Hp感染与胃癌及癌前病变中p53、bcl-2、c-myc基因表达关系的研究

目的:研究幽门螺杆菌(Hp)感染的胃癌及癌前病变患者胃粘膜p53、bcl-2、c-myc基因的表达,以探讨Hp在胃癌发生、发展过程中的作用机制。方法:应用免疫组化方法测定60例胃癌组织、18例异型增生、29例肠上皮化生、35例萎缩性胃炎、29例浅表性胃炎组织中bcl-2、c-myc基因蛋白表达情况,PCR/SSCP测定p53基因第5～8外显子突变,Hp阳性由快速尿素酶法和HE染色确定。结果:胃癌组Hp阳性41例,阴性19例。在胃癌组织中p53、bcl-2、c-myc基因阳性表达分别为38例(63.3%)、38例(63.3%)、18例(30.0%)。p53、c-myc基因在胃癌中阳性表达率显著高于异型增生(P<0.05)。bcl-2在异型增生组织中的阳性表达率与胃癌、肠上皮化生相比无显著性差异(P>0.05)。p53、bcl-2、c-myc基因表达与胃癌分期、淋巴结转移均无显著性关系(P>0.05),但bcl-2与胃癌类型、分化程度显著相关(P<0.05)。每一种病变类型Hp阳性组p53、bcl-2、c-myc基因蛋白的阳性表达率均高于Hp阴性组,两者之间有显著性差异(P<0.05)。结论:Hp感染者具有更多肿瘤生物学行为,可以引起抑癌基因p53第5～8外显子突变,癌基因c-myc、凋亡调节基因bcl-2表达增加,Hp可能为促癌剂,在胃癌的发生发展中起一定作用。

幽门螺杆菌感染与胃癌及癌前病变中PCNA和Bcl-2表达关系的研究

目的 :研究幽门螺杆菌 ( Helicobacter pylori,H.pylori)感染对胃癌及癌前病变患者增殖细胞核抗原 ( PCNA)和关键性凋亡调节基因 Bcl- 2蛋白表达的影响 ,探讨 H .pylori可能的致癌机制。方法 :应用免疫组化方法测定 2 0例胃癌组织、1 8例重度异型增生、1 2例肠上皮化生、2 4例萎缩性胃炎、1 6例浅表性胃炎组织中 Bcl- 2、PCNA蛋白表达情况 ,快速尿素酶法和 HE染色检测H.pylori感染情况。结果 :胃癌组 H.pylori感染 1 2例 ,与慢性浅表性胃炎相比差异有显著性 ( P<0 .0 5 )。从浅表性胃炎到胃癌 PCNA指数呈递增趋势 ,各组间差异均有显著性 ( P<0 .0 5 )。浅表性胃炎和萎缩性胃炎组中 H.pylori阳性组与 H.pylori阴性组的 PCNA LI差异有显著性( P<0 .0 5 ) ,其余各组间 H.pylori阳性和 H.pylori阴性病例间的 PCNA LI差异无显著性。Bcl- 2蛋白在异型增生组中的阳性表达率与胃癌、肠上皮化生相比差异无显著性 ,与慢性胃炎相比差异有显著性。 H .pylori阳性组肠上皮化生、异型增生组织中 Bcl- 2阳性表达率显著高于 H .pylori阴性组 ,它们之间差异有显著性 ( P<0 .0 5 )。结论 :H .pylori感染可促使 PCNA、Bcl- 2蛋白表达增加 ,H.

肿瘤细胞向血管外游走过程中内皮细胞调控机制的研究

目的 :阐明肿瘤细胞向血管外游走过程中内皮细胞肌球蛋白轻链激酶 (MLCK)及Rho Rho激酶的调控作用。方法 :利用肿瘤细胞向血管外游走的体外模型 ,观察肿瘤细胞的血管外游走状况 ,并测定肿瘤细胞游走过程中血管内皮单细胞层的电阻变化 ;通过Westernblot评价肿瘤游走过程中内皮细胞肌球蛋白轻链 (MLC)的磷酸化水平。结果 :肿瘤细胞可以穿过血管内皮细胞游走至血管外 ;并且肿瘤细胞向血管外游走过程中跨血管内皮细胞层的电阻下降、内皮细胞MLC的磷酸化水平升高 ;而内皮细胞肌球蛋白轻链激酶抑制剂 (ML 7)及Rho抑制剂 (C3转移酶 )、Rho激酶抑制剂 (Y 2 76 32 )能够抑制上述变化。结论 :内皮细胞MLCK及Rho Rho激酶可以通过控制MLC的磷酸化水平来引起内皮细胞骨架蛋白的改变 。

