酪氨酸羟化酶和GTP环水解酶-1基因修饰永生化成纤维细胞及其表达研究

目的 探讨酪氨酸羟化酶 (TH)和GTP环水解酶 1(GCH)基因修饰的永生化成纤维细胞的可行性和表达能力 ,为其混合移植治疗帕金森病 (PD)作准备。方法 SV40大T抗原转化成纤维细胞使其永生化。构建TH和GCH基因真核表达质粒并转染永生化成纤维细胞 ,利用免疫组化和RT PCR检测其在体内外的表达。结果 TH和GCH基因修饰的永生化成纤维细胞在体外可长期传代培养且可有效表达 ,脑内移植后TH基因至少可表达 8周以上。

生长抑素与乙肝表面抗原融合基因重组痘苗病毒的构建及其表达

将生长抑素(ss)与乙肝表面抗原(HBsAg)融合基因(ss/HBs)克隆到痘苗病毒表达质粒pGJP-5中,通过与痘苗病毒天坛株体内重组和蚀斑挑选技术获得融合基因的重组病毒,它保持痘苗病毒原有的感染性,并能表达出 ss 和 HBsAg 产物.表达产物呈表面带 ss 决定簇的 HBsAg 杂合颗粒,并分泌到感染细胞之培养液中.杂合颗粒的大小和密度与报道的 HBsAg 颗粒相似。本文还对该重组痘苗病毒可能作为 ss 活载体苗的前景进行了讨论。

貂肠炎病毒基因的分子克隆和结构研究

从貂肠炎病毒(Mink enteritis virus,MEV)感染细胞培养物提取病毒的中间复制形双链DNA分子(RF DNA),经绿豆核酸酶(Mung bean nuclease)酶解消除RF DNA两端封闭的发夹结构,将全长基因组克隆于质粒pUC18中。对克隆片段进行了酶切位点分析,并做了限制性内切酶图谱。将测定的核苷酸序列与猫细小病毒(Feline parvovirus,FPV)相应片段的序列进行了比较,同源序列可达99.2％。

固定化酵母不对称水解布洛芬乙酯制备S（＋）－布洛芬

用多种固定化载体对含有不对称水解布洛芬酯的脂肪酶的丝孢酵母进行固定化。海藻酸钙、卡拉胶、聚丙烯酰胺凝胶和ＰＶＡ固定化酵母后，酶活力回收分别为６％、１６％、１８％和７％；用自制的高脱乙酰度、高分子量的壳聚糖，通过成囊装置包埋酵母细胞，并用戊二醛交联，制得直径１．０ｍｍ左右的固定化酵母细胞壳聚糖多孔微球，酶活力回收达８０％以上，操作半衰期７５天以上，而且每次反应所产生的布洛芬的比旋光度均为［α］２０Ｄ＝＋５５°左右。固定化酶的最适温度从未固定化时的３５℃提高到４５℃。每克干重的壳聚糖可固定化１～５倍干重的酵母，固定化壳聚糖微球有较高机械强度。

人瘢痕组织TIMP-1核酶表达载体的构建及临床意义

目的 设计能特异性切割人类瘢痕组织中TIMP - 1mRNA的核酶 ,构建其体外表达载体并大量制备核酶 ,以研究特异性阻断TIMP - 1基因表达对瘢痕胶原降解的影响。方法 根据Symons的“锤头结构” ,以人TIMP - 1的mRNA为靶RNA ,设计核酶 ,以P 1.5为载体 ,制备TIMP - 1特异性核酶的克隆 ,并通过转录制备大量核酶。结果 针对第 12 3 ,2 99和 3 5 3位这三个位点设计了三个核酶 ,合成核酶基因后 ,构建了其表达载体并完成了克隆 ,通过体外转录证实克隆正确。结论 核酶体外表达载体的构建及克隆是研究核酶活性 ,抑制TIMP - 1基因表达 ,调控胶原降解的关键步骤之一。人瘢痕组织TIMP - 1核酶体外表达载体的成功构建及克隆 ,为进一步通过反义抑制 ,阻断人瘢痕组织TIMP - 1过度表达 ,实现对病理性瘢痕胶原代谢的调控 ,奠定了坚实的基础。

肝癌患者外周血和癌组织中T细胞亚群NK、ADCC效应变化及其相关性研究

目前,在肿瘤学研究中已注意到宿主对肿瘤能够产生不同形式的免疫反应,其中淋巴细胞、NK细胞发挥着重要作用,晚近资料亦表明肿瘤局部免疫反应直接反映机体抗肿瘤免疫功能状态。但迄今有关肝癌的研究不多。尤其对宿主外周血和癌组织中细胞免疫反应变化规律和相关性研究尚未见报道。为了进一步探讨宿主免疫功能变化对肝癌发展扩散的影响和寻找能够反映宿主免疫状态的敏感指标,我们对64例肝细胞癌(HCC)病人进行了研究。

