胰岛素信号通路在高游离脂肪酸所致的β细胞功能紊乱中的作用及机制

目的:观察血浆游离脂肪酸(FFA)水平升高对β细胞胰岛素分泌功能的影响,探讨β细胞胰岛素信号通路在其中所起的作用及其机制。方法:将8周龄雄性SD大鼠随机分为脂肪乳输注组(FFA组,13只)和生理盐水输注组(NS组,12只)。分别输注48h,检测以下指标:(1)采血检测胰岛素,FFA水平;(2)正常血糖高胰岛素钳夹实验,评价外周组织胰岛素抵抗程度;(3)静脉葡萄糖耐量实验,评价活体胰岛β细胞分泌功能;(4)胰岛细胞表面灌注实验,评价离体胰岛β细胞动态分泌功能;(5)采用实时荧光定量PCR方法检测肌肉中胰岛素受体底物-1(IRS-1)、胰岛素受体底物-2(IRS-2)mRNA表达的变化;(6)用实时荧光定量PCR方法检测胰岛细胞IRS-1,IRS-2和葡萄糖转运子-2(Glut-2)mRNA表达的变化。结果:(1)FFA组血中胰岛素水平比NS组增高[(24.44±1.25)mIU/Lvs(18.09±1.37)mIU/L,P<0.05],FFA水平也显著高于NS组[(1.39±0.18)mmol/Lvs(0.64±0.10)mmol/L,P<0.001];(2)FFA刺激后,离体和活体的胰岛β细胞分泌功能均增强;(3)FFA组葡萄糖输注率(GIR)较NS组明显降低(P<0.05),提示存在明显的外周胰岛素抵抗;(4)FFA组肌肉IRS-1mRNA表达比NS组降低87.7%,IRS-2表达降低50.7%(P<0.05);(5)FFA组胰岛细胞IRS-1mRNA表达增加29.3%(P<0.05),IRS-2及Glut-2分别增加345.1%和536.4%(P<0.01)。结论:血浆FFA水平短期升高,造成外周胰岛素抵抗的同时,对β细胞胰岛素分泌有刺激作用,此时胰岛细胞胰岛素信号通路分子基因表达增加。

ELISA法检测梅毒患者血清中抗心磷脂抗体

目的 : 探讨ELISA法测定抗心磷脂抗体 (ACA)在梅毒检测中的应用价值。方法 : 用ELISA法检测 6 7例梅毒患者血清中ACA水平 ,并对 2 2例ACA阳性的自身免疫性疾病患者血清进行RPR、TPPA检测。结果 : 39例RPR阳性的梅毒血清中 ,ELISA检测ACA阳性 2 3例 ,若以RPR为金标准 ,ELISA法检测梅毒的敏感性只有 5 8.97%(2 3 39) ;2 8例RPR阴性 (TPPA阳性 )的梅毒血清中 ,ELISA检测ACA阳性 1例。ACA的阳性率与RPR滴度呈正相关 (r=0 .995 ,P <0 .0 0 1)。 2 2例ACA阳性的对照血清 ,TPPA检测均阴性 ,RPR阳性 1例。结论 : 本研究提示ELISA法检测梅毒患者血清中ACA时 ,敏感性和特异性均不如RPR法。

N-乙酰半胱氨酸改善高游离脂肪酸所致大鼠外周胰岛素抵抗

目的探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对高游离脂肪酸(FFA)导致的外周胰岛素抵抗的影响及机制。方法SD大鼠随机分为对照组(NS组,12只)、脂肪乳输注组(FFA组,13只)和脂肪乳+NAC组(NAC组,12只)。输注48 h,(1)测血浆硝基酪氨酸,丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平;(2)高胰岛素正糖钳夹试验,评价外周胰岛素抵抗程度;(3)实时荧光定量PCR方法测定肌肉组织胰岛素受体底物-1(IRS-1)、胰岛素受体底物-2(IRS-2)mRNA表达。结果(1)FFA组硝基酪氨酸,MDA高于NS组,GSH低于NS组,NAC分别改善28.6%,33.1%,22.9%(P<0.05);(2)FFA组葡萄糖输注率(GIR)比NS组降低(P<0.05),用NAC后GIR升高36.6%(P<0.05);(3)FFA组肌肉组织IRS-1、IRS-2 mRNA表达比NS组降低87.7%、50.7%(P<0.05);NAC组肌肉组织IRS-1、IRS-2表达比FFA组增加370.1%、46.2%,(P<0.05)。结论NAC干预能改善高FFA所致的外周胰岛素信号传导障碍,逆转外周胰岛素抵抗,可能与NAC纠正机体氧化及抗氧化失衡有关。

