血小板TLR4表达介导LPS诱导的血小板活化

本研究探讨人血小板Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)表达及其在细菌内毒素脂多糖(lipopolysaccsharide,LPS)诱导血小板活化中的作用。对15例健康人肘静脉抽血各20ml,制备富含血小板血浆(PRP)和血小板悬液,在有或无凝血酶作用的基础上加入LPS(0.2μ/ml)孵育30分钟,分别用流式细胞术和免疫印迹(Western blot)方法检测LPS作用前后血小板TLR4、CD62P和CD40L的表达。结果表明:流式细胞术检测静止血小板TLR4表达为25.44%,凝血酶刺激后明显升高(32.34%,p<0.05),LPS继续作用后TLR4的表达进一步增高(39.16%,p<0.01);在无凝血酶刺激下,LPS作用血小板后TLR4的表达接近于凝血酶刺激后结果。Western blot方法检测结果与流式细胞术相符;血小板CD62P和CD40L表达(流式细胞术)在静止血小板分别为6.39%和2.45%,凝血酶刺激后明显增高,分别为42.68%和14.8%,LPS进一步刺激后表达率进一步升高,分别为63.03%和13.94%,均明显高于仅用凝血酶的刺激组(p<0.001);抗TLR4抗体显著抑制了LPS诱导的血小板TLR4、CD62P、CD40L表达,但不影响凝血酶诱导的血小板膜CD62P、CD40L表达。结论:人血小板能够表达功能性TLR4,它直接参与了机体针对细菌的固有免疫反应。

人参皂甙-2A体外抗血小板作用的实验研究

目的探讨中药三七提取物人参皂甙-2A体外抗血小板作用。方法取高血压患者及正常人静脉血标本,常规制备富含血小板血浆,分别用不同浓度的硝苯地平、SK&F96365、人参皂甙-2A孵育,以2μmol/L二磷酸腺苷为诱聚药,连续5次测定5min血小板的聚集率,以血小板最大聚集率[maximal platelet aggregation rate,PAG(M)]为观察指标。结果(1)高血压患者PAG(M)为0．89±0．06,与正常人PAG(M) 0．68±0．07比较,差异有显著性(P＜0．01)；(2)两种浓度(10、20μmol/L)的硝苯地平对正常人和高血压患者PAG(M)均无影响；(3)不同浓度(2．5、5、10、20μmol/L)的SK&F96365对高血压病组的PAG(M)均有抑制作用；(4)不同浓度(2．5、5,10、20μmol/L)的人参皂甙-2A对高血压病组的PAG(M)均有抑制作用(P＜0．05,P＜0．01)；3种浓度(5、10、20μmol/L)的人参皂甙-2A对正常组的PAG(M)均有抑制作用(P＜0．05)。结论高血压患者血小板聚集功能明显高于正常人,血小板呈高反应状态,硝苯地平不能抑制血小板聚集；SK&F96365能抑制血小板的聚集功能；人参皂甙-2A能抑制血小板的聚集,有明确的抗血小板作用。