3种淡水育珠蚌碱性磷酸酶（ALP）比较酶学的初步研究

分别从三角帆蚌、褶纹冠蚌、背角无齿蚌的外套膜中部分提取了一种碱性磷酸酶（ＡＬＰ），并对这３种来源的ＡＬＰ进行了比活力和动力学性质的比较研究。经过相同提纯步骤后，外套膜ＡＬＰ比活顺序是褶纹冠蚌＞背角无齿蚌＞三角帆蚌；三角帆蚌ＡＬＰ作用于底物磷酸苯二钠的最适ｐＨ值为９．４０，最适温度为３７℃，米氏常数Ｋｍ为０．５３ｍｍｏｌ／Ｌ；褶纹冠蚌ＡＬＰ的最适ｐＨ值为９．１２，最适温度为４０℃，米氏常数Ｋｍ为１．７２ｍｍｏｌ／Ｌ；背角无齿蚌ＡＬＰ的最适ｐＨ值为９．５０，最适温度为４０℃，米氏常数Ｋｍ为０．５７ｍｍｏｌ／Ｌ。３种蚌的ＡＬＰ均为Ｍｇ￣（２＋）、Ｃａ￣（２＋）、Ｂａ￣（２＋）所激活，为Ｃｕ￣（２＋）、Ｚｎ￣（２＋）、ＫＨ＿２ＰＯ＿４、ＭＥ（疏基乙醇）、ＥＤＴＡ－Ｎａ＿２所抑制。

日本血吸虫23kD抗原表位及多价疫苗的初步研究

目的 研究日本血吸虫 2 3kD抗原表位及日本血吸虫 2 3kD抗原大亲水区多肽 (LHD -Sj2 3)与脂肪酸结合蛋白(SjFABP)两个基因重组抗原联合免疫小鼠的保护效果。 方法 人工合成血吸虫 2 3kD抗原中一段可诱导T细胞和B细胞免疫应答的抗原表位多肽p14 ,与鸡白蛋白偶联后免疫小鼠。用LHD -Sj2 3和SjFABP两个基因重组抗原联合免疫大鼠 ,观察诱导的免疫保护效果。结果与结论 人工合成肽 p14诱导了 2 2 2 2 %～ 30 18% (P <0 0 5～ 0 0 0 1)的减虫率。用LHD -Sj2 3和SjFABP两个基因重组抗原免疫大鼠时 ,分别获得 32 14 %和 31 85 %的减虫率 (P >0 0 5 ) ,当用这两种基因重组抗原联合免疫大鼠时 ,获得了 4 7 2 8%的减虫率。加强抗原表位及“鸡尾酒”疫苗研究 ,可为寻找更高保护作用的抗血吸虫病疫苗提供基础。

甲壳动物消化酶的研究

现有的研究表明,甲壳动物消化酶的活性与其食性、发育阶段、营养、温度、pH值、盐度等诸因素密切相关,并同时受到内因和外因的调控。对甲壳动物消化酶学的深入理解,有助于深入了解甲壳动物消化生理状况,有效提高饲料的消化利用率,减轻对环境的污染。

生长抑素基因与乙肝病毒表面抗原基因融合体质粒(pUC12-ss/HBs)的构建

为了将生长抑索(Somatostatin,ss)基因融合到乙肝表面抗原(HBsAg 或 HBs)基因 C 末端 Acc Ⅰ 位点(aa223位置),先将质粒 pWR13-HBs/4的多接头区 Sal Ⅰ位点消除,因为它也可被 AccⅠ酶切。在AccⅠ位点加入 Bgl Ⅱ接头,用 Sac Ⅰ和 Bg Ⅱ切下 HBs 基因片段(700bp),并将其插入到 pUC12-ss/2中 ss 基因N 末端 Sac Ⅰ和 BamH Ⅰ位置.获得基因融合体质粒 pUC12-ss/HBs。经 DNA 序列分析,两基因融合处的阅读框架正确,且 HBs 基因的起始密码 ATG 和 ss 基因全序列都得以证实.

Bcl-2蛋白在成人急性白血病表达的临床意义

目的:检测Bcl-2蛋白在不同阶段成人急性白血病的表达分布,分析Bcl-2蛋白表达是否可以作为预测化疗反应的指标。方法:选择成人急性白血病患者骨髓标本72例,分3组:初治组18例,完全缓解(CR)组38例,复发组16例。正常对照组6例。以流式细胞仪和单克隆抗体检测Bcl-2蛋白表达,进行统计学分析。结果:①Bcl-2蛋白在初治组、CR组和复发组表达率分别为11.11%、18.42%、62.50%。复发组表达率显著高于初治组和CR组(均P<0.01),初治组和CR组表达率差异无统计学意义(P>0.05);②Bcl-2在急性髓细胞白血病和急性淋巴细胞白血病表达率分别是24.07%(13/54)和33.33%(6/18);两组差异无统计学意义(P>0.05);③Bcl-2蛋白表达阳性组与阴性组CR率分别是36.84%和77.36%(P<0.01)。结论:Bcl-2蛋白在成人急性白血病复发组高表达并且与CR率低相关。

