木瓜蛋白酶辅助提取大蒜水溶性粗多糖的工艺

采用木瓜蛋白酶辅助水提醇沉法,以从大蒜中提取多糖。在单因素试验结果与分析的基础上,设计了正交试验来确定酶法提取大蒜多糖的最佳工艺条件,考察了酶量、提取时间、温度、和pH 4种因素对大蒜多糖提取效果的影响。在此基础上得到了木瓜蛋白酶提取大蒜多糖的最佳工艺条件如下:酶量2%,时间1.5 h,温度55℃,pH 6,此条件下大蒜多糖的最优得率是5.51%。

磷酸三酯酶突变体H23A的真核表达及性质表征

通过同源序列比对和晶体结构分析,嗜热菌Geobacillus kaustophilusHTA426磷酸三酯酶的H23位点高度保守,并且位于金属离子结合位点附近。结合Rosseta design程序设计,本实验将突变体H23A在毕赤酵母GS115中高效表达。通过组氨酸标签镍柱分离纯化、非变性蛋白电泳和Western blotting鉴定表达产物,证明该突变体酶主要是以介于单体和二聚体之间的寡聚形式存在。初步酶学性质研究表明,突变体酶是别构酶,V max为92.45U/mg,Hill系数h为1.98;最适温度为70℃,最适pH值为10.0;70℃的热稳定性良好,半衰期为5.1h,而且大多数二价金属离子对突变体H23A都有激活作用。