3株H9N2亚型重组禽流感病毒生物学特性及免疫原性研究

为评估经反向遗传技术构建的3株H9N2亚型重组禽流感(AIV)病毒A3-PR8株、AH515-PR8株和TM343-PR8株的生物学特性和免疫原性,研究将3株重组毒株在鸡胚上连续传代,3株重组毒株均能在鸡胚中稳定增殖,红细胞凝集价达到9.0 log2。与对应的亲本分离株相比,重组毒株的病毒含量(EID_(50))提升0.5~0.8个滴度。以3株重组毒株为抗原制备油乳剂灭活疫苗,0.2 mL/只接种21日龄SPF鸡,免疫后第7、14、21、28天采血,测定血清中H9亚型AIV的血凝抑制试验(HI)抗体效价,结果显示,免疫后28 d三种疫苗免疫鸡几何平均HI效价都可达8.0 log_(2),AH515-PR8株免疫组抗体效价最高达8.8 log_(2)。免疫后28 d分别以10^(6.0) EID_(50)的剂量进行H9N2 AIV WJ57株的攻毒保护试验,在攻毒后,AH515-PR8和TM343-PR8组免疫鸡均不发病、不死亡,排毒量有明显下降,其中AH515-PR8株免疫组排毒量最低,5 d病毒分离率为0。研究表明,经反向遗传技术构建的AH515-PR8株相较于TM343-PR8株和A3-PR8株,更具有生长繁殖能力和强免疫原性的特点,为H9N2亚型禽流感疫苗的应用和开发提供了参考。

猪肺炎支原体套式PCR检测方法的建立及应用

为建立一种用于检测猪肺炎支原体(Mhp)的套式PCR方法,本研究从GenBank中下载Mhp P36基因序列,选取其保守区域基因片段,设计套式PCR的内外套2对特异性引物,经过反应条件优化,建立了Mhp套式PCR检测方法。用该方法对Mhp 168株、鸡毒支原体、猪鼻支原体、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒进行特异性检测。结果显示,除了Mhp 168株能扩增出外套793 bp和内套448 bp的目的条带,其余病原均未扩增出相应的片段,特异性较强;该方法对Mhp的最低检测限为10拷贝/μL,敏感性是常规PCR方法的100倍。对50份含Mhp的培养基经本研究建立的套式PCR、常规PCR、Mhp分离培养方法的阳性检出率分别为88%、82%、88%,套式PCR方法与常规PCR的总体符合率为94%,与Mhp分离培养方法的符合率为100%。本实验建立的套式PCR方法,为Mhp的流行病学调查提供了检测手段。