蛇床子素对酸诱发髓核致炎大鼠神经节神经元的膜电位改变抑制的作用

目的研究不同pH酸刺激下髓核致炎大鼠背根神经节(DRG)神经元的膜电位改变,及蛇床子素(Ost)对其的影响。方法移植尾部髓核于左侧腰5DRG建立炎性神经痛大鼠模型,术后3d分离DRG神经元,通过DiBAC4(3)荧光标记,观察不同pH液刺激下胞内荧光强度(膜电位)的动态变化,检测Ost或酸敏感离子通道抑制剂阿米洛利(Ami)预处理后膜电位的振幅、达峰时间等。结果 pH(6.5、6.2、5.9)酸刺激使髓核致炎大鼠神经元膜电位振幅一过性增加,Ost浓度依赖性的抑制膜电位振幅变化(P<0.05),20g·L-1和50g·L-1Ost强于Ami(P<0.05,P<0.05),复合应用Ami可增强Ost抑制效果(P<0.05)。结论 Ost抑制酸刺激诱发的髓核致炎大鼠DRG神经元去极化,增强炎症环境中神经元的抗酸能力。

hMSC成骨分化相关lncRNA的筛选和初步鉴定

【目的】筛选和初步鉴定人骨髓间充质干细胞(hMSC)成骨分化相关的长链非编码RNA(lncRNA)。【方法】利用Refseq,UCSC knowngenes,Ensembl,H-invDB 7.0,RNAdb 2.0,NRED生物软件分析成骨基因相关的lncRNA,综合获得可能的成骨相关lncRNA;3例骨髓标本来源于行腰椎手术患者,密度梯度法分离扩增hMSC后,分成骨诱导组和对照组,地塞米松、维生素C、β-甘油磷酸钠诱导hMSC成骨分化,通过ALP测定及钙结节茜素红染色进行成骨诱导鉴定;qRT-PCR验证hMSC成骨分化前、后差异表达的lncRNA,以及成骨分化前、后差异表达的基因BMP1、MSX1、Runx2、Smurf-1、ALP。【结果】通过上述生物软件综合分析发现3个成骨基因MSX1、BMP1和Smurf1周围存在相关lncRNA。4个lncRNA(AK129811、AK024937、AK096529、uc003ups)与成骨基因Smurf-1相关;2个lncRNA(AF289591和uc003xbe)与成骨基因BMP1相关;1个lncRNA(AK056311)与成骨基因MSX1相关。ALP检测示:与对照组细胞相比,成骨诱导组细胞1周ALP值最高,达到(16.82±1.64)nmol/min,随着诱导时间的延长,ALP值逐渐降低,3周降至(8.37±1.01)nmol/min。钙结节染色显示hMSC成骨诱导分化2周后胞外开始出现少量钙结节,随着诱导时间延长钙结节数量逐渐增加,成骨诱导至第3周钙结节最多,定量测定钙质量浓度达(716±49)mg/mL。RT-qPCR结果显示绝大部分lncRNA在hMSC成骨分化过程中表达均下调,其中2个与Smurf-1相关lncRNA(AK096529和uc003ups)与成骨诱导前相比,存在显著性下调。1个与MSX1相关的lncRNA(AK056311)与成骨诱导前相比,也存在显著性下调。同时,成骨分化基因Runx2、ALP表达显著性上调,MSX1、Smurf-1表达显著性下调。【结论】结合既往研究结果分析:AK096529和uc003ups可能通过正向调控Smurf1,促使Smurf1下调,减少Runx2的降解,继而促进hMSC的成骨分化。

复合型可注射磷酸钙骨水泥在胫骨平台塌陷骨折中的生物力学研究

目的探讨复合聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA]的可注射磷酸钙骨水泥(calcium phosphate cement,CPC)结合双螺钉固定在胫骨平台SchatzkerⅡ型骨折模型中的生物力学性能,为临床微创治疗提供生物力学依据。方法取10对老年尸体胫骨近端标本制备胫骨平台SchatzkerⅡ型骨折模型后,左右侧随机配对分为2组,分别为复合型可注射CPC组(实验组,n=10)和自体松质骨组(对照组,n=10)。实验组和对照组分别采用CPC加压注入和自体松质骨充填植骨,结合双螺钉横排固定方法固定胫骨平台骨折。两组标本分别在MTS 858材料试验机上进行轴向垂直压缩,记录载荷-位移数据,测量两组标本的最大载荷和抗压刚度。结果复合型可注射CPC室温下具有良好的可注射性,在胫骨平台塌陷下方骨缺损区不仅充填充分,且材料在骨缺损区周围松质骨中进一步渗透、扩散。实验组和对照组胫骨干骺端骨密度分别为(0.639±0.081)、(0.668±0.083)g/cm2,差异无统计学意义(t=1.012,P=0.331)。实验组最大载荷为(4 101±813)N,显著高于对照组的(692±138)N,差异有统计学意义(t=3.932,P=0.001)。实验组抗压刚度为(1 363±362)N/mm,显著高于对照组的(223±54)N/mm,比较差异有统计学意义(t=3.023,P=0.013)。结论在胫骨平台SchatzkerⅡ型骨折中采用复合型可注射CPC加压充填植骨结合双螺钉固定技术能有效恢复胫骨平台的抗塌陷力学性能,是一种理想的植骨填充材料。

大鼠化学去细胞异体神经再血管化的实验研究

目的观察化学去细胞异体神经移植修复大鼠坐骨神经缺损后再血管化的过程。方法成年雄性SD大鼠80只。取16只SD大鼠坐骨结节至胫、腓神经分叉处的坐骨神经干,制备去细胞神经移植物。取64只SD大鼠随机分为实验组及对照组,每组32只。制备大鼠右侧1.0 cm坐骨神经缺损模型后,实验组采用去细胞神经移植物进行桥接修复;对照组采用自体神经原位桥接修复。观察大鼠术后一般情况,并于术后5、7、10、14、21、28 d及2、3个月,取材行大体观察及ALP染色观察。结果两组大鼠切口均Ⅰ期愈合,术后两组大鼠出现右足拖行,足趾不能伸展,术后6周改善。大体观察见两组移植物均与两端神经连接良好,移植物外观与正常神经相似。术后5 d ALP染色观察,实验组移植物内无微血管长入,对照组移植物内可见微血管长入;7 d实验组移植物内可见微血管长入,但两组移植物中部均未见微血管;10 d、14 d及21d分别见少量纵行微血管贯穿两组移植物;28 d,两组移植物内微血管网未见明显差别;2个月和3个月两组移植物内微血管构筑与正常神经相似。结论化学去细胞同种异体神经移植修复周围神经缺损后,新生微血管能及时长入移植物内。

新型可注射磷酸钙骨水泥在椎体后凸成形术中的生物力学评价

目的 评价一种新型可注射磷酸钙骨水泥（CPC）在椎体后凸成形术中的体外生物力学性能,以探讨该材料能否有效替代聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥（PMMA）应用于经皮椎体后凸成形术.方法 取老年尸体共20个胸腰椎新鲜标本（T11～L3）,经双能X线吸收骨密度仪测试骨密度后完全随机分为CPC组和PMMA组.在材料试验机上制成椎体压缩骨折模型并测量两组椎体初始的强度和刚度,然后分别用CPC和PMMA两种材料行椎体后凸成形术,再次测量术后两组椎体的强度和刚度.结果 两种骨水泥都具有良好的可注射性,CPC固化后不放热,PMMA固化有明显放热反应,体外工作时间CPC长于PMMA,X线显影效果CPC优于PMMA.椎体后凸成形术后PMMA组椎体最大载荷（4.80±1.957）kN、抗压强度（4.794±1.683）kPa,均较术前明显增加,差异有统计学意义（P＜0.05）.刚度高于骨折前,但差异无统计学意义（P＞0.05）.CPC组椎体后凸成形术后最大载荷（3.412±1.078）kN、抗压强度（3.477±0.689）kPa,稍高于骨折前,差异无统计学意义（P＞0.05）.而刚度（918±201）N/mm,低于骨折前,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 新型CPC在椎体后凸成形术中能有效恢复椎体的生物力学性能,可望在椎体后凸成形术中作为PMMA的理想替代材料.