重组生长激素在肝胆外科老年病人术后恢复中的应用价值

目的评价重组生长激素在肝胆外科老年病人术后恢复中应用的疗效。方法2004年1月到2004年12月在3间不同医院的肝胆外科中选择腹腔镜胆囊切除的65岁以上的患者共40人,随机分为实验组和对照组,每组各20人。分别应用重组生长激素4单位四天和生理盐水四天。于术前两天,术后一天,术后三天,术后一周,术后两周作为观察点。结果两组在总住院天数,白蛋白水平,双手握力,疲劳评分等方面改善有明显差异,试验组明显优于对照组。结论在老年病人腹部手术后应用生长激素能缩短住院时间,提高营养水平,能明显改善术后疲劳综合征的程度。

胰腺外科专科化思考

人体是由各个复杂系统形成的一个有机整体，胰腺作为一个消化器官，其本身是一个系统，由胰头、胰颈、胰体、胰尾构成．包括内、外分泌功能，在人体内发挥着举足轻重的作用。胰腺外科主要是针对部分胰腺疾病的外科治疗，主要包括各种胰腺肿瘤。特别是胰腺癌，内科治疗无效的慢性胰腺炎及各种胰腺囊肿。由于胰腺癌恶性程度极高，

乌司他丁在肝胆胰脾围手术期中的应用

目的观察肝胆胰脾手术前后使用乌司他丁抗手术侵袭、保护人体重要脏器功能的作用。方法选取90例接受肝胆胰脾手术的患者,分为对照组与实验组,实验组在术前1天及术后1、2、3天分别给于乌司他丁20万单位静脉输注,同时检测血白细胞介素6、纤维连接蛋白、α1鄄微球蛋白、尿素氮、肌酐、免疫球蛋白以及尿α1鄄微球蛋白等水平的变化。结果两组病人白细胞介素6、纤维连接蛋白、α1鄄微球蛋白、尿素氮、肌酐、免疫球蛋白以及尿α1-微球蛋白的检测结果均有显著性差异(P<0.05)。结论乌司他丁具有一定的抗手术侵袭作用。

载5-氟尿嘧啶两亲多糖纳米粒的制备及其对肝癌细胞HepG2的杀伤作用

背景与目的:生物可降解载药纳米微粒作为新型药物靶向传输和缓释/控释载体,可延长药物的生物半衰期,减轻药物的毒副作用,而且具有良好的生物相容性。本实验制备可生物降解的载5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)葡聚糖接枝聚乳酸共聚物(5-FU/DEX-g-PLA),探讨其对人肝癌细胞HepG2的体内外杀伤作用。方法:利用分子自组装技术制备5-FU/DEX-g-PLA载药纳米微粒,透射电镜观察纳米粒形态,分光光度法计算载药率,MTT法观察对HepG2细胞的体外杀伤作用,动物实验观察其体内抑瘤效应。结果:5-FU/DEX-g-PLA纳米微粒呈球形,粒径约50nm,药物包封率约9.3%。体内药物代谢动力学数据显示,5-FU纳米制剂在血液中维持时间长于5-FU裸药;MTT结果显示,5-FU纳米组细胞生长抑制率(58.8%)与5-FU裸药组(58.0%)差异无显著性(P>0.05);体内抑瘤实验显示,5-FU纳米组肿瘤抑制率(73.1%)显著高于5-FU裸药组(57.5%)。结论:5-FU/DEX-g-PLA纳米微粒可有效抑制肝癌细胞的生长。

肝细胞生长因子诱导骨髓间质干细胞分化为心肌细胞

目的 :探讨肝细胞生长因子 (HGF)体外诱导骨髓间质干细胞 (MSC)定向分化心肌细胞的一种新方法。方法 :分离SD大鼠骨髓MSC ,培养至 4 - 6代后 ,添加HGF(终浓度 10 μg/L)持续培养 30d ,倒置显微镜下动态观察分化细胞的自律性搏动和对 0 1%异丙肾上腺素和无Ca2 + 孵育液的反应 ,并行心肌肌凝蛋白表达鉴定。结果 :分化第 14 - 2 0d骨髓间质干细胞增殖形成集落 ,10 % - 5 0 %克隆中开始出现持续节律收缩的细胞群体 ,节律频率为 70- 90次 /min ,异丙肾上腺素加快其搏动速率 ,无Ca2 + 孵育液则抑制之。细胞心肌肌凝蛋白表达鉴定为心肌细胞。结论 :HGF可诱导骨髓间质干细胞分化为心肌细胞 。

