兔抗原生物敏电极的研究

采用石墨电极作为基础电极 ,将待测兔抗原用丝素蛋白溶液固定在基础电极表面 ,根据抗原抗体的单一性识别原理 ,选用山羊抗兔IgG HRP抗体与其选择性结合制作而成 .利用H2 O2 将该生物敏传感器的电位响应信号放大 ,采用直接电位法检测兔抗原的浓度 .结果符合奈斯特响应 ,兔抗原的最低检测浓度 1.0× 10 -10 mol/L ,线性范围 1.0× 10 -8～ 1.0× 10 -10 mol/L ,响应时间为 15s .这种以固定化抗原结合酶标抗体量的多少作为检测抗原浓度的新型酶免疫电极 ,在临床检测。

凝血因子Ⅷ(FⅧ)在哺乳动物细胞中的表达研究

对FⅧ cDNA进行分子改建,并分别克隆到表达载体中,在多种哺乳动物细胞表达体系（CHO、BHK等）成功地获得了表达。结果证实:基因的改建可以有效的提高FⅧ在细胞中的表达。FⅧB结构域的缺失比全长FⅧ的表达量提高了3倍左右,而重链和轻链的共表达及vMF与FⅧ的共同转染使得其表达量进一步提高。与CHO表达系统相比较,FⅧ在BHK表达系统中的表达量提高了近10倍。

N-去硫酸肝素对肾缺血再灌注损伤防治作用的研究

目的 :研究 N去硫酸肝素对大鼠肾缺血再灌注损伤的防治作用。方法 :建立肾缺血再灌注损伤大鼠模型 ,实验动物随机分为正常对照组和 N 去硫酸肝素治疗及非治疗组。观察大鼠治疗前后肾组织中 P 选择素表达、组织病理学与肾功能的改变 ,以及凝血指标〔包括凝血酶原时间 (PT)和部分激活凝血时间 (KPTT)〕的变化。结果 :缺血再灌注后大鼠肾脏 P 选择素表达增高 ,出现明显组织病理学改变 ,血清尿素氮 (BUN)、肌酐(Cr)水平明显升高〔分别为 (14.5 4± 0 .6 7) mm ol/ L 和 (10 2 .12± 4.76 ) μmol/ L〕;N 去硫酸肝素治疗组肾脏组织中 P选择素表达受抑 (未出现棕黄色颗粒 ) ,病理学改变与肾功能损害减轻 ,且对 PT和 KPTT无明显影响。结论 :N去硫酸肝素对肾缺血再灌注损伤具有防治作用 ,且对凝血指标 PT和 KPTT无明显影响。

CD8^+ T细胞活化与分化的分子机制

CD8^+ T细胞识别由MHCⅠ分子递呈的抗原肽,由于大多数有核细胞都表达MHCⅠ分子,因此CD8^+ T细胞在清除被病毒、胞内菌、寄生虫等感染的细胞或突变的肿瘤细胞中发挥着重要作用。识别病原微生物等抗原后,CD8^+ T细胞活化并分化形成多种类型的效应和记忆细胞,不仅能及时清除被感染的细胞,也能形成长期保护。各亚群CD8^+ T细胞的表面分子、功能和定位不同,细胞存活的时间、再次感染时的增殖能力和效应功能也有所差别。本文主要讨论CD8^+ T细胞如何受到多条信号通路和转录因子调控,活化和分化成不同类型的效应和记忆细胞,并对临床应用T细胞抵御肿瘤和病原微生物的进展作一简单概述。

抗内毒素治疗的新策略

脂多糖 (Lipopolysaccharide,LPS)是G- 菌造成的败血症或脓毒性休克病理中最重要的致病因素 ,若在整个病理过程的上游 ,即在细菌内毒素水平阻断脓毒性休克的发生 ,就可能限制或阻止病理性的次级炎症级联反应。本文综述了各种不同来源的LPS结合蛋白在结合LPS从而中和并阻断内毒素的过程中的功效及应用现状 。

左旋多巴和多巴胺对多巴胺转运体数量和功能的影响

目的 :了解左旋多巴和多巴胺对多巴胺转运体的影响。 方法 :通过体外永久表达大鼠多巴胺转运体(DAT)的CHO细胞 (CHO/DAT ,即D8细胞 )的培养 ,采用MTT细胞活性检测和流式细胞仪观察不同剂量左旋多巴和多巴胺对D8细胞的毒性作用 ;利用 [3H]WIN35 ,4 2 8结合率和 [3H]DA摄取率检测DAT的数量和功能。 结果 :左旋多巴和多巴胺不仅对D8细胞有毒性损害 ,呈剂量、时间依赖 (P <0 .0 1) ,还能使DAT数量明显减少 ,与剂量相关 (P <0 .0 1) ,一定剂量的左旋多巴 (2 0 0 μmol/L～ 1mmol/L)可增加细胞对 [3H]DA的摄取 ,而大剂量左旋多巴 (5mmol/L)则抑制DAT的功能 (P <0 .0 1)。左旋多巴和多巴胺呈剂量依赖性地促进细胞凋亡 (P <0 .0 1)。结论 :左旋多巴和多巴胺不仅对D8细胞有毒性损害 ,还能使DAT数量明显减少 ,DAT结合位点的减少比细胞活性的下降更明显。一定剂量左旋多巴可增强DAT的功能。

