局灶节段性肾小球硬化与NPHS2基因突变

目的:检测不同病理类型散发性难治性肾病综合征(NS)患者NPHS2基因突变。方法:研究对象为1997年至2004年我院收治的19例散发性难治性NS患者,年龄4～48岁,男性15例,女性4例,其中激素不敏感患者7例,包括局灶节段性肾小球硬化(FSGS)5例,微小病变(MCD)1例,系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)1例;激素依赖患者12例,包括MCD6例,FSGS4例,未行肾穿刺2例。外周血基因组DNAPCR扩增后直接测序。间接免疫荧光法检测肾组织中podocin的表达。结果:①发现1例NPHS2基因431C>A的杂合突变,造成144位氨基酸由脯氨酸转变为组氨酸,查阅文献和基因库,未发现相同突变报道。该患者为激素依赖性NS,病理类型为FSGS。正常对照102条染色体中未发现同样突变。②发现11个SNP位点,其中3个位于外显子区,4个位于内含子区,1个位于启动子区,1个位于5'-UTR区,2个位于3'-UTR区。③该患者肾组织中podocin表达明显减弱。结论:在1例激素依赖NS患者中发现1个新的NPHS2基因突变,且肾组织中podocin蛋白表达明显减弱。推测该例患者发病和激素治疗反应差可能与NPHS2突变有关。

中国汉族Leber遗传性视神经病线粒体DNA 11778位点突变与外显率分析

目的:分析Leber遗传性视神经病(LHON)中线粒体DNA(mtDNA)11778位点突变与外显率。方法:应用PCR-SSCP和DNA测序方法,对3个中国汉族LHON家系的31例母系成员进行mtDNA11778位点突变检测,其中男14例,女17例;31例中15例为患者。40例正常人作为对照。结果与结论:3个家系31例样本中全部存在mtDNA11778位G→A突变,说明LHON患者均存在mtDNA11778位点突变。平均外显率48.4%,男性外显率(11/15)高于女性(4/16)。男性外显率有逐代降低,患者发病年龄随传代数增加呈现遗传早发现象。

Jo-1蛋白在大肠杆菌中的克隆与表达

构建在E.coli中表达人组氨酰-tRNA合成酶(Jo-1)的质粒。用RT-PCR从人胎盘组织总RNA中获得编码人组氨酰-tRNA合成酶(Jo-1)基因的全序列,将此片段定向克隆到麦芽糖融合蛋白表达载体pMAL-c中,诱导表达获得Jo-1的可溶性融合蛋白,并通过亲和层析予以纯化。结果免疫印迹实验表明,表达的融合蛋白能与含有抗Jo-1抗体的病人血清发生特异反应,重组融合蛋白具有Jo-1蛋白的免疫原性和免疫特异性。

重组人Jo-1抗原的表达、纯化以及免疫特异性检测

目的表达纯化重组人Jo-1抗原,免疫印迹和ELISA检测其免疫特异性。方法IPTG诱导含有Jo-1基因的重组菌,获得高表达的可溶性融合蛋白(MBP-Jo-1),亲和层析纯化该表达蛋白,免疫印迹和ELISA分别检测其抗原性并与生化提取的Jo-1抗原比对。结果表达的重组Jo-1蛋白具有Jo-1抗原的特异性。结论重组Jo-1蛋白与天然Jo- 1抗原具有相同的免疫原性和免疫原特异性。

miRNAs在肝癌干细胞中的作用

MicroRNAs(miRNAs)是一类参与转录后调控的小分子RNA,它在调控细胞的增殖、分化及肿瘤的形成等多种生理及病理过程中发挥着重要的作用.肝癌干细胞是肝癌组织中具有自我更新能力和分化潜能的一个微群体,它能够启始肝癌的发生,并且与肝癌的抗药性及复发等密切相关.已经有研究表明miRNAs对肝癌干细胞的发生发展起着重要的调控作用,包括致癌和抑癌的作用,因此总结miRNAs在肝癌干细胞中作用,有助于更好理解肝癌干细胞的特性及肝癌肿瘤生物学.近年来,除了传统的分子生物学手段,组学和系统生物学研究策略的运用也为miRNAs在肝癌中的研究提供了新的思路.鉴于此,深入研究miRNAs在肝癌干细胞中的分子机制,将为靶向肝癌干细胞的临床治疗提供新的途径.

