运用蛋白质组学技术研究结肠黏膜、腺瘤及腺癌组织蛋白的差异表达

【目的】通过比较结肠正常黏膜、腺瘤、腺癌组织之间的蛋白质组表达差异,寻找结肠腺癌相关的蛋白质,筛选结肠癌早期诊断的分子标志物。【方法】运用比较蛋白质组学技术,对8例结肠癌患者(伴有腺瘤)的正常黏膜、腺瘤、腺癌组织提取的总蛋白进行双向电泳(2-D),分析凝胶图片选择两两间差异表达超过2倍的蛋白质进行MALDI-TOF/TOF质谱分析和生物学信息分析。【结果】成功建立结肠正常粘膜、腺瘤、腺癌的双向凝胶电泳图谱,在凝胶电泳图谱中平均蛋白质斑点数分别为3066、2986和3289,其中两两间表达差异超过2倍的斑点共有31个,质谱分析和数据库检索共鉴定出18种蛋白质,包括keratin8、S100A6、protein disulfide isomerase等。从功能分析,这些差异蛋白与癌细胞的发生、增殖、分化、转移等相关。【结论】比较蛋白质组学能较好地提示结肠腺癌与腺瘤及正常组织间的蛋白质表达差异,而对相关差异表达蛋白的研究有可能为结肠癌的早期诊断和治疗提供新的分子靶向。

MEK5基因-1118C>T多态性与结直肠癌的关联性研究

目的:通过实验探讨MAPK信号通路MEK5基因启动子区多态性与结直肠癌(colorectal cancer,CRC)易感性的关系。方法:采用病例对照法,收集737例散发性CRC患者(实验组)及703例健康人(对照组)血液DNA,利用TaqMan-MBG荧光探针法检测MEK5基因启动子区多态性并进行流行病学分析。结果:实验组饮酒和吸烟者比例较对照组明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。MEK5基因位点-1118C>T等位基因在CRC患者人群与健康对照中分布无统计学差异(P>0.05)。但在BMI≥24kg/m2的肥胖人群中,-1118C>T突变基因型(CT+TT)较野生型CC有增加CRC风险的趋势(OR=1.42,95%CI=0.97～2.08,P>0.05),-1118C>T突变基因型与饮酒和肥胖存在交互作用,使CRC发病风险增加(OR=1.73和1.19;95%CI=1.24～2.42,1.04～1.37,P<0.01,P<0.05)。结论:饮酒和吸烟是散发性CRC发病的独立危险因素,MEK5基因-1118C>T多态性单独与CRC的发病无显著相关性,但其突变基因型(CT+TT)与饮酒和肥胖两个环境因素在增加CRC风险性上存在交互作用,使CRC发病的风险增加。

ERK5在结直肠癌组织中的表达及其与结直肠癌转移的关系

目的:检测和分析细胞外信号调节激酶5(ERK5)蛋白在原发性结直肠癌组织和癌旁正常黏膜组织中的表达情况及其与结直肠癌临床病理参数的关系,探讨ERK5的临床意义。方法:使用组织芯片和免疫组化的方法检测338例原发性结直肠癌癌组织和80例癌旁正常组织中ERK5的表达,分析ERK5表达与结直肠癌的临床病理参数及预后的相关性。结果:80例癌旁正常黏膜中,ERK5低表达59例(73.8%)、高表达为21例(26.2%);338例结直肠癌组织中ERK5低表达204例(60.4%)、高表达134例(39.6%);二者中的ERK5蛋白表达有显著差异(P<0.05)。在338例结直肠癌组织中,27例发生远处转移患者的癌组织中ERK5高表达率为63.0%,而311例未发生远处转移患者的癌组织中ERK5高表达率为37.6%,二者之间有显著差异(P<0.05)。但癌组织中ERK5的表达水平与患者性别、年龄、体重指数、肿瘤位置、T分期、N分期、TNM分期和分化程度无明显相关性(P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示在结直肠癌组织中ERK5高表达的病人总体5年生存率与低表达组无明显差异(P>0.05)。结论:ERK5蛋白在癌组织中的表达较癌旁正常组织高;发生远处转移的结直肠癌组织中ERK5蛋白的表达水平明显高于未发生远处转移的癌组织中ERK5水平。ERK5可能是一个促进肿瘤远处转移的因子。

ERK5基因-322G/T多态性与散发性结直肠癌易感性的关系

目的:探讨有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路ERK5基因-322G/T(rs3866958)单核苷酸多态性与中国华南地区散发性结直肠癌(CRC)易感性的关系。方法:采用Taqman-MGB荧光探针法检测华南地区835例肠癌和908例正常对照的ERK5基因-322G/T单个核苷酸的多态性。结果:ERK5基因单核苷酸多态性位点-322G/T等位基因在结直肠癌患者和健康对照人群中分布差异无统计学意义(P>0.05),但在BMI≥24kg/m^2的肥胖人群中-322G/T的分布差异显著,与GG基因型相比,GT、TT基因型携带者的CRC发病风险下降42.4%(OR=0.576,95%CI 0.413-0.804,P<0.01)。结论:ERK5基因-322G/T单核苷酸多态性与结直肠癌发病无明显相关性,但可显著降低肥胖患者发病风险;-322T基因型是中国南方人群散发性结直肠癌肥胖患者的独立保护因素。

NSUN2通过靶基因PRPS2调控核苷酸代谢从而介导肝癌细胞的增殖

目的:探讨NOP2/Sun RNA甲基转移酶家族成员2(NOP2/Sun RNA methyltransferase 2,NSUN2)在肝癌发展中的功能和机制。方法:比较肿瘤基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)肝癌数据集中肝癌组织与正常组织NSUN2的mRNA表达水平;Western blot检测9对肝癌患者肝癌组织与癌旁组织中NSUN2的蛋白表达水平;Kaplan-Meier法分析肝癌TCGA数据集中NSUN2对肝癌生存预后的影响;活细胞动态成像与分析系统记录经shNSUN2慢病毒感染的Huh7和SNU182细胞的实时生长情况及集落形成实验检测细胞增殖能力;基因富集分析(GSEA)肝癌TCGA数据库中高表达NSUN2组富集的信号通路,探索NSUN2可能甲基化的关键基因和参与的信号通路;Pearson法分析TCGA数据集中NSUN2与预测基因的相关性;在SNU182细胞中敲低NSUN2后,用RT-qPCR和Western blot验证预测基因表达的变化。结果:TCGA数据集分析结果及Western blot实验结果显示NSUN2在肝癌组织中高表达。敲低NSUN2后Huh7细胞和SNU182细胞的增殖能力降低。基因富集分析结果显示嘌呤和嘧啶代谢通路在高表达NSUN2组富集。重亚硫酸盐甲基化测序(Bisulfite-Seq)结果与基因富集分析结果存在共同变化基因有PRPS2、ADSL、POLR2D、CANT1、ENTPD4、TXNRD1和CAD。Pearson相关分析结果显示TCGA数据集中NSUN2与PRPS2的mRNA表达呈正相关(r=0.3283,P<0.05)。RT-qPCR和Western blot结果验证了敲低NSUN2后抑制了SNU182细胞中PRPS2的mRNA和蛋白表达。RT-qPCR结果显示敲低NSUN2后嘌呤从头合成相关基因的表达降低。结论:NSUN2可能通过调控PRPS2的表达参与核苷酸代谢,从而影响肝癌细胞增殖。

新型冠状病毒肺炎免疫学特征及免疫治疗策略的研究进展

2019年12月以来,全国暴发了由新型冠状病毒(SARS⁃CoV⁃2)感染的新型冠状病毒肺炎(COVID⁃19)疫情。患者的免疫学特征对COVID⁃19的临床诊疗有着重要作用。本文就新型冠状病毒免疫学特征和治疗策略的研究进展进行综述,旨在为新冠肺炎疫情的防控诊治提供参考意见。

早期结直肠癌和癌前病变实验诊断技术中国专家共识

近年来我国结直肠癌发病率逐年上升,且出现年轻化趋势。结直肠癌是为数不多的采用适当筛查方法可以发现癌前病变或早期肿瘤,从而通过适宜临床干预降低发病率和病死率的恶性疾病。肠镜为公认的筛查金标准,但我国人口众多,医疗资源分布不均,无法成为大规模筛查手段。本文主要介绍了常用及近年来新的无创实验诊断技术,介绍了各项技术在结直肠癌早诊和癌前病变筛查方面的优缺点,旨在为个人、医疗机构以及政府相关部门选择检查方法和制定筛查策略提供参考。

放射性肠损伤血管病变基础及其诊疗进展

放射性肠损伤是腹盆腔放疗最常见的并发症之一,严重影响患者生活质量。放射性肠损伤根据发生部位可分为放射性小肠炎、结肠炎及直肠炎。放射性肠损伤的病理特征主要包括间质纤维化、黏膜水肿、溃疡、炎性细胞浸润等,且存在显著的血管病变。其在内窥镜下表现为毛细血管扩张出血,超声下具有肠壁弥漫性增厚、血流信号增多的表现。此外,放射性肠损伤还具有乙状结肠远端和直肠壁厚度增加、骶前间隙宽度的增加等其他影像学表现。放射性肠损伤发生发展中的关键因子包括血管抑素、血小板衍生生长因子和CXCL16等,待明确的机制包括异常升高的血管抑素通过哪些信号通路影响血管内皮细胞,进而抑制血管生成和导致稳态失衡,以及巨噬细胞表达的CXCL16如何作用于相应受体促进成纤维细胞和血管平滑肌细胞转变为肌成纤维细胞等。针对放射性肠损伤血管病变,进行靶向治疗,将是令人期待的研究方向。