基于质谱技术的早产儿视网膜病血代谢产物的初步研究

目的应用液相色谱-串联质谱技术(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)和代谢组学方法探讨早产儿视网膜病(retinopathy of prematurity,ROP)患儿出生血代谢产物差异,寻找ROP早期诊断的新的生物标记物。方法收集2013年1月—2016年12月中山大学附属第六医院住院的21例ROP患儿(ROP组)及同期21例非ROP患儿(非ROP组)干血片标本,利用LC-MS/MS进行代谢产物测定,运用正交偏最小二乘判别分析法(orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA)寻找差异物质和生物标记物。结果ROP组和非ROP组患儿血代谢谱有明显差异,经模式识别分析、代谢物得分图(Score-plot,S-plot)、权重分析初步得出10个差异较大的氨基酸。进一步统计分析发现ROP组患儿血谷氨酸、亮氨酸、天冬氨酸、鸟氨酸和甘氨酸水平明显高于非ROP组,差异有统计学意义(P<0.05)。受试者工作特征曲线分析显示,谷氨酸及鸟氨酸对ROP诊断价值最高。结论ROP患儿与非ROP患儿比较血代谢产物具有明显差异,谷氨酸及鸟氨酸是诊断ROP的代谢标志物。LC-MS/MS结合代谢组学分析方法在ROP早期识别与诊断中具有潜在的应用价值。

970例新生儿遗传性代谢病筛查及分子诊断结果分析

目的研究新生儿期遗传性代谢疾病(IMD)的发病率、临床特征及诊断方法。方法留取新生儿科970例新生儿的尿液样本,采用尿素酶预处理-气相色谱-质谱联用技术(UP-GC-MS)进行遗传性代谢病的诊断;对于确诊的患儿,收集患儿及其父母的外周血样本进行致病基因的Sanger测序分析。结果 970例新生儿中通过UP-GC-MS技术确诊遗传性代谢病5例,阳性率为1/194,包括甲基丙二酸尿症2例、尿素循环障碍2例、枫糖尿症1例。5例患儿相关致病基因的Sanger测序结果均发现致病突变。结论对于病因不明的新生儿期患儿应及早进行遗传性代谢疾病筛查,UP-GC-MS是诊断新生儿遗传性代谢病的快速有效方法,其检测结果可为患儿的早期诊断和治疗提供依据。对于阳性患儿,基因检测可进一步探讨其分子水平的致病病因,为临床医生提供可靠的分子检测结果,有效地为后续的临床治疗和遗传咨询提供依据。

妊娠高血压对产妇及其新生儿血脂肪酸代谢的影响

目的研究妊娠高血压(HDP)对产妇及其新生儿脂肪酸代谢的影响。方法选取30对HDP产妇及其新生儿纳入观察组,另选30对健康产妇及其新生儿纳入对照组,利用串联质谱技术(MS-MS)及定量软件测定和分析样本中脂肪酸代谢谱[游离肉碱(C0)和酰基肉碱]。运用正交偏最小二乘判别分析法(OPLS-DA)对2组血代谢产物进行代谢组分析并寻找重要的差异物质。结果2组产妇及其新生儿血脂肪酸代谢谱比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。在代谢组模式识别分析结合变量权重图(VIP)分析发现,产妇有2个权重较大的物质,分别为C0和乙酰基肉碱(C2)。与对照组产妇比较,观察组产妇C0水平升高,C2水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);新生儿有6个权重较大的物质,分别为C0、C2、丙酰基肉碱(C3)、棕榈酰基肉碱(C16)、棕榈烯酰基肉碱(C16:1)和十八碳烯酰基肉碱(C18:1),与对照组新生儿比较,观察组新生儿的C16:1、C18:1水平升高,C3水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);而2组新生儿C0、C2及C16水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。2组新生儿大多数脂肪酸水平均高于同组产妇水平,而新生儿中链脂肪酸(尤其是C8、C10)水平低于产妇水平。结论MS-MS技术结合代谢组学分析可作为评估HDP母婴代谢情况的重要方法。