3′-甲异靛玉红对不同种系小鼠免疫功能的调节作用

目的:研究3′-甲异靛玉红对不同种系小鼠胸腺、脾淋巴细胞增殖及生物功能影响的调节,探讨其免疫抑制作用的机制。方法:处死8w大雄性BALB/c、C57BL/6以及F1代杂交鼠,取胸腺、脾组织制成单细胞悬液,以5、10、15、20、25μmol/L甲异靛玉红处理各组细胞,MTT法测定各种系小鼠脾和胸腺淋巴细胞增殖;ELISA法测定培养上清IL-12活性;流式细胞仪检测细胞周期,细胞凋亡率及死亡率,细胞内ROS浓度;RT-PCR检测细胞Bcl-2和CDK2基因mRNA水平;荧光显微镜检测细胞Bcl-2、Bax和CDK2蛋白表达率。结果:MTT结果显示,当浓度为15、20、25μmol/L甲异靛玉红作用24h便可明显抑制3种小鼠胸腺、脾淋巴细胞增殖(P<0.05),此效应呈量效、时效依赖性。ELISA结果显示各浓度的甲异靛玉红对各小鼠胸腺和脾细胞各时间点分泌IL-12的功能较对照组显著减低(P<0.05)。RT-PCR显示15μmol/L甲异靛玉红的处理12h后细胞Bcl-2和CDK2的mRNA水平较对照组显著降低。流式细胞仪检测细胞凋亡率及死亡率表明,与对照组比较,15μmol/L甲异靛玉红处理3种不同种系小鼠胸腺细胞、脾细胞均有部分细胞凋亡的现象,细胞死亡率也有升高。15μmol/L靛玉红处理24h后,各组双氢二氯荧光黄(2′,7′-dichlorofluorescein,DCF)阳性的细胞百分比显著高于对照组,3种不同种系小鼠胸腺细胞、脾细胞间无显著性差异。结论:15μmol/L以上甲异靛玉红可逆性抑制不同种系小鼠体外培养的脾及胸腺淋巴细胞增殖,IL-12的分泌也同时被抑制,细胞Bcl-2和CDK基因mRNA和蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,细胞内ROS水平升高,细胞凋亡。

冠心病患者血小板Toll样受体4的表达及其意义

目的观察冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)患者血小板Toll样受体4(TLR4)的表达及其与血小板P-选择素、血浆TNF-α水平的关系,探讨血小板参与冠心病发病的可能机制。方法冠心病病人30例,健康对照者10例,流式细胞术检测血小板TLR4和血小板P-选择素的表达,ELISA方法检测血浆TNF-α水平;另用Westernblot检测血小板总TLR4。结果血小板TLR4、血小板P-选择素表达和血浆TNF-α水平在冠心病组分别是26.35±1.79%、30.62±3.22%和15.61±1.36pg/ml;健康对照组分别是18.78±2.15%、14.50±1.13%和8.79±1.20pg/ml,前者明显高于后者(P<0.05)。变量间相关分析显示,血小板TLR4的表达水平与P-选择素及血浆TNF-α呈正相关(Pearson相关系数分别为0.618和0.745,P<0.01)。结论冠心病患者血小板TLR4表达增高,可能与冠心病血小板的高反应性和发病有关。

强化免疫抑制治疗重型再生障碍性贫血18例

目的:探讨强化免疫抑制治疗重型再生障碍性贫血(SAA)的临床效果。方法:以抗胸腺细胞球蛋白(ATG)为主的强化免疫抑制治疗SAA患者18例,并随访远期疗效。结果:18例患者总有效率为72.2%,治疗前中性粒细胞、血小板、网织红细胞计数的高低及病程长短与疗效无相关。结论:以ATG为主的强化免疫抑制治疗可显著提高SAA的疗效。

小儿外周血造血干/祖细胞采集效果和安全性的研究

目的探讨小儿外周血造血干/祖细胞采集的效果和安全性。方法32名供者经粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员后,应用血细胞分离机进行外周血干/祖细胞采集。循环血量2～6 L。采集中,监测病人的血压、心率、呼吸、MNC(单个核细胞)、WBC、RBC、Hb、Hct和Plt及血清Ca2+浓度的变化。采集的MNC液用CD34单抗标记后检测CD34+细胞数,并同时作CFU-GM集落培养。结果32例共进行了89次干/祖细胞采集,机器平均每次循环血量2.5个血容量。MNC采集效率达(64.78±3.23)%,每次采得MNC液60ml,获得MNC为(3.1±0.6)×108/kg;CD34+为(2.8±0.6)×106/kg及CFU-GM(2.6±0.5)×105/kg。术中供者无任何不良反应。采集前后血压、心率、呼吸、RBC、Hb、Hct和血清Ca2+浓度无明显变化(P>0.05),但Plt数从采集前的159.63×109/L下降到采集后的112.78×109/L,下降幅度达29.35%。结论采用CS-3000PLUS血细胞分离机采集小儿外周血造血干/祖细胞是一种有效和安全的方法,供者仅需2～3次采集就能获得异体外周血造血干/祖细胞移植所需的干/祖细胞数量。

