转谷氨酰胺酶的分子生物学与基因工程

来源于微生物特别是轮枝链霉菌的转谷氨酰胺酶是一种重要的酶制剂,在食品工业中有着广泛的应用前景。本文综述了近年来对转谷氨酰胺酶的分子生物学研究成果,以及对其进行基因工程改造的最新进展,讨论了其进一步的研究发展方向。笔者认为采用基因工程生产重组转谷氨酰胺酶是解决目前酶价高昂和来源困难问题的一个大有希望的办法。

抗人B-淋巴细胞刺激因子噬菌体单链抗体库的构建

目的构建抗人B-淋巴细胞刺激因子噬菌体单链抗体库。方法从B-淋巴细胞刺激因子免疫小鼠的脾细胞中抽提总RNA,经逆转录聚合酶反应合成cDNA,分别扩增小鼠重链可变区基因和轻链可变区基因。通过重叠延伸拼接法将重链可变区基因和轻链可变区基因组装成单链抗体基因,重组于载体pFUSE5,电转化E.coliXL 1-Blue。在辅助噬菌体援救下,构建成噬菌体单链抗体库。采用聚合酶链反应、核苷酸序列测定和酶联免疫分析鉴定单链抗体库的特征。结果本抗体库的噬菌体库容量约1×106,单链抗体基因插入效率为93%,存在序列差异性并含有抗B-淋巴细胞刺激因子单链抗体。结论成功地构建了抗人B-淋巴细胞刺激因子单链噬菌体抗体库,为筛选抗B-淋巴细胞刺激因子单链抗体药物奠定了良好的基础。

BLyS改组噬菌体文库的构建及初步筛选

从质粒pT7474-BLyS及人胎脑cDNA文库中分别扩增出BLyS和APRIL基因,用DNase I消化后,回收小于50 bp的片断,用于DNA改组。PCR产物与噬菌体载体pfUSE5连接后,电转E.coliER2738获得改组文库。构建的改组文库库容量为8.9×105。对文库进行初步的筛选,获得了一个受体结合活性降低的突变克隆。成功构建了BLyS改组噬菌体文库,为蛋白结构与功能之间关系的深入研究打下了基础。

细胞因子发信号阻抑蛋白SOCS3作用机制及其在相关疾病中的研究

SOCS家族是JAK/STAT通路的反馈抑制因子,又被称为细胞的“分子刹车”。SOCS3是该家族中目前研究最热,也是最为清楚的成员之一。该文系统介绍了近几年对SOCS3结构、功能以及临床上的最新研究进展,并分析了今后可能的研究方向。

融合干扰素-BLA(IFN-BLA)的构建、表达、纯化及抗病毒活性测定(英文)

干扰素BLA(IFN BLA)由干扰素beta1b(IFN beta1b)和干扰素alpha2b(IFN alpha2b)通过连接肽GGGS融合而成。优化了其在大肠杆菌BL21CodonPlus(DE3)RIL中的实验室表达条件,表达的目的蛋白占菌体总蛋白的35%以上并且主要以包涵体的形式存在。对包涵体的复性条件进行了摸索,建立了IFN BLA的复性及纯化方法,纯化后的蛋白产量约为45mg/L,纯度在90%以上。抗病毒活性分析表明这一新的融合蛋白可能具有协同或加成活性。

高活性的人白细胞介素-3突变体的构建与表达

目的:在大肠杆菌中构建表达高活性的人白细胞介素-3(hIL-3)突变体。方法:通过定点突变的方法构建hIL-3突变体K116V和K116W的表达载体,并实现hIL-3突变体在大肠杆菌中的表达。对所得包涵体蛋白依次溶解、纯化、透析复性。用Westernblot检测hIL-3突变体的特异性。单溶液细胞增殖(MTS)测定hIL-3突变体的生物学活性。结果:hIL-3在大肠杆菌中高效表达,表达量占菌体总蛋白的40%以上,主要以包涵体的形式存在。将包涵体溶解在8mol/L脲中,经Ni-NTA-Sepharose柱纯化后纯度达90%以上。MTS法测定hIL-3突变体K116V的活性为野生型的5倍,K116W的生物学活性也有所增加。结论:获得了高活性的hIL-3突变体K116V,有望成为hIL-3的替代品,也证明了hIL-3第116位的赖氨酸残基对于hIL-3的生物学活性很重要。

筛选浙贝母内生真菌以及抑菌活性菌株性质研究

目的:对浙贝母内生真菌以及抑菌活性菌株性质进行分析探讨,为今后的研究工作提供可靠的理论依据。方法:采取组织分离印迹对照法自浙贝母植株中分离内生真菌,经牛津杯法对抑菌活性进行筛选,对活性菌株展开发酵培养,并绘制出抑菌活性变化曲线、培养基消耗曲线以及次生代谢产物浓度变化曲线,经高效发酵体系对抑菌活性菌株进行发酵,分离浓缩发酵液后,进行萃取分离。结果:经统计试验中共获得36种内生真菌,低下鳞茎中分离的BJ7具有很高的抑菌活性;发酵9天时的BJ7抑菌活性最佳。结论:浙贝母中可分离得到多种内生真菌,其中以BJ7的抑菌活性最高,应对其给予重视。

生物研究企业科研项目经费单独核算管理探析

863计划是一项以政府为主导,以有限领域为研究目标的基础研究性国家计划,它的提出旨在提高国内各大行业的自主创新能力,实现企业战略性、前瞻性的深发展。本文以生物研究企业为出发点,以实现前沿技术研究的科研项目领域为视角,具体研究其科研经费的单独核算与管控问题,实现构建生物研究企业科研项目经费单独核算管理的新举措。

奥氮平和利培酮对精神分裂症小鼠模型的作用

利用精神分裂症小鼠模型比较临床上使用的非典型抗精神分裂症药物利培酮(Risperidone)和奥氮平(Olanzapine)的作用.试验结果:①利培酮和奥氮平都能有效地抑制小鼠的快速移动行为,高剂量的利培酮和奥氮平都能有效地抑制小鼠的刻板性行为;②利培酮的半最大效应浓度比奥氮平的半最大效应浓度小,表明其治疗效果更明显;③从共济失调副反应的半最大效应浓度与快速移动效应的半最大效应浓度的比值来看,利培酮的疗效也优于奥氮平.