基于目的基因捕获的高通量测序技术在遗传代谢病诊断中的应用

目的探讨基于目的基因捕获的高通量测序技术对串联质谱联合气相色谱-质谱技术在遗传代谢病（IMD）诊断中的应用价值。方法收集中山大学附属第六医院遗传代谢病实验室通过串联质谱联合气相色谱-质谱技术检测的疑似阳性10例患儿及其父母外周血样本，通过包含有153个常见的IMD致病基因捕获探针的高通量测序技术对患儿进行基因检测，采用Sanger测序技术对患儿阳性突变位点进行验证，并对其父母相应的位点进行检测。结果10例疑似IMD患儿，通过高通量测序技术确诊8例，包括全羧化酶合成酶缺陷症3例，甲基丙二酸血症mut型、甲基丙二酸血症cblB型、枫糖尿症Ⅰa型、鸟氨酸氨甲酰转移酶缺乏症、Citrin缺陷症各1例。其中有1例经串联质谱联合气相色谱-质谱诊断为异戊酸血症的患儿，其基因检测发现1个错义突变（c．158G〉C，p．R53P）和1个同义突变（c．732C〉T，p．D244D）；另外1例疑诊为Citrin缺陷症的患儿，其基因检测发现1个错义突变（c．1156G〉A，p．G386S）和1个同义突变（c．1194A〉G，p．L39SL），这2例基因检测结果在理论上尚不能确诊。10例患儿中鸟氨酸氨甲酰转移酶缺乏症患儿的致病突变属于自身新发生的基因突变，而其他患儿的致病突变均遗传于各自的父母。此外，高通量测序所检测的结果均经Sanger测序验证，二者结果全部一致。结论基于目的基因捕获的高通量测序技术在疑似IMD的检测中结果精确，不仅可为临床医师提供可靠的分子诊断依据，还能精准地进行疾病分型，有效地为后续临床治疗和遗传咨询提供依据。

尿素酶预处理-气相色谱-质谱技术筛查遗传性代谢病高危儿

目的通过尿素酶预处理-气相色谱-质谱法(UP-GC-MS)检测1 330例高危儿遗传性代谢病(IMD)及代谢紊乱的发病率,为临床诊断和治疗提供依据。方法留取出生1 d～3岁高危儿尿液样本,尿液标本经尿素酶去尿素、加内标、除蛋白、真空干燥处理、残余物用双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺/三甲基氯硅烷衍生后进样,应用气相色谱-质谱联用仪分析其尿液中有机酸、氨基酸、糖类、多醇、嘌呤和嘧啶等成分。结果 1 330例高危儿中,共890例(66.9%)存在代谢异常。其中确诊IMD 21例(1.6%),包括甲基丙二酸尿症8例,高苯丙氨酸血症3例,尿素循环障碍、半乳糖血症、枫糖尿症、异戊酸血症和丙酸血症各2例;疑似IMD 49例(3.7%),包括酪氨酸血症23例、脂肪酸代谢障碍12例、尿素循环异常8例和Citrin缺陷症6例,其中4例经过串联质谱检测和基因分析得到确诊;确诊非遗传因素所致代谢病40例(3.0%),包括乳酸血症28例及甘油尿症12例;此外,还有780例(58.6%)高危儿存在代谢紊乱,表现为尿半乳糖、4羟基苯乳酸、N-乙酰酪氨酸、乳酸、乳糖、琥珀酸、酮性双羧酸水平增高以及丝氨酸/苏氨酸比例异常。结论 UP-GC-MS是诊断小儿IMD和代谢紊乱的有效方法,必要时应联合应用串联质谱检测及基因分析进行诊断。

质谱技术在小儿遗传性代谢病筛查中的应用

遗传性代谢病（inherited metabolic disorders,IMD）又称先天性代谢缺陷（inborn errors of metabolism,IEM）,是由于参与体内代谢的某种酶、运载蛋白、膜或受体等的编码基因发生突变,从而导致机体生化代谢紊乱,造成中间、旁路代谢产物蓄积,或终末代谢产物缺乏,引起一系列临床症状的一组疾病[1-2]。IMD多为常染色体隐性遗传,少数为,