大剂量化疗后口腔溃疡的护理

目的:总结白血病患者大剂量化疗后发生口腔溃疡的临床观察及护理,以提高护士对相关病情的观察及护理水平。方法:对急性白血病患者大剂量化疗后出现口腔溃疡的观察、护理和治疗中的问题进行分析和总结。结果:36例中,有75%的患者发生不同程度的口腔溃疡,经过综合护理,均在7～12天内好转。结论:针对不同的患者进行综合护理,是对大剂量化部后发生口腔溃疡护理的关键。

硝苯地平对糖尿病患者血小板聚集功能和胞质钙的影响

目的:探讨钙通道阻断剂硝苯地平对糖尿病患者血小板聚集(platelet aggregation,PAG)功能和血小板胞质游离钙(血小板[Ca2+]i)的作用。方法:用比浊法测定PAG,Fura-2荧光测钙技术测定血小板[Ca2+]i,观察硝苯地平对糖尿病患者PAG和血小板[Ca2+]i的影响。结果:①糖尿病患者PAG为(74.89±13.68)%,高于正常人的(61.58±13.49)%(P<0.05);②糖尿病患者的静息血小板[Ca2+]i值、钙释放、钙內流分别为(124.50±38.13)nmol/L、(497.09±95.07)nmol/L、(354.30±75.00)nmol/L,高于正常人的(106.16±24.22)nmol/L、(458.02±83.74)nmol/L、(320.42±85.22)nmol/L(P<0.05);③硝苯地平以浓度依赖的方式抑制血小板钙内流,IC50约为7.5μmol/L,7.5μmol/L硝苯地平对凝血酶激动的糖尿病患者血小板钙内流的抑制率为(17.85±11.93)%,对PAG的抑制率为(32.26±20.43)%。结论:糖尿病患者血小板聚集率、静息血小板[Ca2+]i及钙运动均高于正常人;钙通道阻断剂硝苯地平对糖尿病患者的血小板钙运动有遏制作用。

85例多发性骨髓瘤的临床分析

目的总结多发性骨髓瘤(MM)的临床特点。方法对85例 MM 患者的临床资料进行回顾性分析。结果 85例患者中,首发症状骨痛52例(61%),81例(95%)有不同程度的贫血,26例(31%)有血钙升高,36例(42%)有肾功能不全。肾功能不全的发生率,60 岁以上组与60岁以下组、IgG 型与 IgA 型比较均有统计学意义(P＜0．05)；骨质有破坏的患者与骨质没有破坏的患者骨髓中浆细胞比例差异无显著性(P＜0．05)；初治患者用 MP 方案与 M_2方案疗效差异无显著性。随访37例中5例生存,32例死亡,其中死于感染7 例,多器官功能衰竭8例,肾功能衰竭4例,颅内出血4例,高钙血症3例,急性左心衰竭2 例。结论老年 MM 易发生肾功能不全,IgA 型较 IgG 型易发生肾功能不全；MM 患者骨髓中的浆细胞比例与骨质破坏无关；应用 MP 方案和 M_2方案治疗初发的 MM 疗效相似。

试析21世纪医学人才的培养

中国医学教育的目的是培养出能够在21世纪为中国人民提供最佳医疗服务的医务工作者。一个医学生只有具备良好的医德、医风,良好的交流能力和将基础理论与医疗实践相结合的能力,提高自己解决问题的能力,深刻理解循证医学原则并灵活运用,培养自己的法律意识,才能成为能够在21世纪为中国人民提供最佳医疗服务的医务工作者。

低分子量肝素治疗急性早幼粒细胞白血病合并弥漫性血管内凝血的疗效

目的:评价低分子量肝素(LMWH)治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)合并弥漫性血管内凝血(DIC)的临床疗效。方法:回顾性分析2002年1月至2006年12月APL合并DIC住院患者18例,在治疗原发病、补充凝血因子及抗血小板治疗的同时加用低分子量肝素的疗效。结果:18例APL合并DIC患者中有12例治愈,显效5例,1例死亡,有效率94%。结论:低分子量肝素用于治疗APL合并DIC是经济、安全及有效的;而积极治疗原发病、补充凝血因子、抗血小板聚集治疗是治疗成败的关键。