不同心脏负荷及心室内压变化对大鼠早期心肌原癌基因表达的影响

目的检测容量(VOL)和压力超负荷(POL)早期大鼠左心室内压变化诱导左心室心肌原癌基因cfos、cjun、cmyc、egr1mRNA表达时间变化和差异。方法测定假手术大鼠、及心脏超负荷后不同时间点左心室收缩压(LVSP)和内压谷值(LVDP)变化,用狭缝杂交检测各时间点左室心肌cfos、cjun、cmyc、egr1mRNA表达,用密度仪定量分析。结果与假手术组比较,不同心脏负荷后早期LVSP均下降(P<0.05),48hVOL组最低,POL组恢复至对照组水平;负荷后LVDP逐渐增高,POL后6h,VOL12h最高(P<0.05),后者48h与假手术组相近(P>0.05)。POL诱导原癌基因表达峰值早于VOL,48hcmyc、cjun出现第2次表达增加。VOL后1h检测到cfos、cjun、egr1、cmyc弱表达,48hcfos无表达,cjun表达减弱,cmyc和egr1仍有较高表达。结论VOL、POL后左室内压增加诱导不同的心肌cfos、cjun、cmyc、egr1表达增加的时间顺序,与LVDP增高无关,cfos、cjun、cmyc表达与LVSP增高有关,提示左心室主动收缩产生的室内压为诱导原癌基因表达的主要因素;心脏超负荷后心肌原癌基因可持续表达,不同负荷原癌基因表达的时间过程差异可能对发生不同类型心肌肥厚有重要影响。

干预CD86协同刺激信号在诱导母胎界面Th2型免疫偏倚中的作用

目的 :探讨干预CD86协同刺激信号在诱导母胎界面局部形成Th2型免疫偏倚中的作用。方法 :将正常妊娠模型 (CBA×BALB/c)和自然流产模型 (CBA×DBA/ 2 )CBA孕鼠均分为两组 ,于孕第 4、6、8天 ,对照组腹腔注射大鼠IgG ,实验组腹腔注射大鼠抗小鼠CD86mAb ;孕第 9天 ,ELISA测定母胎界面组织培养上清中Th1型 (IFN γ、TNF α) /Th2型(IL 4、IL 10 )细胞因子表达水平 ,并计算IL 4 /IFN γ、IL 10 /IFN γ比值 ;孕第 12天比较两种模型各组的胚胎吸收率。结果 :正常妊娠模型中 ,干预CD86协同刺激信号对母胎界面原有的Th2型免疫偏离及妊娠预后均无显著影响。自然流产模型中 ,干预CD86协同刺激信号能够诱导母胎界面局部形成Th2型免疫偏倚并显著改善其妊娠预后。结论 :于孕早期 ,干预CD86协同刺激信号能够改善母胎界面局部细胞因子微环境 ,形成维持正常妊娠所需的Th2型免疫偏倚 。

以质粒为载体的基因治疗现状

近年来,质粒载体在基因治疗中的应用已引起人们的关注,并取得了很大进展。与病毒载体相比,质粒的优点为:制备简单,快捷,成本低廉,用于基因治疗较安全,并能与其它合成载体联合使用。本文就近年来质粒载体的发展,对质粒的设计,质粒导入机体的方法和途径、体内分布,和质粒抗癌药物的疗效进行了综述。

SARS冠状病毒3CL蛋白酶多克隆抗体的制备及纯化

SARS病毒(SARS-CoV)3CL蛋白酶在病毒的复制过程中起到关键作用,是抗病毒药物设计的重要靶标。本工作用在大肠杆菌中表达并纯化的SARS-CoV 3CL蛋白酶免疫新西兰大耳兔,获得了多克隆抗体血清;利用抗原偶联柱对血清进行了亲和纯化。SDS-PAGE以及Western-Blot结果显示纯化后的抗体纯度较高,特异性较强,为免疫学方法检测SARS-CoV 3CL在宿主细胞内的活动打下了基础。

利噜唑拮抗左旋多巴和多巴胺对中脑原代细胞的毒性作用

目的:研究左旋多巴(L-DOPA)和多巴胺(DA)对大鼠胚胎中脑原代细胞的毒性损害以及利噜唑拮抗L-DOPA和DA的毒性作用。方法:通过体外大鼠胚胎中脑原代细胞培养,采用MTT细胞活性和[~3H]DA摄取率检测中脑原代细胞的存活数和DA能神经元的[~3H]DA摄取功能。结果:当L-DOPA和DA浓度增至500 μmol·L^(-1)时,细胞存活率明显下降(P<0.05),均呈剂量依赖性。当L-DOPA和DA浓度分别增至1mmol·L^(-1)和200μmol·L^(-1)时,[~3H]DA摄取率明显下降(P<0.05),均呈剂量依赖性。利噜唑2～10μmol·L^(-1)能抑制L-DOPA和DA对细胞存活率和[~3H]DA摄取率的影响(P<0.05)。结论:大剂量L-DOPA和DA(≥500 μmol·L^(-1))对中脑原代细胞产生毒性损害,利噜唑能拮抗L-DOPA和DA对中脑原代细胞的毒性效应,具有神经保护作用。