尿素循环障碍所致新生儿高氨血症基因筛查和早期干预

目的探讨广东地区新生儿尿素循环障碍(UCD)的发病率,以实现UCD相关新生儿高氨血症(NHA)早期识别与干预。方法收集2019年至2022年广东地区多中心38159个新生儿基因筛查数据,统计UCD新生儿基因阳性率,分析基因筛查中确诊的9例与UCD相关NHA患儿临床干预和疗效。结果UCD基因阳性率0.472%,Citrin缺陷病最常见(基因阳性率0.314%)。其中3例Citrin缺陷病均为SLC 25A13基因c.852_855delTATG纯合致病性变异,不同的确诊和临床干预时期,预后不同。另外6例UCD相关NHA患儿起病早,病情进展快,经积极早期对症治疗后,2例瓜氨酸血症I型患儿好转,4例患儿死亡和1例失访。结论NHA的病因复杂多样,以UCD最为常见,临床表现缺乏特异性,容易漏诊、误诊,早期血、尿代谢筛查联合UCD相关基因筛查可实现UCD相关NHA的早期识别和诊疗,可指导遗传咨询和再次妊娠的产前诊断。

利用CRISPR/Cas9构建甲基丙二酸血症cblC型W203X突变小鼠模型

目的利用CRISPR/Cas9技术构建与人甲基丙二酸血症cblC型W203X突变型一致的小鼠模型。方法通过BLAST比对人和小鼠cblC基因和蛋白序列的保守性,应用CRISPR/Cas9技术进行小鼠受精卵显微注射,获得杂合子F1代小鼠,F1代小鼠通过杂交获得W203X纯合突变型小鼠,并对纯合突变型、同窝杂合型及野生型3种类型小鼠进行血代谢产物丙酰肉碱检测。结果人和小鼠甲基丙二酸血症cblC型的致病基因MMACHC的核苷酸和氨基酸序列高度保守。通过CRISPR/Cas9技术成功获得W203X纯合突变型小鼠,该小鼠模型在生后24 h丙酰肉碱明显升高(P<0.001)。结论利用CRISPR/Cas9技术成功构建了与人甲基丙二酸血症cblC型W203X突变型一致的小鼠模型。

基因筛查技术在新生儿常见遗传病筛查中的应用

目的运用基于目的基因捕获的高通量测序技术对新生儿进行常见遗传病基因检测,了解新生儿常见遗传病的发病率及相关基因致病变异的携带率和变异类型,探讨该技术在新生儿遗传病筛查中的应用价值。方法收集2019年6月至2020年4月广东地区出生的1793例新生儿足跟血,采用基于目的基因捕获的高通量测序技术对138个新生儿常见遗传病相关基因的外显子区域进行检测,变异致病性的解读基于《遗传变异分类标准与指南(2017)》,其中已知致病和可能致病纳入阳性变异,采用Sanger测序技术对阳性变异位点进行验证,并采用计数方法对检测结果进行分析。结果1793例新生儿中,男978例,女815例;共筛出阳性158例,阳性率为8.81%,检测出阳性病种11种。在阳性病种中,常染色体隐性耳聋1A型41例(2.29%),Gilbert综合征或Crigler-Najjar综合征40例(2.23%),葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症33例(1.84%),家族性高胆固醇血症19例(1.06%),钠牛磺胆酸共转运多肽缺陷病18例(1.00%),线粒体非综合征型耳聋2例(0.11%),Citrin缺乏症2例(0.11%),全羧化酶合成酶缺乏症、β-珠蛋白生成障碍性贫血、异染性脑白质营养不良各1例(各占0.06%)。972例携带1个或多个基因的阳性变异位点,共涉及85种疾病,其中携带率较高的疾病为Gilbert综合征或Crigler-Najjar综合征(359例,20.02%)、常染色体隐性耳聋1A型(302例,16.84%)和钠牛磺胆酸共转运多肽缺陷病(291例,16.22%),其高频变异位点为UGT1A1基因c.211G>A位点、GJB2基因c.109G>A位点和SLC10A1基因c.800C>T位点。结论广东地区新生儿常见遗传病为常染色体隐性耳聋1A型、Gilbert综合征或Crigler-Najjar综合征、G6PD缺乏症、家族性高胆固醇血症和钠牛磺胆酸共转运多肽缺陷病,且存在人群高频携带位点;探索性地对新生儿常见遗传病进行基因筛查,可为新生儿基因筛查的开展积累数据和经验。