急性单核细胞白血病特异性miRNA分子标志物的鉴定

目的:鉴定急性单核细胞白血病中特异高表达的micro RNA(miRNA)。方法:通过分析急性单核细胞白血病细胞系(THP-1)与慢性粒细胞白血病细胞系(K562)的miRNA-seq数据,筛选一批在THP-1细胞系中显著高表达的miRNA,通过实时荧光定量PCR技术对这些miRNA在THP-1和K562细胞系中进行验证,获得在THP-1细胞系中特异高表达的miRNA,再通过实时荧光定量PCR技术在急性单核细胞白血病患者骨髓样品中进行验证,鉴定有望应用于该类疾病临床诊断的分子标志物。结果:最终筛选得到了3个在急性单核细胞白血病中特异高表达的miRNA分子标志物:let-7d-5p、miR-222-3p、miR-221-3p。结论:通过结合组学数据,利用实时荧光定量PCR技术在细胞系及临床样本中的验证,最终鉴定了3个在急性单核细胞白血病中特异高表达的miRNA分子标志物。

先天性纯红细胞再生障碍性贫血斑马鱼模型相关microRNA的组学研究

目的探讨先天性纯红细胞再生障碍性贫血(DBA)相关microRNA的表达特征及其调控机制。方法利用morpholino技术建立核糖体蛋白基因Rps19表达不足的DBA斑马鱼模型和Rps19与p53同时表达不足的斑马鱼模型,利用新一代高通量测序(RNA-seq)技术,研究DBA斑马鱼模型的microRNA表达谱的特征及p53在其中的调控作用。结果 Rps19 MO的斑马鱼胚胎的循环血细胞明显减少,且尾部呈现出向腹侧弯曲的异常形态。而在p53敲低之后,斑马鱼的形态异常得到了一定程度的恢复。通过对microRNA表达谱的比较分析发现,在Rps19不足的斑马鱼胚胎中约1/4的microRNA表达量显著偏低,这些异常表达的microRNA可能影响到斑马鱼的正常发育过程。而在p53敲低之后,部分microRNA的表达恢复到正常水平。最终确定了47个在DBA发病过程中可能受p53调控的microRNA。结论 DBA斑马鱼模型的microRNA普遍低表达,其中部分microRNA受到p53的表达水平的调控。

原发性局灶节段性肾小球硬化患者CD2AP基因突变的研究

目的了解原发性局灶节段性肾小球硬化(FSGS)患者CD2AP基因突变特点。方法研究对象为2001年至2004年我院收治的82例病理确诊为FSGS患者,年龄12-76岁,男性43例,女性39例,临床诊断为肾病综合征(NS)者55例,非NS 27例;60例健康正常人为对照组。外周血基因组DNA PCR扩增后直接测序。冰冻切片免疫荧光双染色,激光共聚焦显微镜采集图像检测突变患者肾组织中CD2AP和podocin蛋白的表达。结果 (1)发现2个CD2AP外显子突变,1个为2号外显子160G>A杂合突变,造成第54位氨基酸由缬氨酸变为异亮氨酸 (V54I),该患者为非NS患者,已出现肾功能不全。另1个为4号外显子358A>G杂合突变,造成第120位氨基酸由异亮氨酸变为缬氨酸(1120V),该患者为NS患者,曾复发2次,目前肾功能尚正常。正常对照120条染色体中未发现同样突变。查阅文献和基因库,未发现相同突变报道。 (2)CD2AP外显子突变患者肾小球内CD2AP表达明显减低,同时伴有podocin表达的降低。(3) 发现1个启动子区突变、2个内含子突变和8个SNP位点,其中一个单核苷酸多态性(SNP)位点以往未见报道。结论CD2AP突变可能是原发性FSGS的致病原因之一。CD2AP外显子突变可导致CD2AP蛋白表达减少,并影响podocin的表达。

我有一个梦想

李昌钰的故事已经让国人耳熟能详,但在无缘与之见面的国人看来,李昌钰或许只是一种东方文化与西方科学非常精准地结合的一个文化符号。简而言之,就是一把现代之剑。……重剑无锋,李昌钰的故事大概就在这儿得到了一个“题眼”。每个人心中都有一把剑,剑的纹路与锋利程度就是人的成功纹路与锋利程度。这样的句子不仅能在古龙的小说里寻到,希望每一个人都能寻出自己的成功纹路。那麽,你并不难获得与李昌钰同样的成功。在警言警,自己也处在李昌钰当年位置上的年轻的女博士邓亚军就是这样演绎自己的梦想的: