骨质疏松症部分相关基因的研究进展

骨质疏松症已成为一个世界性的健康问题。它是以骨量减少、骨的微观结构退化为特征的,致使骨的脆性增加以及易于发生骨折的一种全身性骨骼疾病。骨质疏松是一个复杂的多因子疾病,由遗传和环境因素相互作用,具有高度的遗传决定性。复杂的遗传学体系还未完全清楚,所以骨质疏松基因的相关研究是当今分子遗传学的最大挑战之一。对近年来骨质疏松症几种相关基因的研究进展进行综述,探讨这些基因与骨质疏松的关系。

生命的解码：DNA、“人类基因组计划”与基因组学

在生命科学史上，没有一个发明或“发现”能像“DNA双螺旋”那样受人垂青，也没有一个项目或“计划”能像“人类基因组计划”那样举世瞩目，也没有一个学科或领域能像基因组学那样影响深远。

生命的解码：DNA、“人类基因组计划”与基因组学

“我们，美国、英国、日本、德国、法国与中国的政府首脑．骄傲地向全世界宣告：我们六国的科学家已经完成了人类生命的分子指南——由30亿个碱基对组成的人类基因组的关键序列图。 ——六国政府首脑《人类基因组联合宣言》

毛囊闭锁三联征一家系调查及基因研究

目的:确定一毛囊闭锁三联征(AI)家系的临床特点及易感位点连锁情况。方法:调查该家系临床资料,用1p21.1-1q25.3,6q25.1-25.2,D19S911-D19S1170和19q13.1-19q13.2易感基因位点附近的19个微卫星标记对该家系进行基因分型、连锁分析和单倍型分析。结果:该家系4代39人中13例患毛囊闭锁三联征,男8例,女5例,每代均有个体发病,符合常染色体显性遗传模式。经分析未发现上述位点与该家系存在连锁关系。结论:推断有新的易感位点与AI的发生有关,提示AI具有遗传异质性。

人基因组测序关键设备攻关不能再等

国内做人基因组测序的公司很多，但测序的整套设备包括试剂都是从美国购买。一个人做一次全基因组测序，因为设备的差异，中国比美国高500美元。人基因组测序成本飞速降低，人们对自己的基因组做测序是发展趋势。但从“十三五”规划中，没有看到国家开展相关关键技术攻坚的整体计划。

鸡FSH β基因5’调控区单核苷酸多态性分析

促卵泡激素(follicle-stimulating hormone,FSH)是由垂体前叶分泌的糖蛋白类促性腺激素。运用PCR-SSCP法检测鸡FSHβ基因5’调控区的单核苷酸多态性。检测发现该区域存在6个SNP位点,即G-494A,T-470A,A-464G,-450处插入碱基A,A-405G,A-361G。同时分析了SNPs与文昌鸡早期产蛋性能的相关性。结果显示,FSHβ基因调控区SNPs位点与鸡的早期产蛋性能显著相关。

孕期暴露因素与新生儿血管瘤发生的关联性研究

目的探讨新生儿血管瘤发生的高危因素,分析孕期暴露因素与新生儿血管瘤发生的关联。方法对我院所辖大型社区2010年1月至2011年6月出生新生儿的母亲进行回顾性调查研究,对此阶段出生的新生儿母亲进行问卷调查,包括孕妇基本情况、孕期疾病和用药、服用多种维生素;对新生儿血管瘤患儿母亲与正常新生儿母亲的上述因素进行比较,采用logistic回归分析筛选与血管瘤发生相关的因素。结果共获得有效问卷953例,发现34例血管瘤病例;对这34例患儿母亲的孕期暴露因素与正常新生儿母亲的比较发现,母亲年龄≥35岁、儿童性别、黄体酮和过量服用多种维生素是与新生儿血管瘤发生明显相关的孕期暴露因素(Waldχ2分别为4.932、5.592、5.065、7.585,P值分别为0.026、0.018、0.024、0.006);父亲年龄、上感、发热和抗感冒中药与血管瘤的发生无明显关联(P>0.05)。结论除了高龄孕产和儿童性别外,孕期使用黄体酮和过量服用维生素可能是新生儿血管瘤发生的高危因素。