串联质谱联合二代测序在2万例新生儿遗传病筛查分析中的应用

目的研究新生儿遗传代谢病(IMD)的发病率及诊断方法,并探讨串联质谱及二代测序技术在新生儿遗传病筛查中的应用价值。方法收集广东地区2013年6月至2019年6月出生的20000例新生儿足跟血,采用串联质谱(MS/MS)进行检测并进行遗传代谢病分析,对质谱检测结果高度提示阳性及部分疑似样本进行基因测序分析,并对检测结果进行统计分析。结果20000例新生儿(男10584例,女9416例)中通过MS/MS技术诊断IMD阳性40例,疑似样本45例,阴性样本19915例(其中24例临床高度怀疑IMD),进而对质谱检测阳性、疑似及临床高度怀疑IMD的109例样本进行基因测序分析,共检测出阳性病种17种共63例,阳性率0.315%,分别为有机酸血症25例,尿素循环障碍22例,氨基酸代谢病6例,脂肪酸氧化障碍4例,肝豆状核变性3例,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症2例,半乳糖血症1例。结论MS/MS是新生儿IMD快速有效的筛查方法,而二代测序则提供了明确的分子诊断,因此,基于MS/MS及二代测序技术可为新生儿IMD早期诊断和治疗提供依据。

全羧化酶合成酶缺乏症临床特点和基因突变分析

【目的】探讨全羧化酶合成酶缺乏症(HCSD)的临床及基因突变特点。【方法】回顾性分析2014至2017年经我院遗传代谢病实验室基因检测确诊的6例HCSD患儿的基因检测结果及其临床资料。【结果】共有6例患儿(3女3男),发病年龄7月~7岁3月。临床表现以反复顽固性皮疹为主,部分合并有生长发育落后、神经系统症状。实验室检查3例有高乳酸血症,尿GC-MS检测:均有3-羟基异戊酸(3HIV)、3-甲基巴豆酰甘氨酸(3HMG)、3-羟基丙酸(3HP)和甲基枸橼酸(Me-citrate)增高。血串联质谱检测:均有3-羟基异戊酰基肉碱(C5-OH)增高。患儿入院后予口服生物素及对症治疗,1周后皮疹明显消退。例1~4患儿均为HLCS基因第11外显子发生c.1522C>T纯合子突变。例5患儿HLCS基因第8外显子发生c.1088T>A纯合子突变。例6患儿HLCS基因第11外显子发生c.1544G>A与c.1558G>A复合杂合突变。其中,c.1558G>A未见报道。【结论】全羧化酶合成酶缺乏症的临床表现缺乏特异性,对临床疑诊的病人可进行尿GC-MS和血MS-MS检测。基因检测有助于HCSD的诊断,c.1522C>T纯合子突变可能与早发型HCSD有关;c.1558G>A为新生突变。

Coffin-siris综合征1例并文献复习

目的探讨Coffin-siris综合征(CSS)患儿的临床特征和基因特点。方法收集2018年2月至2019年2月在中山大学附属第六医院儿科确诊的1例CSS患儿的临床表现、实验室检查及基因检测等临床资料,并以“Coffin-siris综合征”、“ARID1B”、“Coffin-siris syndrome”为关键词,对中国知网、万方数据知识服务平台及PubMed 2010年1月至2019年11月收录的论文进行检索。总结CSS患儿的临床表现及基因特点。结果CSS患儿具有独特的面部特征,特定的骨骼四肢畸形,发育和认知迟缓,智力障碍,听力及言语障碍等。ARID1B基因突变,几乎都是自身新发突变,致病变异体几乎都是截断的。本例患儿检测到ARID1B基因杂合变异c.2248C>T(p.R750*),为无义突变,其父母没有携带这个变异,提示突变属于自身新发突变。结论CSS主要是由ARID1B基因变异导致,几乎为自身新发突变,尚未发现明显的基因型-表型相关。本例患儿ARID1B基因杂合变异c.2248C>T(p.R750*),属于自身新发突变,国内未见相关基因报道,可以丰富我国CSS的基因突变谱。