超强预处理异基因造血干细胞移植伴随GVL诱导策略预防难治性急性髓系白血病复发的临床观察

目的 探讨超强预处理异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）伴随移植物抗白血病（GVL）诱导策略预防难治性未缓解急性髓系白血病（AML）移植后复发的有效性.方法 2001年5月至2013年6月于南方医科大学南方医院、广州军区总医院、中山大学附属第二医院和中山大学附属第三医院行allo-HSCT的72例难治性AML患者纳入此前瞻性研究.序贯超强预处理方案为氟达拉滨＋阿糖胞苷＋全身放疗＋环磷酰胺＋鬼臼乙甙.GVL诱导策略包括：对移植后30 d内未发生急性移植物抗宿主病（aGVHD）者予快速递减免疫抑制剂,移植后60 d内未发生Ⅱ度或以上aGVHD者予供者淋巴细胞输注（DLI）.结果 移植后中位随访655（1 -4 200）d.除2例在移植后1周内分别死于感染和预处理相关毒性外,其他患者均获得完全缓解.预处理相关致死率为1.4％（1/72）.1年aGVHD和2年慢性GVHD（cGVHD）累积发生率为60.7％±5.0％和58.5％±4.7％.5年白血病累积复发率为29.6％±6.6％,5年非复发累积死亡率为28.8％±6.0％,5年累积总生存率和无病生存率为51.0％±6.5％和49.9％±6.4％.DLI、cGVHD和移植第0天（回输于细胞前）骨髓幼稚细胞数是移植后复发[HR（95％ CI）：0.042（0.007 -0.688）、0.009（0.003 -0.345）、3.385（1.451 -7.899）]和生存[HR（95％ CI）：0.315（0.146 -0.621）、0.416（0.200 -0.866）、1.332（1.158 -1 533）]的独立预后因素.结论 序贯超强预处理allo-HSCT伴随GVL诱导策略有可接受的移植相关毒性,能降低难治性AML复发率和提高其生存率.

自体外周血干细胞移植治疗复发性多软骨炎一例

复发性多软骨炎（relapsing polychondritis，RP）是一种较罕见的累及多部位软骨的炎性破坏性疾病，目前尚无统一的治疗方案，其治疗主要靠糖皮质激素及免疫抑制剂。大多数RP患者上述治疗可有效地控制病情，但也有少数难治性患者常规治疗病情不能得到控制或者药物不能减量。

普伐他汀对家兔血小板源一氧化氮系统影响的实验研究

目的动态观察普伐他汀治疗前后血小板源一氧化氮(NO)系统的变化及其与动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)进程的关系.方法高胆固醇饲养诱导AS新西兰白兔模型30只.设普伐他汀药物干预组(A组,0周时开始服用普伐他汀10 mg/d至24周)、普伐他汀药物治疗组(B组,在高胆固醇饲养(12周时开始服用普伐他汀10 mg/d至24周)、无药物对照组(C组,0～24周均不用药).采用RT-PCR方法检测A、B、C三组在0,6,12,18,24周不同时间血小板源内皮型氧化氮合酶(eNOS)基因mRNA和诱导型氧化氮合酶(iNOS)基因mRNA表达、氧化氮合酶(NOS)活性及NO含量的变化;通过大体病理形态证实不同时间大动脉AS程度及斑块形成情况.结果血小板源eNOSmRNA在0,6,12,18,24周时的表达量:A组无明显改变;B组分别是0.95±0.77,0.53±0.33,0.49±0.25,0.83±0.28,1.00±0.77(P＜0.05);C组分别是0.82±0.16,0.40±0.29,0.33±0.29,0.51±0.23,0.19±0.12(P＜0.05).6,12周时B组和C组与A组比较明显降低(P＜0.05);18,24周时,B组与A组无明显差异,但A组和B组较C组明显增高(P＜0.01).iNOS mRNA表达在A、B、C三组不同时期均无变化.NOS活性及NO含量在三组不同时期变化与eNOS mRNA相似.大体形态:A组未见AS形成;B组12周时见大动脉内膜粗糙,有大量脂纹,24周时有部分大动脉仍有脂纹,但内膜较光滑,未见斑块;C组24周时各大动脉均见大量斑块或脂纹.结论随着高胆固醇血症(HC)及AS的形成,血小板源eNOS mRNA表达量、NOS活性及NO含量逐渐降低;普伐他汀能上调血小板源eNOSmRNA表达,提高NOS活性,并能稳定AS病变的继续发展或使其逆转.