体视学定量分析技术在病理学应用研究中的优化设计

体视学定量分析技术在病理学领域研究中的应用具有相对特殊性。如何针对不同组织、细胞、亚微结构及分子水平的病变特点,科学地设计定量分析的采样方法、代表性样品大小、测试方法及测试参数等多个环节,不仅对于提高体视学定量分析的客观性、重复性及科学性具有重要作用,而且对于揭示病变的特点,创新病理学科理论具有重要意义。我们结合近年来从事病理学体视学定量分析研究工作的实际,讨论如何优化设计体视学定量分析技术在病理学研究领域中的应用问题。

氟中毒肾损伤的图像分析研究

目的:观察氟中毒大鼠肾组织损伤的形态定量病理变化特点,探讨过量氟对肾脏的毒性作用。方法:用富钙平衡饲料与低钙偏食饲料分别饲养大鼠,经饮水投氟每升分别含110.5mg、221.0mg、331.5mg氟化钠的高氟水造成水型氟中毒。应用HPIAS—1000电子计算机彩色图像分析系统测试氟中毒大鼠肾组织的鲍曼氏囊腔面积、肾小球周长、血管球周长、肾小管上皮细胞面积、肾小管管腔面积、肾小管管腔面积/肾小管面积之比等。结果:常规食中剂量氟组和高剂量氟组的肾小球球囊面积明显高于常规食对照组(P<0.05),偏食低钙加氟各组肾小球球囊面积也明显高于偏食低钙对照组(P<0.05)。偏食低钙高剂量加氟组肾小管面积较偏食低钙对照组变小(P<0.05),偏食低钙加氟各组较偏食低钙对照组肾小管管腔面积与肾小管上皮细胞比值明显变小(P<0.01)。结论:氟中毒情况下可使肾小球球囊腔增大及其肾小管管腔明显变化,这种损伤性变化可能对肾脏排氟功能有不同程度的影响。

结缔组织核心蛋白聚糖基因在结肠癌组织中转录水平表达的研究

目的:观察Decorin mRNA在结肠癌组织中的表达,探讨Decorin表达与结肠癌的关系。方法:临床手术切除新鲜结肠癌组织石蜡切片,应用原为杂交技术检测Decorin基因转录水平的表达。结果:结肠癌组织中与相对正常结肠组织中均可见Decorin mRNA表达,但两者之间的表达未见统计学差异(P>0.05)。结论:探索Decorin转录水平表达与结肠癌发生发展的关系,只应建立在大样本观察基础上进一步作深入的研究。

定量分子病理学技术在糖尿病研究中的应用

目的结合近年来分子病理学技术的发展,探讨定量分子病理学技术在糖尿病研究中的应用。方法联合应用RT-PCR、ISH、IHC、FCM及图像分析技术进行糖尿病分子发病机理的研究。结果分别证实了联合微量营养素上调胰岛β细胞胰岛素转录与翻译水平的表达并保护胰岛正常结构,拮抗糖尿病的发生发展。结论不断改进与发展定量分子病理学技术,有利于提高糖尿病分子发病机理的研究水平。

中国东北汉族人群解偶联蛋白3基因-55C/T多态性与2型糖尿病相关性研究

目的探讨解偶联蛋白3(uncoupling protein 3,UCP3)基因-55C→T变异与中国东北地区2型糖尿病的关系。方法用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性检测100例2型糖尿病患者(男/女为58/42)及113名糖耐量正常者(男/女为56/57)UCP3基因-55C→T变异的基因型。结果 2型糖尿病组与正常对照组三种基因型频率及等位基因频率分布差异均有显著性意义,P值分别为0.027和0.003,两组间携带T的基因型(CT+TT)频率差异有显著意义(P=0.008);T等位基因与2型糖尿病患者血清总胆固醇(CHOL)及低密度脂蛋白(LDLC)频率升高相关(P为0.021,0.024)。结论 UCP3基因-55C→T变异与中国东北汉族人群2型糖尿病患者局部体脂代谢存在相关性,该基因变异与2型糖尿病发病相关。