应用串联质谱技术区别早产儿与足月儿血代谢组学生物标志物

目的应用串联质谱和代谢组学方法研究早产儿和足月儿血代谢产物的差异，寻找早产儿血代谢特异的生物标志物。方法收集2014年1月至12月中山大学附属第六医院46例早产儿（早产儿组）和55例足月儿（足月儿组）足跟末梢血液标本，利用串联质谱技术及定量软件测定血样本中氨基酸、脂酰肉碱等代谢产物水平，应用正交偏最小二乘判别分析法对早产儿和足月血代谢产物进行代谢组分析，并寻找重要的生物标记物。结果早产儿组和足月儿组血代谢谱比较有统计学差异，在此模式识别过程结合代谢物得分图和权重图分析发现12个权重较大的物质，其中游离肉碱、丁二酰基肉碱、豆蔻酰基肉碱、棕榈酰基肉碱、棕榈烯酰基肉碱、十八碳酰基肉碱、十八碳烯酰基肉碱、甘氨酸、组氨酸和谷氨酸10种物质在早产儿组中降低；异戊酰基肉碱和精氨酸在早产儿组升高。结论与足月儿组相比，早产儿组具有明显不同的血代谢谱，应用串联质谱技术结合代谢组学分析可作为评估新生儿代谢情况的重要方法，筛选到的重要生物标记物对进一步纠正早产儿代谢紊乱、并合理补充营养具有重要价值。

极低出生体重早产儿尿代谢组学研究

目的探讨极低出生体重早产儿尿代谢谱及通路变化。方法采用前瞻性病例对照研究，选择2014年中山大学附属第六医院出生的极低出生体重早产儿为研究对象，选择同期本院出生的健康足月儿为对照（足月儿组），于出生后24h内收集尿液标本，经尿素酶预处理一气相色谱质谱联用技术测定尿样本中氨基酸、脂肪酸和有机酸等小分子代谢物，应用正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）寻找两组问的差异和生物标志物，结合代谢通路在线网站完成代谢通路富集和重要靶标物质筛选。结果共纳入极低出生体重早产儿组20例，其中男11例、女9例，出生体重（1240±136）g；足月儿组20名，其中男9名、女11名，出生体重（3265±243）g。极低出生体重早产儿组尿代谢谱共富集到氨酰tRNA合成，赖氨酸合成与降解，脂肪酸合成，嘧啶代谢，泛酸盐和辅酶A合成，缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸合成与降解及甘油酯类代谢9条代谢通路，与足月儿组差异均有统计学意义（P=0．000、0．031、0．007、0．008、0．014、0．022、0．022、0．031、0．046）。通过模式识别分析发现12种协方差和相关性较大的代谢物，即潜在靶标物质，其中硬脂酸、软脂酸、肉豆蔻酸、β-氨基丁酸和尿酸在极低出生体重早产儿组明显降低，肌醇、甘露醇、甘氨酸、葡萄糖1、葡萄糖2、甘油酸和N-乙酰酪氨酸7个物质呈上调变化。结论极低出生体重早产儿和足月儿尿代谢谱和通路具有显著差异，基于尿素酶预处理一气相色谱质谱联用技术结合通路富集及多变量数据分析的代谢组方法可为评估新生儿营养状态提供科学依据。

基于质谱技术的早产儿与足月儿尿代谢组学研究

目的 应用气相色谱-质谱和代谢组学方法研究早产儿和足月儿尿代谢产物的差异,寻找早产儿尿液中特异的生物标志物.方法 收集中山大学附属第六医院30例早产儿和20例足月儿的尿液标本,利用气相色谱-质谱技术测定葡萄糖、乳糖、乳酸、甘油、软脂酸、硬脂酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甘氨酸、丙氨酸、苏氨酸、阿拉伯糖醇、木糖、乙酰天门冬氨酸等173种尿代谢产物水平,并应用主成分分析（PCA）和偏最小二乘判别分析（PLS）寻找2组间的差异和生物标志物.结果 1.早产儿尿代谢产物和足月儿有明显的差异,PLS累计解释率R2 Xcum=0.592,预测累计解释率R2 Ycum=0.972,交互校验的复相关系数Q2cum =0.959,利用PCA和PLA可对2组进行判别;2.PCA发现早产儿与足月儿的特异性代谢产物（生物标志物）为硬脂酸、乳酸;3.早产儿与足月儿在氨基酸（缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、丙氨酸和甘氨酸）、脂肪（甘油、软脂酸、硬脂酸）和糖（乳糖、乳酸）代谢通路中的主要代谢产物均具有明显差异.结论 早产儿与足月儿代谢产物具有明显差异,应用色谱-质谱测定尿代谢产物结合代谢组学分析方法可作为评估新生儿体内代谢状况的重要手段,对纠正早产儿体内代谢紊乱、合理补充营养物质具有重要意义.

