貂肠炎病毒基因的分子克隆和结构研究

从貂肠炎病毒(Mink enteritis virus,MEV)感染细胞培养物提取病毒的中间复制形双链DNA分子(RF DNA),经绿豆核酸酶(Mung bean nuclease)酶解消除RF DNA两端封闭的发夹结构,将全长基因组克隆于质粒pUC18中。对克隆片段进行了酶切位点分析,并做了限制性内切酶图谱。将测定的核苷酸序列与猫细小病毒(Feline parvovirus,FPV)相应片段的序列进行了比较,同源序列可达99.2％。

生长抑素与乙肝表面抗原融合基因重组痘苗病毒的构建及其表达

将生长抑素(ss)与乙肝表面抗原(HBsAg)融合基因(ss/HBs)克隆到痘苗病毒表达质粒pGJP-5中,通过与痘苗病毒天坛株体内重组和蚀斑挑选技术获得融合基因的重组病毒,它保持痘苗病毒原有的感染性,并能表达出 ss 和 HBsAg 产物.表达产物呈表面带 ss 决定簇的 HBsAg 杂合颗粒,并分泌到感染细胞之培养液中.杂合颗粒的大小和密度与报道的 HBsAg 颗粒相似。本文还对该重组痘苗病毒可能作为 ss 活载体苗的前景进行了讨论。

生长抑素基因与乙肝病毒表面抗原基因融合体质粒(pUC12-ss/HBs)的构建

为了将生长抑索(Somatostatin,ss)基因融合到乙肝表面抗原(HBsAg 或 HBs)基因 C 末端 Acc Ⅰ 位点(aa223位置),先将质粒 pWR13-HBs/4的多接头区 Sal Ⅰ位点消除,因为它也可被 AccⅠ酶切。在AccⅠ位点加入 Bgl Ⅱ接头,用 Sac Ⅰ和 Bg Ⅱ切下 HBs 基因片段(700bp),并将其插入到 pUC12-ss/2中 ss 基因N 末端 Sac Ⅰ和 BamH Ⅰ位置.获得基因融合体质粒 pUC12-ss/HBs。经 DNA 序列分析,两基因融合处的阅读框架正确,且 HBs 基因的起始密码 ATG 和 ss 基因全序列都得以证实.

血管内皮生长因子_(165)核酶的合成及其体外活性

目的 探讨抗血管内皮生长因子1 65(VEGF1 65)核酶的设计合成及其生物学活性 .方法 利用计算机辅助设计针对 VEGF1 65的锤头状核酶 ,构建核酶的自剪切转录载体p GEMRz2 12 ,体外转录合成核酶 Rz2 12及其相应的底物VEGF1 65m RNA,在无细胞体系中观察核酶对靶 RNA的切割作用 .结果 构建的自剪切转录载体在转录的过程中发生了自身剪切 ,并释放出目的核酶 Rz2 12 ,该核酶具有切割VEGF1 65m RNA的作用 .结论 计算机辅助设计的 VEGF1 65锤头状核酶体外可有效切割靶 RNA。

甘薯抗瘟病品种特异性抗性蛋白质的初步鉴定

研究发现甘薯“闽抗330”的叶片组织粗提液对甘薯薯瘟病原细菌(Pseudomonas solanacoarum E.F.Smith)的生长有抑制作用,而感病品种“新种花”则无明显的抑制效应.IEF分析结果表明,这种不同的作用与一种特异性的蛋白质有关,其等电点pH在6左右,这两种甘薯品种叶片组织的粗提液经薯瘟病原细菌(低毒菌)吸附后,“闽抗330”品种中的这条蛋白质带消失,而感病品种“新种花”本身就无这条蛋白带,表明品种对薯瘟病的抗病性与这一蛋白质有关。凝集活性测定结果表明,两个品种的叶片粗提液均存在对兔红细胞的凝集活性。