大剂量抗氧化剂对高脂饲养大鼠胰岛β细胞分泌功能的影响及机制

目的:探讨大剂量抗氧化剂-N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-l-cysteine,NAC)对高脂饲养大鼠胰岛β细胞分泌功能的影响及可能机制。方法:将59只8周龄SD大鼠随机分为正常饲料组(NC组)、高脂饲料组(HF组)和高脂+NAC组(NAC组)。饲养20周,(1)测血浆及胰腺组织丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平;(2)正常血糖高胰岛素钳夹实验,评价外周组织胰岛素抵抗程度;(3)胰岛细胞表面灌注实验,评价离体胰岛β细胞动态分泌功能;(4)实时荧光定量PCR方法比较各组大鼠胰岛素受体底物-1(IRS-1)、胰岛素受体底物-2(IRS-2)和葡萄糖转运子-2(Glut-2)mRNA表达的变化。结果:(1)HF组血浆及胰腺MDA水平明显高于NC组,GSH水平低于NC组,NAC可以改善以上变化;(2)HF组葡萄糖输注率(GIR)比NC组降低(P<0.01),用NAC后GIR明显改善(P<0.01);HF组葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)功能下降,用NAC后可逆转上述变化;(3)HF组胰岛细胞IRS-1、IRS-2、Glut-2mRNA表达降低42.3%、28.1%、22.9%(P均<0.05);NAC组胰岛细胞IRS-1、IRS-2、Glut-2 mRNA表达与HF组相比增加40.2%、30.2%,19.1%(P均<0.05)。结论:大剂量抗氧化干预治疗能改善胰岛细胞胰岛素信号传导,逆转高脂饲养导致的大鼠胰岛细胞分泌功能紊乱,其机制可能与NAC纠正机体氧化及抗氧化失衡有关。

高脂饲养及罗格列酮干预对α细胞功能的影响

目的观察高脂饲养对SD大鼠α细胞形态和功能的影响及罗格列酮干预的作用。方法8周龄雄性SD大鼠36只随机分为3组:正常饲养组(CC,n=12)、高脂饲养组(CF,n=12)、高脂饲养+罗格列酮组(Ro,n=12,罗格列酮3mg·kg-1·d-1)。饲养28周时进行静脉糖耐量试验,于给糖后0、3、5、10min各留取动脉血待测胰岛素(Ins)及胰升糖素(Gg)水平,并同时测定即时血糖。采用组织对3H-2-脱氧葡萄糖(3H-2-DG)的吸收率评估胰岛素敏感性。免疫组织化学染色检测胰腺α细胞和β细胞的变化。结果CF组Gg在0、3、5、10min时水平[(119·3±12·4、82·3±6·4、72·2±5·8、68·2±9·1)ng/L]高于CC组[(96·8±9·1、67·6±5·9、57·9±5·3、55·3±6·9)ng/L,P<0·05];Ro组[(78·4±6·0、59·4±4·0、49·9±6·2、40·9±6·0)ng/L]显著低于CF组和CC组,P<0·01。各组Ins水平无统计学差异。α细胞积分下吸光度值,CF组及Ro组均高于CC组(1661±130及1532±132比1188±104,P<0·01及P<0·05);β细胞积分下吸光度值各组未见统计学差异。CF组的肌肉、肝脏和脂肪组织3H-2-DG吸收率明显低于CC组及Ro组(P值均<0·05)。结论高脂饲养SD大鼠引起胰岛素抵抗,同时伴有α细胞增生和Gg异常高分泌。罗格列酮可部分逆转这种变化。

解偶联蛋白2基因表达与胰岛β细胞分泌功能的关系及机制

目的观察长期高脂饮食对大鼠胰岛β细胞胰岛素分泌功能的影响，探讨解偶联蛋白2（UCP2）及相关的氧化应激在其中的作用及机制。方法8周龄SD大鼠随机分为正常饲料组（NC组，20只）和高脂饲料组（HF组，20只）。饲养20周检测以下指标：（1）血浆硝基酪氨酸，丙二醛（MDA）和还原型谷胱甘肽（GSH）水平；（2）正常血糖高胰岛素钳夹试验，评价外周组织胰岛素抵抗程度；（3）胰岛细胞表面灌注试验，评价离体胰岛β细胞动态分泌功能；（4）实时荧光定量PCR方法比较两组大鼠胰岛细胞胰岛素受体底物-1（IRS-1）、胰岛素受体底物-2（IRS-2）以及UCP2mRNA表达的变化。（5）免疫组织化学染色及图像分析检测IRS-1，IRS-2在两组大鼠胰岛中的表达。结果（1）HF组血浆硝基酪氨酸（0．17±0．01）μmol／L和MDA（22±5）nmol／L水平高于NC组（0．14±0．02）μmol／L，（13±3）nmol／L，（P均〈0．05），GSH水平（103±9）mg／ml明显低于NC组（142±9）mg／l，（P〈0．01）；（2）HF组葡萄糖输注率（GIR）较NC组明显降低（P〈0．01）；HF组葡萄糖刺激的胰岛素分泌（GSIS）功能明显下降（P〈0．01）；（3）HF组胰岛细胞IRS-1及IRS-2mRNA表达分别降低42．3％、28．1％，UCP2表达增高32．5％（P均〈0．05）。（4）HF组胰岛IRS-1和IRS-2的表达较对照组分别降低26．3％（P〈0．05）和11．2％（P〉0．05）。（5）UCP2与胰岛细胞IRS-1mRNA表达呈负相关（r=-0．621，P〈0．05）；且与IRS-2mRNA表达也呈负相关（r=-0．416，P〈0．05）。结论长期高脂饲养能导致大鼠胰岛细胞胰岛素信号分子表达下降，β细胞胰岛素分泌功能受损，具体机制推测与UCP2相关的氧化应激增强有关。