1例X连锁型视网膜色素变性家系的分子遗传学研究

目的对1例来自云南省的X连锁型视网膜色素变性家系进行相关分子遗传学研究。方法在本研究小组前期工作中对该家系已初步确定的X连锁型遗传位点——RP2和RF3处选取具有高信息量的9个微卫星位标进行精细单倍型分析。在定位的候选基因RF3基因即RPGR基因上，使用构象敏感凝胶电泳（conformation sensitive gelelectro-phoresis，CSGE）的方法对其1～14号外显子进行突变筛选的同时对已有报道的突变热点区——外显子ORF15进行直接测序以寻找致病突变。结果通过精细定位扫描及相关单倍型分析，将该例家系的致病基因定位在RF3位点。RPGR基因1～14号外显子经CSGE的方法进行突变筛选，未发现有异常电泳条带；通过直接对突变热点区外显子ORF15的测序，在该例家系中检测到1个在国内外均有报道的热点突变：g．ORF15＋483_484delGA。结论g．ORF15＋483_84delGA移码突变导致了该家系产生X连锁型视网膜色素变性。

一个疑似X连锁型视网膜色素变性家系的遗传连锁分析的研究

目的对一个疑似X连锁型视网膜色素变性(X-linked retinitis pigmentosa,XLRP)家系进行分析,确定其致病基因的所在位点。方法选取已知XLRP候选基因附近的微卫星位标,用多点参数分析方法计算其最大优势对数值(LOD score),并通过对家系成员单倍型分析,确定该家系致病基因所在的染色体位置。结果位于X染色体长臂的微卫星标记DXS8043与该例遗传家系间最大LOD值小于-2,其他位于X染色体短臂的11个微卫星标记与该例遗传家系LOD值保持在0.5上下,无明显的高值。单倍型结果表明该家系中2例患者兄弟(Ⅲ1、Ⅲ6)和他们的携带者母亲(Ⅱ2)在DXS8051与DXS1214之间拥有在正常成员中不存在的基因型,表明该基因型与疾病共分离,进一步确定了他们X性连锁遗传模式,并且可将致病基因初步定位于DXS8051与DXS1214之间的RP23和RP6基因。结论可以排除该例家系的致病位点与X染色体长臂上的RP24基因的连锁,高度怀疑连锁位点存在于X染色体的短臂的RP23和RP6基因,需另增加位标的信息量,以进一步缩小致病基因所在的具体范围。

研究发现长链非编码RNA维持基因组稳定性及调控肿瘤耐药新机制

近日,中国科学院北京基因组研究所(国家生物信息中心)研究员郭彩霞团队、中科院动物研究所研究员唐铁山团队与天津医科大学附属肿瘤医院研究人员合作,发现了一条能影响肿瘤治疗效果的长链非编码RNA,它通过编码的小肽PACMP调控DNA损伤应答过程,影响肿瘤的发展和耐药.相关研究成果以Micropeptide PACMP Inhibition Elicits Synthetic-lethal Effects by Decreasing CtIP and Poly(ADP-ribosyl)ation为题,发表在Molecular Cell上.

一种新型贻贝抗菌肽的分离纯化及鉴定

厚壳贻贝(Mytilus coruscus)广泛分布于我国东部海域,其体内富含各种抗菌肽分子,是研究软体动物免疫防御机制以及开发抗菌肽来源的新型生物抗生素的重要对象。采用多步反相高效液相色谱对厚壳贻贝血清进行分离纯化,获得一种分子量为6261.55 D的具有抗菌活性的多肽成分;经多肽N端测序和基因克隆,结果表明该抗菌肽由55个氨基酸残基构成,含6个半胱氨酸并形成三对二硫键。结构域分析表明该抗菌肽具有几丁质结合结构域(Chitin-biding domain),因此将该抗菌肽命名为mytichitin-A。Mytichitin-A对革兰氏阳性菌具有较强的抑制作用,同时对真菌及革兰氏阴性菌也具有抑制作用。荧光定量PCR检测表明,mytichitin-A主要在厚壳贻贝的性腺组织中表达且在细菌诱导后12h其表达量达到峰值。研究为深入了解厚壳贻贝抗菌肽的分子多样性及免疫机制奠定了基础。