预防接种诱发急性代谢危象的甲基丙二酸血症二例并文献复习

目的分析2例因预防接种诱发急性代谢危象的甲基丙二酸血症患儿的临床经过,探讨其基因特点及预防接种策略.方法对2例患儿的临床资料及基因检测结果进行回顾性分析,并复习相关文献.结果2例患儿均为女性,例1患儿8月龄,接种乙肝疫苗、A群流感多糖疫苗1 h后出现呕吐、发热、咳嗽、角弓反张,尿气相色谱﹣质谱(GS﹣MS)示甲基丙二酸、甲基枸橼酸升高,血串联质谱分析(MS/MS)示C36.85μmol/L(0.3~3),C3/C20.85(0.02~0.16),血浆同型半胱氨酸浓度4.46μmol/L(0~15),MMAA基因存在C.742 C>T(P.Gln248)纯合突变.例2患儿2岁5月龄,接种乙脑疫苗3 h后出现发热、呕吐、抽搐,尿GS﹣MS示甲基丙二酸、甲基枸橼酸升高,血MS/MS示C36.86μmol/L(0.3~3),C3/C20.42(0.02~0.16),血浆同型半胱氨酸浓度7.05μmol/L(0~15),MUT基因存在C.2150G>T(P.Gly717Val)和C.504del(P.Asp169Ilefs?11)的复合杂合突变,C.504del突变未见人群数据库和文献报道.结论代谢缺陷患儿是预防接种的高危人群,预防接种前的健康管理及接种后监测是减少意外的关键.

卡拿弯病一例临床及基因分析并文献复习

目的总结卡拿弯病的临床及基因突变特征。方法回顾性分析我院确诊的1例罕见的卡拿弯病患儿的临床及基因资料并复习相关文献。结果1岁女性患儿,3月龄发现抬头不稳,4月龄发现听力严重损害,5月龄发现生长发育落后,头颅MR提示双侧大脑半球白质、双侧基底节、丘脑、脑干被盖呈广泛长T1长T2信号改变,双侧对称分布,尿代谢检查提示N-乙酰天门冬氨酸明显增高,基因结果显示患儿天冬氨酸酰基转移酶(ASPA)基因第4外显子区域发生c.554G>T点突变及大片段缺失,确诊为卡拿弯病。数据库检索共获得符合纳入标准的文献27篇,共报道31例卡拿弯病患儿。卡拿弯病的临床症状以精神运动发育迟缓、抬头不稳、头大畸形、肌张力异常为主,包括45种ASPA基因突变,以错义突变为主。结论卡拿弯病临床症状隐匿,可通过尿代谢筛查及ASPA基因分析确诊。本例患儿ASPA基因突变c.554G>T为新突变,可丰富中国卡拿弯病患儿的ASPA基因突变谱。

15例甲基丙二酸血症患儿的临床及基因变异分析

目的分析15例甲基丙二酸血症患儿的临床资料和基因变异特点.方法收集2013年6月至2018年6月通过气相色谱-质谱检测尿中甲基丙二酸水平和液相色谱-串联质谱检测血中丙酰肉碱水平诊断的15例甲基丙二酸血症的患儿的临床特点、诊疗情况、变异基因和预后信息,其中有12例进行了家系基因分析.结果15例患儿临床以喂养困难、反复呕吐、嗜睡、抽搐、发育落后为主.血丙酰肉碱除3例患儿外余均增高,丙酰肉碱/乙酰肉碱比值及尿甲基丙二酸水平均增高.12例患儿检测出MUT基因变异7例、MMACHC基因变异4例、MMAB基因变异1例.MUT共检出9种变异,其中c.1159A>C、753+1delGinsTGGTTATTA和c.504del未见文献报道,且c.1159A>C检出频率最高(28.6%);MMACHC基因共检出6种变异,均为已知致病变异;1例MMAB基因变异患儿为c.289_290delGG与c.566G>A的复合杂合变异,均未见文献报道.15例患儿中有7例在1岁以内死亡(46.7%),8例患儿经治疗后临床症状好转,但有不同程度的体格和(或)运动发育落后.结论甲基丙二酸血症患儿的临床表现复杂,变异基因绝大多数为MUT和MMACHC,1岁以内发病者死亡率高.

