人神经干细胞移植修复大鼠脊髓损伤的实验研究

目的研究人神经干细胞（hNSCs）移植对大鼠脊髓损伤的修复作用，并初步探讨其作用原理。方法分离、培养和鉴定hNSCs。24例成年SD大鼠分为移植组12例和对照组12例，均采用NYU-Ⅱ型脊髓打击器制作脊髓损伤模型，第9天移植组于损伤脊髓中心分别注入经CM-DiI标记的hNSCs混悬液，对照组注入人DMEM／F12培养液。术后第4、8周取损伤部位脊髓，免疫组织化学染色检测移植细胞的存活和分化；术后每7天行BBB评分，评定大鼠后肢运动功能恢复情况。数据进行成组设计资料的t检验。结果成功建立hNSCs的体外培养体系；移植的hNSCs在大鼠脊髓内存活超过8周，并向脊髓损伤头尾端迁移，免疫组织化学荧光染色示移植细胞可分化为神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞；移植组大鼠BBB评分高于对照组（P〈0．05）。结论移植到大鼠损伤脊髓中的人神经干细胞可分化为神经元和神经胶质细胞，并可促进脊髓损伤大鼠后肢运动功能恢复。

通用型脊髓打击器的研制与脊髓损伤动物模型的建立

目的:研制一种通用型脊髓打击器,并评估其制作脊髓分级挫伤动物模型的稳定性。方法:依据重物坠落致伤原理,设计一种通用型脊髓打击器;将50只SD大鼠,分为3个实验组和1个对照组,实验组应用该打击器以质量为20g的打击棒在不同高度实施打击:12.5mm组(A组,n=12),25mm组(B组,n=12),50mm组(C组,n=14),对照组仅行椎板切除,不打击(n=12),分别于术前、术后第2天、1周至6周进行大鼠BBB运动评分,方差分析比较各组各时间点的BBB评分;术后1周和6周取材行组织学观察,用Photoshop CS软件直方图命令处理连续切片中最大受损面积的图像,计算大鼠脊髓最大受损面积比;对BBB评分与大鼠脊髓最大受损面积比进行相关分析。取4只国产家猪,应用该打击器以50g×150mm打击能量打击后制备胸髓半侧挫伤模型,于术前、术后第2天和第7天行改良Tarlov分级法评价猪后肢功能,并进行组织学观察。结果:通用型脊髓打击器能够准确定点、定高打击制作动物脊髓损伤模型。大鼠分级脊髓挫伤模型在各个时间点上BBB评分差异有统计学意义(P<0.05),A组和B组在术后1周后肢功能有不同程度恢复,而C组至术后6周均无明显恢复,对照组无功能障碍。大鼠和猪脊髓组织学表现均为以打击震中为中心的离心纵向损伤。大鼠脊髓最大受损面积比在各损伤组组内齐同、组间差异有统计学意义(P<0.05),脊髓最大受损面积比与BBB评分呈密切负相关关系(r=0.89807,P<0.001)。猪脊髓半侧挫伤后Tarlov分级法评价显示为中重度损伤。结论:研制的通用型脊髓打击器可成功建立不同损伤程度、稳定性高的大鼠急性脊髓挫伤模型,并可用于建立猪脊髓挫伤模型。

自组装peptide胶对神经干细胞在大鼠急性损伤脊髓中细胞分化的影响

目的观察自组装peptide胶对神经干细胞（NSCs）在大鼠急性期损伤脊髓中的细胞分化的影响。方法分离、培养和鉴定大鼠NSCs与自组装peptide胶共培养；SD大鼠25只采用NYU—Ⅱ型脊髓打击器制作T10脊髓损伤模型；急性期于损伤脊髓区分别行注射移植，其中联合细胞移植组（n=10）、单纯细胞移植组（n=10）及对照组（n=5）。术后第2、4、8周取损伤部位脊髓，免疫组织化学染色检测移植细胞的分化。结果成功建立大鼠NSCs的体外培养体系；移植的NSCs在大鼠脊髓内存活超过8周，单纯移植组、细胞分化比例较低，分化的NSCs主要为表达胶质纤维酸性蛋白（GFAP）抗原细胞，未见NSCs分化为表达微管相关蛋白（MAP2）标志抗原细胞；联合移植组，细胞分化比例较高；NSCs可分化为表达MAP2、Oligo、GFAP标志抗原细胞。结论自组装peptide胶能够提高神经干细胞在大鼠急性期损伤脊髓中的分化比率，并有部分细胞可分化为表达神经元特异抗原的细胞。

大鼠脑源性神经营养因子基因T载体的构建及鉴定

目的:探讨利用T载体完成大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)聚合酶链式反应(polymerasechainreac-tion,PCR)产物克隆的可行性。方法:提取大鼠脑组织总RNA,利用M-MLV逆转录酶及oligo-dT引物逆转录合成cDNA第一条链,再利用exTaq酶及BDNF上、下游引物扩增出BDNFcDNA,最后利用BufferⅠ连接液将BDNF基因克隆入T载体用于测序及下一步克隆。结果:成功构建了BDNF基因T载体,经双脱氧链终止法测序证实为大鼠BDNF基因。结论:利用T载体克隆BDNF基因PCR产物简便、快捷,成功率高。

应用新型脊髓打击器建立急性脊髓挫伤动物模型

可靠性高、重复性好的脊髓损伤（SCI）模型对于阐明其病理生理机制和评价损伤后干预手段的效果非常关键。遵循重物坠落致伤法的原理。我们研发了可通用于大小实验动物的新型脊髓打击器（命名为SS-Ⅱ型），结合调节打击高度，建立相应的不同程度脊髓挫伤模型。

颈髓弥散张量成像在肌萎缩性侧索硬化诊断中的应用

目的初步探讨颈髓弥散张量成像（DTI）在肌萎缩性侧索硬化（ALS）诊断中的应用价值。方法选择自2000年1月至2007年1月中山大学附属第二医院骨科收治的28例ALS患者为患者组，20例同期门诊查体健康成年人为对照组，对2组成员进行常规MRI扫描及DTI检查，获取颈髓MD值及FA值的直方图，并对ALS患者颈髓DTI弥散张量值与患者ALS残损功能评分量表（ALSFRS）评分进行相关性分析。结果与对照组相比，患者组颈髓FA值和颈髓横断面积明显降低，差异有统计学意义（P〈0．05）；MD值轻微增加，差异无统计学意义（P〉0．05）。患者颈髓FA值与ALSFRS评分高度相关（r=0．730，P=0．000），与MD值等指标无相关关系。结论ALS患者颈髓DTI显像FA值显著降低，FA值可能成为ALS诊断中的神经影像学阳性支持指标；颈髓的弥散张量值与ALSFRS结合，可以更全面反映ALS患者的病情进展。