山茱萸多糖提取纯化方法及药理作用研究进展

山茱萸又叫石枣、药枣,为山茱萸科植物山茱萸(Cornus officinalis Sieb.et Zucc)干燥成熟果肉,具有补益肝肾、涩精固脱的功效。本文着重就山茱萸多糖的提取纯化方法及山茱萸多糖的药理作用作一综述。1山茱萸多糖的提取纯化方法及最佳的提取工艺1.1传统提取纯化方法主要采取热水、超声和乙醇沉淀等。李平等〔1〕将热水抽提后的山茱萸残渣用碱提取后,经过中和、

肾缺血再灌注细胞内钙水平与氧化应激损伤研究

目的 观察肾细胞中游离钙([Ca^(2+)]i)及氧自由基在缺血再灌注损伤过程中的改变情况,探讨二者在再灌注肾损伤中发生作用机制。方法 摘除Wistar大鼠左肾,钳夹右侧肾蒂,建立急性缺血再灌注肾损伤模型,应用Fura-2/AM荧光指示剂测定缺血再灌注大鼠肾细胞内[Ca^(2+)]i浓度的变化,同时测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果 缺血再灌注不同时期肾细胞内[Ca^(2+)]i浓度均有不同程度增高,与对照组相比差异有显著意义,各实验组SOD活力水平降低,与对照组相比差异有显著意义,MDA生成高于对照组,GSH-Px在再灌注早期活力减弱,明显低于对照组,晚期活力基本恢复。结论 1.缺血再灌注不同时期大鼠肾细胞内[Ca^(2+)]i超载和不同程度的氧化侵袭,在缺血再灌注肾损伤病理过程中起重要作用;2.再灌注时间与肾细胞内[Ca^(2+)]i超载呈正相关,提示再灌注损伤通过不同机制加重细胞钙超载。

过量摄氟后大鼠肾细胞内钙水平与氧化应激损伤研究

目的研究过量氟对大鼠肾细胞中游离钙( [Ca2+] i )水平的影响与氧化应激的关系。方法应用饮水加入氟化钠进行大鼠染毒实验,采用Fura鄄2/AM荧光指示剂测定慢性氟中毒大鼠肾细胞内[Ca2+] i浓度的变化,同时测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH鄄Px)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性和脂质过氧化终产物丙二醛(MDA)生成。结果过量氟可刺激肾细胞内[Ca2+] i浓度增高,高钙加氟组与高钙对照组相比差异有显著意义(P< 0.05),低钙加氟组高于低钙对照组(P< 0.001);SOD活力水平低钙加氟组低于低钙对照组,差异有显著意义(P< 0.05),MDA生成低钙加氟组高于低钙对照组(P< 0.05);GSH鄄Px活力变化不明显。结论(1)过量氟所致的大鼠细胞内[Ca2+] i超载和不同程度的氧化侵袭,可能在氟骨症病理过程中起重要作用;(2)投氟伴随低钙可加重细胞内[Ca2+] i超载和氧化侵袭,提示钙营养与氟中毒发病有着重要联系。

环巴胺诱导大肠癌Caco-2细胞凋亡效应和线粒体蛋白质组学研究

目的:探讨环巴胺对大肠癌Caco-2细胞的促凋亡效应,在线粒体蛋白水平阐明其作用机制。方法:取对数生长期大肠癌Caco-2细胞分为环巴胺处理组及阴性对照组,以5、10、20和40μmol.L-1环巴胺处理Caco-2细胞,分别应用MTS法及流式细胞术测定Caco-2细胞生长抑制率及凋亡率,采用nano LC-ESI-MS方法检测环巴胺处理组与阴性对照组细胞线粒体蛋白质组学差异。结果:环巴胺处理组Caco-2细胞分别经10、20和40μmol.L-1环巴胺作用24、48和72 h后,生长抑制率(分别为23.1%±1.8%,46.2±0.9%,53.4±2.3%;45.1%±2.8%,73.0%±2.5%,81.2%±1.6%;59.7±2.3%,87.5±1.4%,91±1.06%)明显高于阴性对照组(1.8%±0.2%,2.5%±0.1%,3.7%±0.3%)(P<0.01);经5、10、20和40μmol.L-1环巴胺作用于Caco-2细胞48 h后,细胞凋亡率分别为24.1%±1.3%、31.7%±1.6%、50.5%±2.3%和64.0%±1.9%,明显高于阴性对照组(14.4%±0.7%)(P<0.01)。蛋白质组学差异分析,环巴胺作用后,Caco-2细胞线粒体共有32种蛋白表达下调,25种蛋白表达上升,这些蛋白功能主要涉及细胞凋亡、细胞骨架、核酸、核糖体及蛋白质代谢等,其中与凋亡关系密切的蛋白包括ATF6、Clusterin、OPA1、RGD1565411和Cofilin。结论:环巴胺通过阻断Hedgehog(HH)通路,抑制大肠癌Caco-2细胞增殖,其机制与促进细胞凋亡有关;环巴胺可明显改变Caco-2细胞线粒体蛋白表达,其差异与凋亡关系密切。