两亲多糖纳米胶束作为药物缓释载体的制备及释药研究

【目的】合成葡聚糖接枝聚乳酸(DEX-g-PLA)两亲多糖共聚物,检测其纳米胶束的相关参数,初步探讨其纳米胶束在药物缓释方面的应用。【方法】采用偶联法合成DEX-g-PLA。用透射电子显微镜观察所形成胶束的形态;用动态光散射仪观察纳米胶束有效粒径的变化。体外药物释放实验考察其对不同水溶性药物的缓释作用。MTT法考察其生物相容性。【结果】DEX-g-PLA纳米胶束,呈球形,粒径在50～190nm之间,其有效粒径随聚乳酸含量的增加而增大。载药纳米胶束对疏水性维生素B2的缓释效果优于亲水性的5-氟尿嘧啶。MTT结果显示该纳米胶束具有良好的生物相容性。【结论】DEX-g-PLA纳米胶束具有良好的生物相容性,对疏水性药物的缓释作用优于亲水性药物,有望成为新型药物缓释载体。

丁酸钠体外诱导小鼠胚胎干细胞分化为肝细胞

目的:探讨分化刺激剂丁酸钠对体外培养的小鼠胚胎干细胞(ES细胞)分化为肝细胞的影响,并分析其可能机制。方法:常规培养E14 ES细胞后,继续悬浮培养4 d以形成拟胚体,然后转移拟胚体到铺有明胶的6孔板中并添加3 mmol/L丁酸钠开始诱导分化,分化过程中用倒置相差显微镜观察细胞形态学的改变;免疫荧光染色观察肝细胞特异性标志白蛋白(ALB)、甲胎蛋白(AFP)、细胞角蛋白18(CK18)的表达;RT-PCR检测肝细胞特异性标志基因ALB、AFP、甲状腺素运载蛋白(TTR)、α1抗胰蛋白酶(AAT)的mRNA表达;流式细胞技术检测ALB阳性细胞比例;糖原PAS染色和吲哚氰绿(ICG)摄取试验检测肝细胞功能。结果:诱导分化过程中ES细胞逐渐出现肝细胞样改变;诱导分化第7d仅检测到AFP和TTR在mRNA水平的表达,第14 d检测到ALB、AAT在mRNA水平的表达;分化14 d时免疫荧光检测显示ALB、AFP、CK18均为阳性;流式细胞技术检测ALB阳性细胞比例约为48.6%;糖原PAS染色和ICG摄取试验显示分化18d的肝细胞样细胞具有肝细胞功能。结论:丁酸钠可以高效诱导小鼠ES细胞分化为肝细胞样细胞,并且分化细胞具有肝细胞功能。

Fas-siRNA对小鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用

【目的】建立小鼠肝缺血再灌注损伤模型,探讨针对Fas基因的siRNA对小鼠肝缺血再损伤的保护作用。【方法】健康、雄性(8～10周,23～28g)昆明小鼠(N=80)分为4组,每组20只,每组按时点(30min,1、2、6和24h5个时点)随机分成5个小组(n=4)。空白组(Shamgroup)尾静脉注射PBS液1mL,8h和24h后各重复1次。麻醉和剖腹后关腹,不阻断肝门。对照组(Controlgroup)同样注射3次PBS液1mL,部分阻断肝门(约70%)30min后再灌注。GFP-siRNA组(GFPgroup)和Fas-siRNA组(Fasgroup)分别尾静脉注射3次GFP-siRNA和Fas-siRNA1mL,其余操作同对照组。按时间点分别处死小鼠,不作重复测量,检测血清ALT水平和肝细胞凋亡(TUNEL)情况。【结果】缺血再灌注30min,1、2、6和24h后的血清ALT水平(U·L-1))空白组的为78～86,对照组的分别为528、610、724、914和572,GFP-siRNA组分别为594、668、802、916和666,Fas-siRNA组分别为456、555、504、640和415。缺血再灌注后血清ALT水平逐渐升高,6h达到高峰,随后逐渐下降。各个时点对照组与空白组血清ALT水平有统计学意义(P<0.05);相同时点Fas-siRNA组与对照组、GFP-siRNA组血清ALT水平有统计学意义(P<0.05)。2h时点对照组的肝细胞凋亡指数为2.95,GFP-siRNA组为2.65,Fas-siRNA处理组为1.70。