血管内皮生长因子_(165)核酶的合成及其体外活性

目的 探讨抗血管内皮生长因子1 65(VEGF1 65)核酶的设计合成及其生物学活性 .方法 利用计算机辅助设计针对 VEGF1 65的锤头状核酶 ,构建核酶的自剪切转录载体p GEMRz2 12 ,体外转录合成核酶 Rz2 12及其相应的底物VEGF1 65m RNA,在无细胞体系中观察核酶对靶 RNA的切割作用 .结果 构建的自剪切转录载体在转录的过程中发生了自身剪切 ,并释放出目的核酶 Rz2 12 ,该核酶具有切割VEGF1 65m RNA的作用 .结论 计算机辅助设计的 VEGF1 65锤头状核酶体外可有效切割靶 RNA。

血管性血友病因子在心血管疾病中的研究进展

血管性血友病因子是一类主要由内皮细胞分泌的多聚糖蛋白,通过激活血小板,参与血栓形成。它与一系列心血管疾病如动脉粥样硬化、急性冠状动脉综合征、心房颤动等均关系密切,特异性抑制血管性血友病因子的新型抗血小板药物研发有望突破。

一种新发现的香菇球状病毒

迄今为止国际上香菇病毒的研究结果表明,在香菇中含有直径分别为25、30和39nm的球状病毒颗粒,它们的一个共同特征是,这些病毒颗粒的核酸型均为双链核糖核酸(dsRNA).在国家自然科学基金会的资助下,我们对上海地区发生的香菇病毒病进行了研究,发现了一种新的香菇球状病毒颗粒,它的核酸型是单链核糖核酸(ssRNA),并探讨了这种病毒颗粒与病毒病的发生和香菇菌种退化的关系.

急性B淋巴细胞白血病B细胞B7分子表达缺陷

目的 探讨B7分子表达与急性B淋巴细胞白血病 (BALL)发病机制的的关系。方法 Ficoll Hypaque密度梯度离心法分离出患者及正常人的外周血单个核细胞 ,体外培养 2 4h后 ,流式细胞仪检测B细胞细胞膜表达B7.1、B7.2表达的百分率 ;BALL组与正常对照组作组间比较。结果 与正常对照组相比 ,BALL组B7.1、B7.2表达及B7.1、B7.2双表达的百分率明显低于正常人 (P <0 .0 5 )。结论 BALL外周血B细胞B7分子的表达存在缺陷 ,可能是BALL的发病机制之一及白血病细胞逃避机体“免疫监视”的重要原因。

SA脂质体介导人白介素-10基因转染对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤的影响

将48只SD大鼠随机分为正常对照组、缺血对照组(缺血组)、空质粒组和白介素(IL)-10基因转染组(转染组),后三组采用Longa法建立局灶脑缺血再灌注损伤(MCAO)模型。造模成功后转染组及空质粒组分别于侧脑室注射SA脂质体/pcDNA3.1-IL-10,SA脂质体/pcDNA3.1(+)。各组大鼠于预定时间处死制作脑组织标本,采用RT-PCR法检测IL-10基因表达情况;观察海马CA1区神经元损伤情况,测定脑梗死体积并进行神经行为学评分。结果转染组再灌注72 h时大脑皮层及海马中均能检测到IL-10 mRNA表达,其余三组均无表达。转染组海马CA1区神经元损伤程度明显轻于缺血组及空质粒组,脑梗死体积和神经行为学评分亦低于缺血组及空质粒组(P均<0.05)。证实SA脂质体介导人IL-10基因转染能减轻大鼠局灶脑缺血再灌注损伤。

牛碱性成纤维细胞生长因子cDNA的克隆及其酵母重组表达质粒的构建

根据已有资料设计并合成引物，利用ＲＴ－ＰＣＲ方法得到牛ｂＦＧＦｃＤＮＡ全序列，经过序列分析后，建立其酵母分泌型表达质粒ｐＶＴ１０２Ｕ／ａ－ｂｂＦＧＦ。

小鼠釉丛蛋白在大肠杆菌中的表达,纯化及抗血清的制备

目的 :以大肠杆菌为工程菌制备釉丛蛋白 ,纯化并免疫制备抗血清。方法 :用酶切、连接的方法将已克隆至 pBluescriptKS +载体中的TuftelincDNA片段 (编码 36 5个氨基酸 )用T4DNA连接酶连入载体pPRoEXTMHTc中 ,转化大肠杆菌 ,IPTG诱导。收集菌体 ,裂解后SDS -PAGE电泳 ,表达出分子量Mr 4 2×10 3 的融合蛋白。割胶后免疫新西兰大白兔 ,制备抗体。结果 :表达出分子量Mr 4 2× 10 3 的融合蛋白与预期一致。 8周以后 ,Western检测抗原抗体特异性及抗体效价达 1:10 0 0 0 0。结论 :认为成功的表达出釉丛蛋白并制备出了高效价多克隆抗体。