足月小于胎龄新生儿血氨基酸谱和酰基肉碱谱分析

目的比较足月小于胎龄(SGA)新生儿和与之配对的足月适于胎龄儿(AGA)血氨基酸和酰基肉碱的差异,探讨足月SGA血代谢谱的变化,为临床干预提供依据。方法选择2018年1月至12月在中山大学附属第六医院出生的79例足月SGA为研究对象,同期在本院出生的按胎龄、性别匹配的79例健康足月AGA为对照,出生后第3天采集干血滤纸片样品进行串联质谱分析,应用正交偏最小乘判别分析(OPLS-DA)寻找2组间的差异和生物标志物。结果足月SGA组出生体质量(2.5±0.2)kg,足月AGA组出生体质量(3.2±0.3)kg。通过OPLS-DA模型分析发现12种权重较大的血代谢物质及2组血代谢物比值分别为:丙酰基肉碱(0.34±0.13比0.42±0.15)、酪氨酸[0.24(0.18,0.27)比0.28(0.22,0.37)]、游离肉碱(0.43±0.14比0.37±0.12)、缬氨酸[0.39(0.35,0.45)比0.44(0.36,0.53)]、辛酰基肉碱(0.33±0.13比0.29±0.09)、肉豆蔻二烯酰基肉碱(0.35±0.12比0.31±0.10)、丁酰基肉碱(0.37±0.13比0.41±0.14)、3-羟基异戊酰基肉碱[0.35(0.25,0.43)比0.35(0.26,0.45)]、葵酰基肉碱(0.26±0.13比0.23±0.08)、异戊烯酰基肉碱[0.33(0.26,0.34)比0.33(0.30,0.35)]、亮氨酸[0.38(0.30,0.47)比0.40(0.33,0.48)]、甲硫氨酸(0.42±0.14比0.46±0.15),其中丙酰基肉碱(t=3.920)、酪氨酸(Z=3.536)和缬氨酸(Z=2.838)在足月SGA组明显降低,而游离肉碱(t=-2.863)、辛酰基肉碱(t=-2.266)和肉豆蔻二烯酰基肉碱(t=-2.194)明显升高,与足月AGA组相比差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论足月SGA新生儿出生后早期血液中氨基酸和酰基肉碱水平与足月AGA存在差异。足月SGA新生儿营养支持中需适量补充芳香族氨基酸和支链氨基酸;其出生后早期通过动员中长链脂肪酸来满足机体能量代谢。

新生儿猝死型肉碱-酰基肉碱移位酶缺乏症患儿的临床特征及基因变异分析

目的分析肉碱-酰基肉碱移位酶缺乏症患儿的临床表现、生化特征及基因变异特点,以提高该疾病的临床认知并为其早期诊疗和产前诊断提供依据。方法对3例无血缘关系的肉碱-酰基肉碱移位酶缺乏症患儿的临床表现、特殊生化检查、基因检测结果进行回顾性分析。通过串联质谱技术(MS-MS)和气相色谱质谱技术(GC-MS)对患儿进行血尿代谢产物检测,通过高通量测序技术对患儿进行基因检测。结果3例患儿分别在出生2~61 d发病,其中2例患儿病情发展迅速,于出生第4天死亡,临床表现为低血糖、反应差、肌张力低下、心律失常及猝死等,另1例患儿出生表现出持续性肝功能异常和发育迟缓,61 d时无诱因发热后猝死。3例患儿干血滤纸片MS-MS结果显示极长链酰基肉碱C14、C16、C18增高,其中C16(8.53~12.08μmol/L,参考值0.50~6.00μmol/L;4.32μmol/L,参考值0.50~2.50μmol/L)特异性最高。3例患儿的尿液GC-MS结果均无特异性代谢产物被检出。基因检测结果提示3例患儿均发生SLC25A20基因c.199-10T>G剪切位点纯合变异,均被确诊为肉碱-酰基肉碱移位酶缺乏症;其父母均为此变异位点的携带者。结论肉碱-酰基肉碱移位酶缺乏症患儿发病急重且进展快,预后差,易猝死,且临床表现缺乏特异性;干血滤纸片MS-MS结果中多种极长链酰基肉碱浓度增高可提示该疾病。SLC25A20基因c.199-10T>G变异是中国人群肉碱-酰基肉碱移位酶缺乏症的主要致病因子。