人牙本质涎蛋白的抗体制备和组织表达研究

目的 :制备人牙本质涎蛋白抗体 ,观察其在不同组织的表达情况。方法 :用原核表达并经过初步纯化的人牙本质涎蛋白免疫新西兰大白兔获得多克隆抗血清并用Westernblot法测定效价和检测牙胚和其它组织的蛋白表达。结果 :抗人牙本质涎蛋白抗血清效价可达 1:10 0 0 0 0 ;Westernblot显示牙本质涎蛋白在人牙胚中有表达 ,其分子量约为Mr6 0× 10 3 左右。结论 :牙本质涎蛋白在人牙胚组织中有表达 ,提示其在牙齿发生、牙本质修复和再矿化中可能起重要作用。

小鼠釉丛蛋白成熟肽编码区cDNA克隆

目的 :克隆小鼠釉丛蛋白 (tuftelin)成熟肽编码区基因。方法 :设计引物 ,以小鼠牙胚cDNA文库为模板 ,利用PCR方法 ,扩增出小鼠釉丛蛋白成熟区的基因片段 (约 12 0 0bp) ,将所得基因片段插入pBS质粒载体 ,转化到大肠杆菌XL - 1-Blue后挑选阳性克隆 ,提取重组质粒DNA ,通过限制性酶切和部分核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果 :重组质粒pBS -tuftelin的酶切图谱和序列分析结果与国外文献报道一致。结论 :克隆到小鼠釉丛蛋白成熟肽编码区基因。

小鼠成釉蛋白成熟肽编码区cDNA序列的克隆

目的：克隆小鼠成釉蛋白（ＡＭＢＮ）成熟肽编码区基因。方法：用异硫氰酸胍一步法从昆明新生小鼠磨牙牙胚组织中抽提总ＲＮＡ，用Ｏｌｉｇｏ（ｄｔ）作引物逆转录合成牙胚ｃＤＮＡ，然后利用ＰＣＲ方法，从ｃＤＮＡ中扩增出小鼠成釉蛋白成熟区的基因片段（约１．１ｋｂｐ），将所得基因片段插入ｐＴＺ１８质粒载体，转化到大肠杆菌ＤＨ５α后挑选阳性克隆，提取重组质粒ＤＮＡ，通过限制性酶切和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果：重组质粒ｐＴＺ－ＡＭＢＮ的酶切图谱和部分序列分析结果与国外文献报道一致。