家兔动脉粥样硬化与血小板源内皮型氧化氮合酶表达的相关性

目的探讨家兔动脉粥样硬化及斑块形成与血小板源内皮型氧化氮合酶（eNOS）表达的关系。方法设立模型组、治疗组和非治疗组及对照组，每组家兔6只。模型组、治疗组和非治疗组每天给予胆固醇饮食，至12周建立家兔动脉粥样硬化模型，建模后继续喂养至24周，同时治疗组服用普伐他汀10mg／d；非治疗组仅给予普通饮食。实验终点剥离家兔主动脉观察大体和组织病理形态，反转录一聚合酶链式反应（RT—PCR）方法检测血小板源eNOS／mRNA水平。结果模型组和非治疗组均可见明显动脉粥样硬化和（或）斑块形成；主动脉最大脂纹或斑块厚度占整个血管壁厚度的百分比，对照组、模型组、治疗组和非治疗组分别是0．04±0．02、0．82±0．16、0．33±0．18和0．77±0．14，治疗组与非治疗组比较，差异有统计学意义（F=33．759，P=0．001）。血小板（2～4×10^8／ml）eNOS mRNA表达在对照组、模型组、治疗组和非治疗组分别是1．02±0．28、0．41±0．27、1．00±0．77、0．40±0．29，治疗组较非治疗组明显增高（F=3．544，P=0．02）。结论血小板源eNOS表达与动脉粥样硬化及斑块的形成呈负相关；普伐他汀对动脉粥样硬化及斑块的逆转作用可能与血小板源eNOS有关。

经治重型β地中海贫血的股骨骨髓MR成像分析

目的探讨经治重型β地中海贫血(以下简称地贫)股骨骨髓的 MRI 特征。方法对35例重型β地贫行股骨近段 MR 检查,同时选取年龄、性别匹配的正常儿童45例作为对照。对股骨骨髓进行 SE、快速场回波序列(fast field echo,FFE)冠状面成像。在 SE T_1WI 上判断红黄骨髓并将骨髓分布分为5组,在 FFE 序列上判断骨髓内的铁沉积,并进行临床相关性分析。结果 35例地贫,FFE 序列上15例股骨近端骨髓出现铁沉积,红黄骨髓表现为极低信号。骨髓的铁沉积与年龄有关(P=0.032)。T_1WI 上,30例重型地贫骨髓分布为Ⅲ和Ⅳ组,而正常儿童为Ⅰ和Ⅱ组,两者之间差异有统计学意义(P<0.001),且重型地贫骨髓分组与输血量相关(P=0.049)。结论经治重型地贫股骨近段骨髓红骨髓增生,骨髓内可出现铁沉积。骨髓的增生与输血治疗、铁沉积及年龄有一定的关系。

急性白血病合并弥散性血管内凝血41例

目的探讨急性白血病(AL)合并弥散性血管内凝血(D IC)的临床特点及诊治经验。方法回顾性分析41例AL合并D IC患者的临床资料,包括:白血病分型、临床症状、D IC发生的时间、实验室检查的相关结果及疗效等。结果AL尤其是急性早幼粒细胞白血病合并D IC 90%发生在白血病治疗前,肝素治疗AL合并D IC总有效率为75.6%,低分子肝素与小剂量普通肝素的疗效相同。结论急性早幼粒细胞白血病合并D IC防治的重点是在初发期;出血尤其是颅内出血是AL合并D IC死亡的重要原因;积极治疗原发疾病,有效的抗凝治疗及补充凝血因子是治疗成功的关键。