骨骼肌失神经后胰岛素受体特性的改变

采用健康成年鸡的自身对照实验,研究鸡的前背阔肌(ALD)和后背阔肌(PLD)失神经后胰岛素受体的改变。结果:失神经4周后,鸡前背阔肌失神经4周后其细胞膜胰岛素受体的高亲合位点的解离常数(kd)减小(2.6±0.2vs,1.3±0.1nM,p<0.05),结合容量(Bc)减少(295±34vs,181±17fmol/mg膜蛋白),最大结合力(Bmax)增加(1878±142vs,2361±182cpm,P<0.05)。与此相反,后背阔肌的kd增大(2.5±0.4vs,7.2±0.7nM),Bc增加(154±24vs,249±43 fmol/mg膜蛋白),Bmax减少(1271±178vs,822±153cpm)。ALD和PLD的胰岛素受体的这种相反改变可能与失神经后ALD肥大和PLD萎缩有关.

抗血管内皮生长因子多位点核酶的合成及其体外切割作用

目的:设计合成血管内皮生长因子多位点核酶,探 讨其对靶RNA的切割作用.方法:利用计算机辅助设计针对 VEGF165的3个单位点核酶(Rz1,Rz2,Rz3)和联合型多位 点核酶(Rz123),构建其自剪切转录载体,观察多位点核酶对 靶RNA的切割作用.结果:构建的多位点核酶自剪切转录载 体在体外转录中,顺式核酶发生了自身剪切,并释放出正确的 目的核酶,多位点核酶可切割靶RNA,且效率高于单一核酶, 其切割效率分别为(37±10)%(Rz1),(51±8)%(Rz2), (68±15)%(Rz3)和(88±11)%(Rz123).结论:抗血管内 皮生长因子多位点核酶体外可联合切割靶RNA,具有较高的 生物活性.

乙肝病毒基因上一个新的维甲素受体反应元件的发现

用构建好的乙肝病毒基因亚克隆ｐＢａｍＨＩＨｉｎｃｌＣＡＴ２转染人特异性肝癌细胞ＨｅｐＧ２及人非特异性肝癌细胞Ｈｅｌａ，通过相应配体的刺激，使细胞内氯霉素乙酰基转移酶活力明显增强．进一步的体外蛋白阻滞分析，确定在该亚克隆上含有一新的维甲素受体反应元件．此元件序列极端保守。

基因微矩阵技术在骨肉瘤发病相关基因研究中的应用

目的探索骨肉瘤发病相关基因,研究基因表达水平对于骨肉瘤发病的重要意义。方法采用3个公认的骨肉瘤细胞株及1个成骨细胞株,提取总RNA,合成生物素标记的cRNA与AffymetrixGeneChipU133A芯片杂交。随机挑选10个差异表达基因,分别设计合成引物,用嵌合荧光法(SYBRGreenI)实时RTPCR法定量测量9例术中收集的新鲜骨肉瘤标本中各基因的表达水平,应用ABIPrism7000分析其与成骨细胞株之间的表达差异。结果以表达差异≥2.0倍为限,在AffymetrixHGU133A芯片包含的所有基因(约22000个转录本)中,3个骨肉瘤细胞株与成骨细胞株相比较,共同上调58个基因;共同下调142个基因。随机挑选10个差异表达基因的实时RTPCR结果与芯片结果完全相符。结论骨肉瘤是一种多基因病变,应用微矩列有助于发现该肿瘤的基因变化规律以及研究肿瘤内基因与基因的相互作用关系。

反义RNA阻断Hep G2细胞FasL的表达及功能研究

应用分子克隆技术将人FasLcDNA片段反向插入逆转录病毒载体pLXSN ,构建重组质粒pL (hFasL AS )SN ,转染包装细胞PA317后获得FasL反义RNA重组逆转录病毒表达载体假病毒上清 ,经NIH3T3细胞检测其感染滴度后转染肝癌细胞株HepG2细胞并筛选建系 ,命名为HepG2 hFasL AS。半定量RT PCR检测显示HepG2 FasL AS细胞FasL的mRNA明显少于正常HepG2细胞 ;FACS检测显示HepG2 FasL AS细胞FasL的表达与HepG2细胞相比显著下降 ;同时 ,HepG2 FasL AS细胞导致HL 6 0细胞凋亡能力有所下降。