生活均满意。结论 所用的两种手术方法使阴茎增粗效果显著 ,尤以勃起时更为明显 ,是动态功能性阴茎增大的良法。

大鼠GLUT1基因的扩增及其重组腺病毒载体的构建

目的:构建携带大鼠葡萄糖转运体1基因(GLUT1)的复制缺陷型重组腺病毒载体,为进一步研究脑缺血缺氧引起的神经元死亡机制奠定基础。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法获取大鼠GLUT1基因全长cDNA,将其克隆至穿梭质粒pShuttle中构建穿梭质粒pShuttle-G lut1,经酶切后与线性化的腺病毒骨架质粒pAdeno-X体外连接并转化大肠杆菌DH5α,构建重组腺病毒质粒pAd-G lut1,酶切线性化重组腺病毒质粒后转染HEK293细胞包装成重组病毒颗粒,重组腺病毒在HEK293细胞中反复扩增数代后,分别用聚合酶链反应(PCR)及免疫印迹法(W estern b lotting)从基因和蛋白表达水平鉴定重组的腺病毒。结果:经PCR分析及DNA测序显示GLUT1 cDNA序列正确;筛选出重组腺病毒质粒pAd-G lut1后在HEK293细胞中成功包装出重组病毒,包装后冻融细胞行PCR及W estern b lotting检测表明重组腺病毒包装成功。结论:成功扩增了大鼠GLUT1基因并构建了携带大鼠GLUT1基因的复制缺陷型重组腺病毒载体,这有助于研究脑缺血缺氧引起的神经元死亡的机制。

眶爆裂骨折CT影像学诊断与外科治疗的价值探讨

【目的】探讨眶爆裂骨折所致眶壁畸形、眼球陷没的影像学特征及对其外科治疗的价值。【方法】应用三维CT影像学技术及计算机三维诊断系统,观察11例眶壁畸形特征,测量眶腔容积变化。采用还纳眶内容、植骨恢复眶腔容积的方法进行整复。【结果】CT图像显示本组11例均呈眶底壁和/或内侧壁爆裂缺损,眼球后缩内陷。眶腔容积的增大与眼球内陷程度密切相关(r=0.9113)。经还纳眶内容及眶腔植骨手术,其中10例患者眼球陷没、复视得以矫正,眶、眼睑外形恢复良好。仅1例复视未得到矫正。【结论】CT能对眶壁骨折的性质、程度进行定性定量诊断分析。解除眼外肌粘连、还纳眶内容及眶腔植骨,是矫治复视和眶畸形的较好方法。

镍钛尿道支架修复小儿尿道下裂的护理

尿道下裂是泌尿生殖系统常见的先天性畸形，其发病率在出生活男婴中为0．8％．8．2％，近年发病率有上升趋势。因手术部位易感染，对手术技巧要求较高，而小儿治疗合作性差，因而术后并发症发生率高，其中术后发生尿瘘者国外报道达15％-30％。我院整形外科于2004年以来对此症的手术方式进行改进，采用镍钛记忆合金尿道支架为内衬，