胆总管内置“支撑内引流管”一期缝合微创治疗胆管结石

目的探讨腹腔镜胆总管探查、胆总管置管内引流、一期缝合的可行性及效果。方法对61例行腹腔镜联合胆道镜胆总管探查,胆总管置入"胆道支撑内引流管",一期缝合胆总管患者的临床资料进行回顾性分析。结果61例手术均获成功,手术时间80～260min,平均125min。术后发生胆漏3例,戳孔内遗留结石1例,戳孔疝1例。内引流管于术后5～7d拔除。随访3～24个月,无残余结石及胆管狭窄等并发症。结论腹腔镜胆总管探查、胆总管置管内引流、一期缝合是安全可行的。

85岁以上高龄患者的腹腔镜胆囊切除术

目的：探讨85岁以上超高龄患者行腹腔镜胆囊切除术（1aparoscopic cholecystectomy，LC）的可行性。方法1996年10月～2006年10月，对79例85岁以上高龄患者行LC术，术前控制合并症，持续性硬膜外麻醉，CO2气腹压8～10mmHg，三孔法操作。结果70例LC成功，9例（11．4％）中转开腹，其中6例因腹腔内粘连严重，1例因发生不易控制出血，2例因术中怀疑胆囊癌。术后并发症发生率12.7％（10／79），其中1例死于术后心肌梗死，另9例治愈，包括左心力衰竭1例，肺部感染2例，肠梗阻1例，穿刺孔血肿1例，真菌性肠炎1例，胆囊窝积液3例。结论：术前积极处理合并症，术中适度的气腹压力，熟练规范的手术操作，术后严密观察，对超高龄患者行LC安全可行。

丁酸钠诱导的未成熟树突状细胞的免疫学功能研究

目的:探讨丁酸钠对人外周血来源的树突状细胞(DC)的成熟状态和免疫学功能的影响。方法:通过粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)结合丁酸钠体外诱导人外周血来源的DC,6d后结合不同成熟因子诱导成熟,并以流式细胞仪、FITC标记的Dextran的内吞检测、混合淋巴细胞反应(MLR)、ELISA法分别检测DC的表面标志、内吞能力、DC刺激淋巴细胞增殖能力和白细胞介素12(IL-12)分泌量的改变。结果:丁酸钠可以抑制DC成熟,使DC具有较强的抗原吞噬能力,而刺激淋巴细胞增殖能力和IL-12的分泌能力下降。结论:丁酸钠可以抑制DC成熟,诱导不成熟DC生成,在移植免疫耐受方面具有较好的应用前景。

含淤胆血清的培养体系从大鼠骨髓细胞中筛选与扩增肝干细胞亚群

目的 :探讨采用含淤胆血清的培养体系从骨髓细胞中筛选与扩增骨髓源性肝干细胞的可行性。方法 :制备含 2 %、5 %、7%和 10 %淤胆血清的筛选培养液 ,培养大鼠骨髓细胞 ,4d时加入肝细胞生长因子促进肝干细胞生长 ,2周时行免疫组化与RT -PCR检测肝干细胞标志、糖原染色和尿素合成试验分析功能。结果 :在 2 %淤胆血清中 ,骨髓细胞不能形成克隆 ,7%与 10 %的血清则骨髓细胞逐渐凋亡。在 5 %的淤胆血清时 ,骨髓源性肝干细胞在此病理筛选培养液中能够生存并选择性生长 ,而其他类型细胞则脱落凋亡 ;第 2周时 ,形成肝细胞样集落 ,细胞表达胚胎时期肝细胞特征性蛋白 ,具有肝细胞特有糖原和尿素合成功能。结论 :含淤胆血清的微环境筛选培养体系能够有效地从骨髓细胞中筛选骨髓源性肝干细胞 ,为临床肝细胞替代治疗的获取丰富供体细胞来源提供了新的思路。

