兔激素性股骨头坏死模型骨髓间充质干细胞的培养

背景:自体干细胞移植治疗已经成为目前组织工程和再生医学研究的重点。但对于兔激素性股骨头坏死模型自体骨髓移植中骨髓间充质干细胞的体外培养研究鲜有报道。目的:抽提兔激素性股骨头坏死模型的骨髓间充质干细胞,并行体外扩增和表型鉴定。方法:取成年大耳白兔10只,对照组2只不给任何药物;模型组8只每周2次臀肌注射甲基强的松龙8mg/kg制备兔激素性股骨头坏死模型。体外分离培养骨髓间充质干细胞;应用流式细胞仪分别检测第4代骨髓间充质干细胞表面抗原CD29、CD34、CD44的表达。结果与结论:经过大量激素作用后,MR灌注成像及病理切片结果显示兔激素性股骨头坏死模型组造模成功。模型组原代骨髓间充质干细胞4h内仅有少量细胞贴壁,12d左右细胞铺满瓶底的85%-90%,传代培养生长良好;第4代骨髓间充质干细胞生长曲线呈典型S型,第4-7天处于高速增殖期,与对照组生长曲线相近;经流式细胞术鉴定,第4代骨髓间充质干细胞表面抗原CD34表达呈阴性,CD29,CD44表达呈阳性,证明所培养的细胞为较纯的骨髓间充质干细胞。提示兔激素性股骨头坏死模型的骨髓间充质干细胞具有较强的生长和增殖能力,可用于干细胞标记及进一步自体移植治疗。

新型雌激素受体ER-α36在新生与成年大鼠海马和皮层中表达的比较

ER-α36是一种新型雌激素受体亚型,广泛分布于乳腺、子宫、消化道、呼吸道等组织和细胞中。本文旨在研究ER-α36在中枢神经系统中的表达和分布情况。采用免疫细胞/组织化学方法和蛋白质免疫印迹杂交比较ER-α36在新生(1日龄)与成年(12周龄)Sprague-Dawley(SD)大鼠海马及皮层区的表达和分布情况。研究显示,ER-α36在成年大鼠海马及皮层区均有表达,主要分布于锥体神经元。ER-α36在新生大鼠海马和皮层神经元中均定位于细胞膜。新生大鼠皮层神经元ER-α36蛋白表达高于海马,而成年大鼠皮层神经元ER-α36蛋白表达低于海马。与新生大鼠相比较,成年大鼠海马和皮层神经元ER-α36表达均显著提高。以上结果提示,ER-α36参与介导神经元膜雌激素信号通路的调节,且在大鼠出生后海马及皮层发育中发挥着重要作用。因此,ER-α36可能为学习记忆、神经系统退行性疾病等的防治提供潜在的药物靶点。

ER-α36与Akt在PC12细胞缺糖应激反应中的关系

ER-α36是一种分子量为36kDa的雌激素受体(estrogen receptor,ER)新亚型,其主要通过介导膜雌激素信号通路参与多种细胞生理、病理等过程。本文利用RNA干扰技术敲低大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株PC12的ER-α36基因,研究ER-α36与Akt在神经细胞缺糖损伤中的关系。采用MTT、Western blot和Annexin V/PI双染等方法,观察了ER-α36在细胞缺糖应激反应中的作用。结果显示:(1)随着缺糖损伤时间的增加,PC12细胞的存活率逐渐降低,6h后其细胞存活率与对照组相比具有极显著性差异(P<0.01),凋亡率升高,6h后具有极显著性差异(P<0.01);葡萄糖转运蛋白Glut-4表达水平显著降低(P<0.01);(2)缺糖损伤3h时,ER-α36明显减少(P<0.01),但随后逐渐增加;缺糖可引起抗凋亡蛋白Akt磷酸化水平先升高后降低(P<0.05);加入PI3K抑制剂LY294002,ER-α36表达降低,Akt的激活被抑制;(3)敲低ER-α36后缺糖处理,细胞凋亡率高于野生型,具有极显著性差异(P<0.01);敲低ER-α36的细胞缺糖导致的Akt激活减弱,Caspase-3表达增多。以上结果表明,在PC12细胞的缺糖应激反应中,Akt激活情况可能与ER-α36相关,两者共同参与缺糖损伤应激调控。

雌激素受体ERα36基因敲低影响PC12细胞分化相关蛋白的表达

ERα36作为一种新近鉴定出的雌激素受体亚型,广泛表达在多种组织、细胞中,参与肿瘤细胞的生长、增殖、分化过程,但其在神经系统中的表达及其功能尚不明确。本文以PC12高分化(PC12D)细胞和PC12未分化(PC12unD)细胞为研究对象,利用ERα36-shRNA质粒转染细胞建立ERα36敲低细胞模型(PC12D-36L, PC12unD-36L),通过免疫细胞荧光法、Westernblot观察神经干细胞特征标志蛋白Nestin、β-微管蛋白Ⅲ (β-tubulinIII)和神经特异性核蛋白Neu-N的表达变化。结果显示,PC12D和PC12unD细胞内均有ERα36的表达;与PC12D细胞相比,PC12unD细胞中Nestin表达较高,β-tubulinIII表达较低。敲低ERα36可降低PC12unD细胞的Nestin的表达水平,而升高β-tubulinIII和Neu-N的表达水平;敲低ERα36对PC12D细胞的上述三种蛋白的调节作用则相反。以上结果表明,敲低ERα36可抑制高分化细胞分化,促使未分化细胞分化,提示ERα36可能参与神经细胞分化的双重调控作用。