5-Fu对人结肠癌细胞凋亡过程中DNA损伤修复基因表达的影响

目的探讨5-Fu对人结肠癌细胞(HCT/8)凋亡过程中DNA损伤修复相关基因表达的影响。方法通过形态学、基因组电泳、吖啶橙染色及流式细胞仪,观察大肠癌细胞凋亡情况,同时应用基因芯片分析5-Fu作用后DNA损伤修复相关基因表达的变化。结果经流式细胞仪检测发现,5-Fu作用于HCT/8细胞48h与对照组相比,凋亡细胞数明显增加,基因组电泳出现典型的梯形条带,基因芯片分析显示,12个与DNA损伤修复相关的基因中,上调基因3个,下调基因9个。结论5-Fu作用于结肠癌细胞,导致多种DNA损伤修复基因发生改变,综合作用使细胞不能及时对损伤DNA进行修复,最终导致细胞发生凋亡。

抗氧化微量营养素对IDDM小鼠抗氧化损伤的实验研究

目的:研究复合抗氧化微量营养素(antioxidative micronutrients,AM)拮抗IDDM小鼠氧化侵袭损害的作用机制。方法:用一次大剂量注射2%四氧嘧啶(alloxan)的方法制备IDDM小鼠模型,联合给予硒(Se)、维生素E(VE)、钒(V)、铬(Cr),测定脾活性氧(ROS)水平以及心、脑、肾中MDA含量和GSH-Px、SOD、GSH-ST活性。结果:IDDM小鼠脾ROS水平以及心、脑MDA含量明显增高(P<0.01),而肾中SOD活性明显降低(P<0.01);联合应用AM可降低IDDM小鼠脾ROS水平及心、脑MDA含量,并提高心GSH-Px、肾SOD及心、肾GSH-ST活性。结论:联合应用AM可在一定程度上拮抗IDDM时的氧化侵袭损害,对防治糖尿病微血管病变以及并发症有重要意义。

乳腺癌患者手术前后T淋巴细胞亚群变化的实验研究

肿瘤免疫学在近年来的肿瘤研究中起到主导地位，淋巴细胞作为机体免疫调节的重要组成成分，与肿瘤的发生发展具有密切关系。淋巴细胞亚群分析是当今机体免疫功能分析的重要手段。

p53和k-ras基因突变在大肠癌发病中的作用

目的 :探讨 p5 3和 k- ras基因突变在大肠癌中的临床意义。方法 :采用 PCR- SSCP方法检测 64例大肠癌患者癌组织及癌旁正常粘膜组织的 p5 3和 k- ras基因。结果 :64例大肠癌患者中发生 p5 3基因突变 2 8例 ( 4 3.8% ) ,发生 k- ras基因突变 2 6例 ( 4 0 .6% ) ,出现 p5 3和 kras基因协同突变 1 1例 ( 1 7.2 % )。p5 3和 k- ras基因突变与病人性别、肿块部位、大小、浸润深度及 Dukes分期无关 ;k- ras基因突变组年龄略高于非突变组 ;p5 3或 k- ras基因单一突变组易出现淋巴结转移 ,但无统计学意义 ;p5 3和 k- ras基因协同突变组淋巴结转移率 ( 1 0 /1 1、90 .9% )明显高于两者均无突变组( 7/2 1、33.3% ,P<0 .0 5 )。结论 :p5 3和 k- ras基因协同突变可能直接或间接促进了大肠癌的进一步发展。