负压封闭引流技术治疗重症急性胰腺炎的临床研究

目的探讨负压封闭引流技术(VSD)在重症急性胰腺炎(SAP)治疗中的临床应用。方法将38例SAP患者随机分为两组:观察组20例,采用负压封闭引流技术治疗,对照组18例,采用常规引流方法治疗。观察患者的手术次数,恢复进食时间,术前及术后第3天血淀粉酶、白细胞计数、血钙、血糖差值,术后并发症,术后住院天数,转归及总住院费用等。结果手术次数观察组(3.1±0.8)次,对照组(5.9±1.6)次,差异有统计学意义(P<0.001);术后进食时间观察组(3.3±1.8)d,对照组(7.2±2.2)d,差异有统计学意义(P<0.001);首次手术前与术后第3天血淀粉酶差值观察组(248.3±76.3)U,对照组(150.3±63.8)U,差异有统计学意义(P<0.05);WBC差值观察组(5.2±1.3)×109/L,对照组(3.1±1.0)×109/L,差异有统计学意义(P<0.001);血钙差值观察组(0.13±0.06)mmol/L,对照组(0.24±0.09)mmol/L,差异有统计学意义(P<0.001);血糖差值观察组(4.65±1.27)mmol/L,对照组(3.37±1.14)mmol/L,差异有统计学意义(P<0.05);住院天数观察组(15.6±2.3)d,对照组(36.3±9.4)d,差异有统计学意义(P<0.001);住院费用观察组(45268.5±2801.6)元,对照组(87588.3±5533.0)元,差异有统计学意义(P<0.001);两组并发症,治愈率及死亡率比较差异均无统计学意义。结论负压封闭引流技术治疗重症急性胰腺炎术后恢复快,可明显缩短住院时间,降低住院费用,有良好的临床推广应用价值。

应用腔镜技术治疗肝内外胆管结石的临床研究

目的 探讨腔镜技术在治疗肝内外胆管结石中的合理应用。 方法 应用腹腔镜结合十二指肠镜和纤维胆道镜治疗 96例肝内外胆管结石 ,其中胆囊结石合并胆总管结石 72例 ,单纯胆总管结石 16例 ,左肝管结石合并胆总管结石 8例。主要术式包括腹腔镜胆囊切除联合EST( 37例 )、腹腔镜胆囊切除术结合胆道镜胆道探查术 ( 5 4例 )、腹腔镜下左肝叶切除联合胆道镜胆管探查术 ( 5例 )。 结果 96例中 ,93例术后复查无残留结石。 4例出现少量胆漏 ,平均 10天内自愈 ,无其它严重并发症发生。 3例中转开腹手术 ,其中 2例由于存在高位胆管狭窄 ,1例由于肝门部严重粘连水肿。 结论 腔镜治疗肝内外胆管结石可行 ,合理应用多种腔镜技术治疗肝胆管结石 ,可以达到安全。