Caveolin-1介导张氏肝细胞X射线诱导的DNA损伤修复的信号转导（英文）

已知Caveolin-1(Cav-1)是胞膜窖的重要结构蛋白,通过介导多条信号转导途径广泛参与细胞的生理和病理过程。引人关注的是,Cav-1的表达通常具有组织特异性和功能多样性,在乳腺癌、肝癌等肿瘤的发生和发展中起到重要的调节作用。近年研究表明,Cav-1参与胰腺癌细胞放射引起的DNA损伤修复过程,从而对放疗产生抵抗。但其是否对其它种类细胞的DNA损伤也存在类似作用并不清楚。本文采用RNA干扰技术建立稳定敲低Cav-1表达的张氏肝细胞系(Chang liver cell line,CHL),即CHL-CAV7细胞,旨在探讨Cav-1在CHL细胞DNA损伤修复中的作用。Western blot结果显示,与转染非靶向质粒的对照细胞(CHL-C细胞)相比,CHL-CAV7细胞Cav-1蛋白表达水平被抑制了60%。采用X射线对细胞进行辐射,并对细胞的存活能力及DNA损伤修复相关蛋白的表达水平进行检测。克隆形成实验结果显示,在8和10 Gy X射线照射下,CHL-CAV7细胞的存活能力相对CHL-C细胞明显降低。Western blot结果显示,与CHL-C细胞相比,CHL-CAV7细胞照射后γH2AX蛋白表达量增加,p-ATM、DNA依赖蛋白激酶催化亚单位(DNA-dependent protein kinase,catalytic subunit,DNA-PKcs)和p53蛋白表达量减少。免疫荧光分析结果显示,CHL-CAV7细胞Mdm2和Cav-1的共定位相对CHL-C细胞显著减少。上述结果提示,Cav-1表达下降后,CHL细胞DNA的损伤加重,这可能与Cav-1与Mdm2相互作用减少,进而导致p53的降解增加有关。本文为了解肝细胞的放疗抵抗作用机制提供了一定的实验依据。

小剂量咪达唑仑静脉维持治疗儿童癫痫频繁发作的疗效观察

目的观察小剂量咪达唑仑静脉维持治疗癫瘌频繁发作的疗效及安全性。方法对26例癫痫频繁发作的患儿反复给予肛注水合氯醛、肌注鲁米那、静推安定，仍有抽搐发作，建立咪达唑仑专用通道，给于小剂量咪达唑仑静脉维持直到无抽搐发作。在静脉维持过程中予以心电、血压监测，观察意识状态及呼吸情况。结果本组患儿中最小年龄3个月，最大年龄4．5岁。咪达唑仑控制发作的剂量范围1～3μg/（kg·min）。发作1h内控制者17例；2～3h控制者7例；治疗3h仍未控制者2例。所有病例均未发现血压、心率、血氧饱和度和呼吸状态的变化，亦未出现肝肾功能异常。结论小剂量咪达唑仑静脉维持治疗癫痫频繁发作，疗效确切，安全可靠。

盐霉素对人肺腺癌A549细胞株生物学特性的影响

目的观察盐霉素对人肺腺癌A549细胞株生物学特性的影响。方法无血清培养A549干细胞，进行划痕、Transwell和细胞计数实验，运用流式细胞仪检测细胞侧群比例，采用Westernblot检测盐霉素对转录因子Oct4表达的影响。结果空白对照组、30mg／L、60mg／L盐霉素组迁移距离分别为70、40、10um，侵袭细胞数目分别为（32．3±2．5）、（21．4±1．8）、（1．3±0．3）个／HP，细胞存活率分别为98％、74％、50％；60mg／L组、30mg／L组、空白对照组、利血平阻断组侧群比例分别为3．4％、10．5％、12．5％、0．7％。Westernblot示随着盐霉索浓度增加，Oct4的表达量下降。结论盐霉素对人肺腺癌细胞株A549生物学特性具有重要影响。

Caveolin-1与葡萄糖转运蛋白4共同参与PC12细胞缺糖应激调节(英文)

近年研究表明,作为构成胞膜窖(Caveolae)主要的组分之一,窖蛋白-1(caveolin-1,Cav-1)除了在细胞胆固醇平衡、信号转导和整合以及细胞生长等过程中起重要作用外,还参与细胞营养改变的神经元代谢调节过程。本文旨在探讨Cav-1和葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4,GLUT4)在神经细胞内营养环境改变时的功能变化和关系。采用Western blot和激光共聚焦法观察了两种蛋白在PC12细胞葡萄糖剥夺(glucose deprivation,GD)前后的表达水平与分布,发现GD 6 h后能诱导PC12细胞内Cav-1和GLUT4蛋白表达水平增加,CCK检测和流式细胞术结果显示细胞活力下降、细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)升高、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)下降。采用si RNA技术敲低Cav-1基因后,GD组PC12细胞死亡率和[Ca2+]i进一步升高,MMP进一步下降;Cav-1敲低细胞系和甲基化β环化糊精(methylated-β-Cyclodextrin,M-β-CD)法处理实验组中,Cav-1和GLUT4蛋白表达均下降。此外还发现,GD可促进GLUT4从细胞质转位到细胞膜。结果提示,Cav-1可能通过调节GLUT4在GD情况下发挥神经保护作用。