内皮细胞Rho及Rho激酶在肉瘤细胞向血管外游走过程中的作用

目的 :探讨肉瘤细胞向血管外游走过程中内皮细胞Rho及Rho激酶的作用。方法 :利用肉瘤细胞向血管外游走的体外模型 ,观察肉瘤细胞的血管外游走状况 ;并测定肉瘤细胞向血管外游走过程中血管内皮单细胞层的电阻变化。结果 :肉瘤细胞可以穿过血管内皮细胞游走至血管外 ;肉瘤细胞向血管外的游走能够引起单层血管内皮细胞的电阻下降 ;而内皮细胞Rho抑制剂 (C3转移酶 )及Rho激酶抑制剂 (Y - 2 76 32 )能够抑制肉瘤细胞向血管外的游走、并抑制游走过程中引起的血管内皮单细胞层电阻下降。结论 :内皮细胞Rho及Rho激酶可以通过诱导血管内皮细胞骨架蛋白的改变 ,来影响肉瘤细胞穿过内皮细胞间缝隙向血管外游走。

家蚕素Ⅱ基因在293FT细胞中的表达

目的探讨家蚕素Ⅱ(BombyxinⅡ)基因在293FT细胞中的表达。方法应用脂质体将携带具有6个组氨酸标签的家蚕素Ⅱ基因的真核表达载体与携带β半乳糖苷酶基因的真核表达载体共同导入293FT细胞。采用β半乳糖苷酶细胞原位染色检测β半乳糖苷酶基因在细胞内的表达,从而判断基因的细胞转染效率;应用逆转录PCR方法检测家蚕素Ⅱ基因在细胞内mRNA水平的表达;应用免疫组织化学方法检测6个组氨酸标签蛋白在细胞内的表达,从而间接判断家蚕素Ⅱ基因在蛋白水平表达情况。结果β半乳糖苷酶原位染色显示基因转染组可见到染成蓝色的细胞,正常未转染组未见到蓝色细胞;逆转录PCR结果显示只有转染携带家蚕素Ⅱ基因的真核表达载体的293FT细胞中可检测到家蚕素Ⅱ基因表达;免疫组化结果显示只有转染携带家蚕素Ⅱ基因的真核表达载体的293FT细胞中可见到染成棕黄色的细胞颗粒。结论通过基因转染技术,成功使家蚕素Ⅱ基因在293FT细胞得以表达,为进一步研究其降血糖生物活性奠定实验基础。

陈皮中橙皮苷提取溶剂优化选择

目的研究提取陈皮中橙皮苷的最佳溶剂。方法选择纯水提取法、碱水提取法和乙醇提取法从陈皮中提取橙皮苷,应用高效液相色谱法分别检测回收率。结果收率依次为1.482%、1.666%和2.586%。结论提取陈皮中橙皮苷的最佳溶剂是乙醇。

CD133基因启动子调控增强型绿色荧光蛋白基因在喉癌Hep-2细胞中的表达

目的:构建人CD133基因启动子启动加强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因表达载体,观察在喉癌Hep-2细胞系中人CD133基因启动子启动eGFP基因表达能力,为应用CD133基因启动子调控靶向肿瘤干细胞(CSCs)基因治疗奠定实验基础。方法:采用PCR方法从人外周血基因组中克隆人CD133基因启动子,通过基因重组技术将人CD133基因启动子克隆入慢病毒基因转移载体pWPXLd-eGFP中,构建人CD133基因启动子启动eGFP基因表达载体,PCR以及酶切鉴定构建载体的正确性。应用脂质体介导该载体转染入Hep-2细胞中,细胞分为空白对照组(未转染质粒)、阳性对照组(转染pWPXLd)和实验组(转染pWPXLd-eGFP-CD133)。应用荧光显微镜观察各组eGFP基因在喉癌Hep-2细胞内的表达。结果:PCR法获得了约1 810bp大小的CD133基因启动子片段;酶切与PCR鉴定,成功构建了人CD133基因启动子启动eGFP基因表达载体。荧光显微镜下,阳性对照组和实验组转染的Hep-2细胞株有eGFP的表达,而空白组对照组的Hep-2细胞内无eGFP的表达。结论:构建的人CD133基因启动子启动eGFP基因表达载体可以调控eGFP基因在喉癌Hep-2细胞内的表达。