人羊膜组织细胞神经生物学特性形态学研究

目的利用神经干细胞特异性标志蛋白,鉴定人羊膜组织中神经细胞的存在,从组织和细胞形态学角度探讨羊膜组织细胞的神经生物学特性。方法利用TH、AchT、NeuN、MAP2、CNPase、MBP和GFAP单克隆抗体,通过免疫组织化学、免疫细胞化学和免疫荧光细胞化学技术方法,检测羊膜组织细胞中的多巴胺能神经元、胆碱能神经元、神经元、少突胶质细胞和胶质细胞。结果羊膜组织细胞中存在TH、AchT、NeuN、MAP2、CNPase、MBP和GFAP等神经细胞特异性标记蛋白表达阳性细胞。结论实验结果提示羊膜组织细胞内可能存在多巴胺能神经元、胆碱能神经元少突胶质细胞和星形胶质细胞等。这对细胞移植治疗帕金森氏病、老年痴呆和多发性硬化等神经系统疑难疾病将具有一定的临床意义。

MTT、MTS、WST-1在细胞增殖检测中最佳实验条件的研究

目的:探讨MTT、MTS、WST-1三种四唑盐在细胞增殖检测中的最佳实验条件。方法:取对数生长期的小鼠黑色素瘤B16细胞,用10%胎牛血清DMEM培养液制成不同浓度的细胞悬液加入96孔培养板中培养24h,分别加入三种试剂后在450nm、492nm和630nm波长处测定OD值,根据不同波长所测OD值的大小确定三种试剂的最佳实验波长。根据细胞浓度与OD值关系曲线确定三种试剂各自的最适细胞浓度。取最适浓度的B16细胞分别加入三种试剂在0.5h、1h、2h和4h四个不同时间点测定吸收值,根据OD值确定最佳的检测时间。结果:MTT、MTS法的最佳波长为492nm,WST-1法为450nm。MTT的最适细胞接种浓度为1.6×103—2.56×104/mL,MTS的最适细胞接种浓度为5×10—6.4×103/mL,WST-1的最适细胞接种浓度为2.5×10—1.6×103/mL。三种方法的最佳测定时间均为4h。结论:MTT、MTS、WST-1分别适用于不同条件下检测细胞的存活与增殖,可为抗病毒及抗癌药物的筛选提供实验依据。

Fas/FasL途径介导的人肺癌细胞免疫逃逸

目的:观察在3种人肺癌细胞(A549、EBC-1、LCSC)和人T细胞(Jurkat)Fas/FasL表达情况,探讨人肺癌细胞免疫逃逸及反杀伤作用与Fas/FasL途径的关系。方法:用FACScan、RT-PCR方法检测Fas/FasL蛋白及mRNA表达;以荧光染色法观察细胞调亡;用台盼蓝拒染法检测细胞存活。结果:3种人肺癌细胞及T-细胞系(Jurkat)均表达Fas及FasL;肺癌细胞与Jurkat细胞共培养时,肺癌细胞可导致Jurkat细胞生长抑制(P<0.05)及凋亡;在共培养体系中加入FasL中和性抗体NOK1,可封闭肺癌细胞对Jurkat细胞的生长抑制作用(P>0.05)。结论:Fas/FasL途径可介导上述3种人肺癌细胞对Jurkat细胞的生长抑制及致凋亡作用;中和性抗体可有效阻断Fas信号转导途径,抑制肿瘤细胞的反杀伤作用,有效保护免疫系统。