Leber遗传性视神经病变家系线粒体DNA突变检测

目的:探讨Leber遗传性视神经病变(LHON)患者的线粒体DNA(mtDNA)突变。方法:运用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)和DNA序列测定方法,设计4对引物,扩增出含11778、14484、3460三个已知原发突变位点和3394、4136、4160、4216、11696、14459、14482、14498八个已知继发突变位点的4对mtDNA片段,对3个LHON家系30位母系成员的血样进行检测。32份无视力障碍的正常人血样作对照。参照mtDNA序列为剑桥标准mtDNA序列。结果:30位母系成员均含11778位点突变,其中1人合并4164位点突变(A→G)。与剑桥标准mtDNA序列对比,30位LHON母系成员和32位正常对照均含有11719位点突变。结论:11778是LHON患者常见的突变位点,4164位点突变可能是新的继发突变或正常人单核苷酸位点多态性。11719位点突变可能是中国人存在的单核苷酸位点多态性。

结肠黏膜vimentin降解在溃疡性结肠炎发病机制中的作用

背景溃疡性结肠炎发病率呈逐年上升趋势,但发病机制不明,众多基于基因水平的研究不能完全阐明蛋白质水平的变化,差异蛋白质组学是从蛋白质水平研究溃疡性结肠炎发病机制的新方法。目的运用蛋白组学方法探讨溃疡性结肠炎的发病机制。方法选取12例活动期溃疡性结肠炎患者及12例正常肠黏膜为研究对象,提取组织蛋白做2-D电泳,银染,胶图分析找差异点,质谱鉴定蛋白质,最后Western-blot验证差异点。结果差异蛋白组学共鉴定出蛋白质30个(上调16个,下调14个),成功选取其中的vimentin,并得到Western-blot方法的验证。结论溃疡性结肠炎患者肠黏膜存在vimentin降解片段蛋白水平的高表达,这种改变可能在在溃疡性结肠炎的发病机制中起重要作用。

Jo-1蛋白在大肠杆菌中的克隆与表达

构建在E.coli中表达人组氨酰-tRNA合成酶(Jo-1)的质粒。用RT-PCR从人胎盘组织总RNA中获得编码人组氨酰-tRNA合成酶(Jo-1)基因的全序列,将此片段定向克隆到麦芽糖融合蛋白表达载体pMAL-c中,诱导表达获得Jo-1的可溶性融合蛋白,并通过亲和层析予以纯化。结果免疫印迹实验表明,表达的融合蛋白能与含有抗Jo-1抗体的病人血清发生特异反应,重组融合蛋白具有Jo-1蛋白的免疫原性和免疫特异性。

外周血基因整体表达分析技术实时监测心脏移植免疫排斥状态的初步研究

目的建立外周血单核细胞检测心脏移植免疫排斥相关基因的研究方法，探讨基因在心脏移植术后免疫排斥监测中的临床价值。方法应用实时荧光定量RT-PCR技术，以SYBR Green Ⅰ作荧光染料，GAPDH作内对照，观察心脏移植术后不同时期病人外周血单个核细胞中与免疫排斥相关基因的mRNA表达水平，并与病人术前基因表达水平对照。结果使用Primer Premier 5．0和Primer Express 3．0软件成功进行引物设计，并建立稳定检测的RT-PCR方法。心脏移植术前外周血单个核细胞16个与免疫排斥相关候选基因的mRNA的相对表达量与正常对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。1TGA4、FKB、IL1R2、PF4、ITGAM、TGFB1、RHOU7种基因可能与机体免疫排斥状态有更大相关性。结论成功建立了荧光定量RT-PCR方法，检测外周血单个核细胞基因mRNA表达水平简便快速、特异、重复性好、可信度高具有良好的检测心脏移植早期排斥反应的应用前景。