肝癌细胞冻融抗原负载树突状细胞瘤苗的制备与活化

目的 :探讨制备肝癌树突状细胞 (DCs)瘤苗和体外诱导DCs活化的优化方法。方法 :取健康人新鲜血 5 0mL ,Ficoll密度梯度离心分离外周血单个核细胞 (PBMC) ,制备肝癌细胞冻融抗原 ,采用不同因子组合培养PBMC ,诱导和激活DCs,A组 :rhGM -CSF +IL - 4 ;B组 :rhGM -CSF +IL - 4 +冻融抗原负载 ;C组 :rhGM -CSF +IL - 4+TNF -α ;D组 :rhGM -CSF +IL - 4 +TNF -α +冻融抗原负载。结果 :各组均诱导出DCs ,并高表达CD11c和CD5 4 ,冻融抗原可明显上调CD86、CD80、HLA -DR表达和IL - 12p4 0分泌 (P <0 .0 1) ,TNF -α促进CD86表达的作用更显著 ,但对IL - 12分泌无影响 ,依次用TNF -α诱导和冻融抗原负载可进一步促进CD86表达和IL12p4 0分泌 (P <0 .0 5 )。CD5 4和HLA -DR双标记免疫细胞化学染色显示 ,各组DCs大多为CD5 4 +。表达HLA -DR的DCs均为CD5 4 +HLA -DR+,其中 ,A组CD5 4 +HLA -DR+细胞数量最少 ,D组最多 ,平均每个细胞HLA -DR的表达水平也与此对应。结论 :采用rhGM -CSF、IL - 4诱导的未成熟DCs,依次使用TNF

重组pDC316-MCMV/hNIS真核表达质粒的构建及在肿瘤细胞的功能

【目的】克隆人的钠/碘同向转运体(hNIS)基因可编码序列,并研究其在非甲状腺肿瘤细胞内的功能表达。【方法】利用逆转录和聚合酶链反应(RT-PCR)从毒性弥漫性甲状腺肿(又称Graves病)病人的甲状腺组织中扩增得到NIS的可编码区基因,并克隆到T载体,测序后亚克隆到腺病毒载体穿梭质粒pDC316载体上,获得重组真核表达质粒载体pDC316-MCMV/hNIS。采用脂质体转染的方法,把pDC316-MCMV/hNIS重组质粒(实验组)或pDC316空质粒(对照组)分别导入到胰腺癌细胞株CAPAN-Ⅱ细胞、PANC-1细胞和卵巢癌细胞株SK-OV-3细胞,转染后48h采用RT-PCR方法检测转染细胞内的hNIS mRNA水平,转染后第2、3、4天分别检测肿瘤细胞对125I的吸收功能。【结果】序列分析结果证实克隆片段与文献报道的hNIS基因cDNA序列完全一致。实验组转染后48h,在CAPAN-Ⅱ细胞、PANC-1细胞及SK-OV-3细胞内均能检测到hNIS mRNA高水平表达,对照组基本无hNIS mRNA表达。转染后第3天细胞吸碘达到高峰,实验组CAPAN-Ⅱ细胞、PANC-1细胞和SK-OV-3细胞对125I的吸收量分别比对照组高24倍、17倍和13倍。【结论】从Graves病人的甲状腺组织中克隆的hNIS基因转染肿瘤细胞后,能使肿瘤细胞发挥高水平吸碘功能,为进一步运用放射性核素体内靶向治疗非甲状腺肿瘤奠定了基础。

MMP-2、TIMP-2和VEGF-C在肝细胞性肝癌中的表达及其与淋巴结转移关系的研究

目的:本实验旨在探讨MMP-2、TIMP-2和VEGF-C与HCC淋巴结转移的关系,寻找诊断HCC淋巴结转移的指标,为HCC治疗方式选择提供有意义指导。方法:选取临床手术切除、病理确诊、石蜡包埋的HCC有/无淋巴结转移癌组织标本各22例,4μm厚连续切片,用鼠抗人MMP-2单抗、TIMP-2单抗和兔抗人VEGF-C多抗,免疫组化SP法检测,并比较其在癌组织中的表达情况。结果:MMP-2、TIMP-2和VEGF-C在HCC有淋巴结转移组总阳性表达率分别为81.8%、13.6%和72.7%;在无淋巴结转移组则分别为54.5%、40.9%和36.4%。HCC有淋巴结转移组MMP-2和VEGF-C的阳性表达率明显高于无淋巴结转移组(P<0.05),而TIMP-2的阳性表达率则相反,低于无淋巴结转移组(P<0.05)。结论:MMP-2和VEGF-C的过量表达及TIMP-2的低表达可能与HCC发生淋巴结转移有关;VEGF-C可能是促进HCC淋巴结转移的重要因素。联合检测MMP-2、TIMP-2和VEGF-C的表达情况可能对判断淋巴结转移和临床预后有重要价值。