人端粒酶反义寡脱氧核苷酸对胃癌细胞系SGC-7901的生长抑制和诱导凋亡的研究

端粒酶活性在胃癌组织中表达率很高,在正常胃黏膜组织中则基本不表达。因此,以端粒酶为靶点的反义治疗有望成为胃癌治疗的有效途径之一。目的:检测特定的人端粒酶反义寡脱氧核苷酸(AS-ODN)对胃癌细胞系SGC-7901生长的抑制作用,并证明其主要机制为抑制端粒酶活性和诱导细胞凋亡。方法:用改良的聚合酶链反应(PCR)-端粒重复扩增协议(TRAP)法定量检测端粒酶AS-ODN作用前后SGC-7901细胞的端粒酶活性;台盼蓝染色法观察SGC-7901细胞活力;光镜和电镜观察凋亡细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:SGC-7901细胞有端粒酶活性表达。不同浓度的端粒酶AS-ODN作用于SGC-7901细胞48～96h后,细胞端粒酶活性和生长受到明显抑制,光镜、电镜观察和流式细胞仪检测均证实有细胞凋亡存在。错义AS-ODN(N-ODN)处理组SGC-7901细胞则无显著变化(P<0.05)。结论:端粒酶AS-ODN通过抑制胃癌细胞的端粒酶活性和诱导细胞凋亡,最终抑制胃癌细胞生长,其抑制作用呈剂量、时间依赖性和序列特异性。端粒酶AS-ODN对端粒酶活性的抑制比对细胞生长的抑制更敏感,两种抑制作用并不完全平行。

反义核酸对胃癌细胞端粒酶活性与细胞生长的抑制

目的 阐述反义核酸对端粒酶活性抑制作用的浓度依赖性和序列特异性,表明端粒酶活性表达对胃癌细胞分化的不依赖性。方法 运用改良的端粒酶活性定量检测法,测定三种胃癌细胞(MKN-28、SGC-7901、MKN-45)的端粒酶活性;用台盼蓝染色法,观察胃癌细胞的活力。结果 三种不同分化程度的胃癌细胞均有端粒酶活性的表达,但其活性的高低与其分化程度没有显著关系。在指定的浓度下,端粒酶反义核酸作用于胃癌细胞后,MKN-45和SGC-7901胃癌细胞出现明显的端粒酶活性和细胞生长的抑制,但在同样浓度条件下,MKN-28胃癌细胞只出现端粒酶活性的抑制。错义序列对照组则无明显变化。结论 端粒酶活性与胃癌细胞的分化没有显著相关性。端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能抑制胃癌细胞的生长和端粒酶活性,其抑制作用有浓度依赖性和序列特异性,其作用机制是通过抑制端粒酶活性,端粒酶活性的抑制并不总是同细胞生长的抑制平行的。

反义寡聚核苷酸的化学修饰

反义寡聚核苷酸(antisense oligonucleotides, AS-ODNs)的概念最先提出于1967年,经过30多年的研究,人们已意识到在各种反义寡聚核苷酸的广阔领域里,有可能寻找到更有效的抗病毒和抗肿瘤新药.

人端粒酶反义寡核苷酸抑制三种不同分化程度胃癌细胞生长及作用机制研究

目的 研究特定序列人端粒酶反义寡核苷酸(AS -ODN)抑制三种分化程度不同的胃癌细胞(MKN -4 5、SGC -790 1、MKN -2 8)生长的可能性,并阐述其抑制胃癌细胞生长的作用与胃癌细胞分化程度的相关性。方法 在指定的作用时间和浓度等条件下,以AS -ODN作用于不同分化程度的三种胃癌细胞,用改良端粒酶活性定量检测法测定AS -ODN片段作用前后胃癌细胞的端粒酶活性;用锥虫蓝染色法观察细胞活力;用倒置显微镜、电镜、流式细胞仪和原位末端标记(TUNEL)法观察细胞凋亡情况。结果 以指定浓度的AS- ODN作用后,MKN- 4 5和SGC -790 1细胞出现明显的端粒酶活性和细胞生长抑制(P <0 .0 5 ) ,但在同样浓度条件下,MKN -2 8胃癌细胞只出现端粒酶活性抑制。错义序列对照组则无明显变化。以10 μmol/L的AS- ODN连续作用三种胃癌细胞96h后,光镜、电镜和TUNEL法检测均发现MKN- 4 5和SGC- 790 1细胞表现出特有的凋亡征象,流式细胞仪检测证实MKN -4 5和SGC- 790 1细胞的平均凋亡率在4 4 .75 %和33.5 6 % ,错义序列对照组则无明显变化(P <0 .0 5 )。结论 AS ODN能有效抑制胃癌细胞生长,其作用机制主要是抑制端粒酶活性和诱导细胞凋亡。AS -ODN对中分化胃癌细胞的生长抑制最显著,对低分化胃癌细胞的抑制作用略强于高分化胃癌细胞,?