荧光定量RT—PCR实时检测心脏移植患者外周血单核细胞16种免疫排斥基因整体表达变化的初步研究

目的探讨外周血单核细胞免疫排斥相关基因的检测对心脏移植排斥反应的诊断价值。方法采取心脏移植术患者外周血，应用实时荧光定量RT-PCR技术，观察心脏移植术后不同时期外周血单个核细胞中与免疫排斥相关多个基因系统的mRNA表达水平，并与术前和正常组的基因表达水平对照。结果心脏移植术前外周血单个核细胞16种与免疫排斥相关候选基因的mRNA的相对表达量与正常对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。初步筛选出与机体免疫排斥状态有更大相关性的7种基因，术后3个月内心脏功能稳定组较术前和正常对照组ITGA4、FKB、ILlR-2mRNA表达水平上调，PF4、ITGAM、TGFβ1、RHOU表达水平降低。这与临床观察的移植术后1～3个月免疫排斥概率最大相吻合。结论检测外周血单个核细胞基因mRNA表达水平的荧光定量RT—PCR方法简便快速、特异、重复性好、可信度高，但在检测心脏移植排斥反应方面值得进一步深入研究。

传染性非典型肺炎患者不同病程粪便标本中SARS-CoV的分离与鉴定

目的:从粪便标本中分离并鉴定SARS-CoV. 方法:粪便浸出液接种Vero-E6细胞,盲传至出现明显的细胞病变效应(CPE),并能稳定传代.采用电镜法和RT- PCR技术鉴定细胞培养物中的SARS-CoV(本实验均在BSL-3实验室完成). 结果:大部分样本用Vero-E6细胞盲传3代后发现明显的CPE,并能稳定传代.电镜负染检查,出现CPE的细胞可查见病毒颗粒;培养物上清RT-PCR扩增均为阳性.粪便样本直接用RT-PCR检测,阳性率仅为50%,细胞培养的检出率为73%. 结论:采用细胞培养结合RT-PCR技术检测粪便标本SARS- CoV比粪便标本直接RT-PCR的阳性率高.

数字PCR技术在布鲁菌病疗效判定中的应用价值

目的探讨数字PCR技术检测血清布鲁菌含量对疗效判定的应用价值。方法选择2015年1月至2016年5月首都医科大学附属北京地坛医院收治的15例布鲁菌病恢复期患者,即布鲁菌病急性期患者经过规范抗生素治疗6周后仍有布鲁菌病相关临床症状的患者为研究对象,用数字PCR技术检测血清布鲁菌含量,并同时做血培养和布鲁菌凝集试验,比较三种试验结果。结果 15例患者布鲁菌病恢复期患者血清凝集试验结果均为阳性,14例患者未在血清中检测出布鲁菌DNA,仅有1例患者血清布鲁菌DNA定量检测结果为阳性,并且血培养阳性。剩余14例患者血培养阴性。结论数字PCR技术为发现和确诊布鲁菌病现症感染病例提供了快速、快捷的方法,但仍需大样本进行验证。

科学发展中的悖论——评王元、泰斯塔先生的演讲

听了王元和泰斯塔两位先生的演讲很受启发，两位报告人讲得内容可以说是相互补充，相得益彰。特别是王元先生提出了一个非常严肃的问题，那就是对中国经济能否持续增长的忧虑，这是非常严重的问题。这个问题说起来那么严重，

焦磷酸测序和MassARRAY定量检测DNA甲基化在年龄推断中的差异

目的利用MassARRAY和焦磷酸测序两种方法检测的DNA甲基化数据在年龄推断中的差异,探讨两种检测方法的年龄推断计算方法。方法应用MassARRAY和焦磷酸测序,分别对65份和62份外周血样本的9个CpG位点的甲基化水平进行测定,运用多元线性回归模型预测年龄,对比预测年龄与实际年龄之间的差异;对比Z-score转化前后两种方法之间的年龄预测差异。结果MassARRAY法,65样本集数据Z-score转化前,平均绝对误差(MAD)=2.49岁,Z-score转化后,MAD=2.44岁;62样本集数据Z-score转化前,MAD=3.36岁,Z-score转化后,MAD=3.42岁。焦磷酸测序法,65样本集数据Z-score转化前,MAD=4.20岁,Z-score转化后,MAD=2.76岁;62样本集数据Z-score转化前,MAD=3.92岁,Z-score转化后,MAD=3.63岁。结论Zscore转化方法能够有效的消除MassARRAY和焦磷酸测序数据之间的系统性批次效应;MassARRAY数据可以直接使用进行样本的年龄预测;使用焦磷酸测序数据进行年龄预测结果误差较大,但可以通过多样本积累进行Z-score转化之后预测年龄。