中药大品种质量标准提升研究的思路与实践

中药大品种质量标准提升研究是中药大品种二次开发研究的重要内容,通过质量标准提升研究,建立可溯源的、与临床疗效高度关联的全程质量控制体系和质量标准,并为中药质量控制提供可参照的模式和研究范例。本文以疏风解毒胶囊和元胡止痛滴丸为例,论述中药大品种质量标准提升研究的思路、方法与研究实践。从质量控制指标的发现和确定、样品测定和质量标准的确定角度论述了中药大品种质量标准提升研究的路径和方法。最后,结合研究实践,建立了中药质量标准研究新的集成模式。

基于有效性完整表达的白芍质量标志物研究

目的:基于中药质量标志物(Q-marker)有效性原则,采用“性-效-物”三元论研究思路,从药性(味)和药效角度揭示白芍Q-marker。方法:采用液相色谱-质谱联用法(LC-MS),解析白芍、炒白芍、赤芍化学物质组;在此基础上,通过分子对接方法,选择白芍中各结构类型代表化合物为配体小分子,通过与苦、酸味受体进行分子对接实验,预测白芍潜在药性(味)物质基础;采用网络药理学方法,通过SwissTargetPrediction、中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)等数据库预测化合物潜在作用靶点,并进行生物信息学分析,构建化合物-靶点-信号通路-药理作用-功效网络,进一步以体外抗炎药效筛选模型,验证白芍及关键化合物的抗炎药效作用,明晰基于药效的白芍物质基础,进而基于有效性完整表达结果确定白芍Q-marker。结果:共解析出白芍中42个成分、炒白芍中41个成分、赤芍中34个成分。其中单萜及其苷类化合物可能为白芍最主要的苦味物质基础,带有没食子酰基的鞣质类化合物可能为白芍最主要的酸味物质基础。网络药理学结果发现,白芍中17个成分通过作用于191个潜在靶点干预了165条相关通路,可发挥促进骨髓造血功能、抑制子宫收缩、抗炎、镇痛、保肝、抗高血压和抑制汗腺分泌等作用;验证实验表明,白芍中8个主要成分可通过下调白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α和一氧化氮等炎症因子的表达发挥抗炎作用。结论:初步确定芍药苷、芍药内酯苷、氧化芍药苷、没食子酰芍药苷、苯甲酰芍药苷、儿茶素、五没食子酰葡萄糖及没食子酸为基于有效性完整表达的白芍Q-marker。

中药防治痔病作用机制研究进展

痔病是以肛门黏膜静脉丛发生曲张为主要特征的慢性疾病,随着病程延长会伴有肿胀疼痛、黏液流出等病理表现,临床上表现为患处瘙痒、作痛、便血等。手术是治疗痔疮的有效方法之一,能够缓解病人痛苦,根治性较高。但手术费用昂贵,术后容易出现出血、肛门狭窄等不适。中药可通过多靶点、多途径发挥治疗痔病的作用,其作用机制主要是调控机体内外炎症反应、减轻脂质过氧化反应、抑制基质金属蛋白酶表达、调控血管生成和上调纤维蛋白的表达等。目前,对痔病的机制研究正逐渐深化,但尚未系统性阐述痔病发病及中药改善的作用机制,综述相关研究对防治痔病具有十分重要的意义。

基于“性-效-物”的小儿消积止咳口服液质量标志物研究

目的:基于“性-效-物”理论研究原则,确定小儿消积止咳口服液(XEXJ)中的质量标志物(Qmarker)。方法:通过分子对接实验确定化合物的药性(味),运用Schrodinger 2020 Maestro软件进行酸、甘、苦、辛药味受体与相应化合物的分子对接。通过网络药理学和体外受体实验确定化合物的药效,利用数据库获取并整合得到化合物和疾病共有靶点,将其输入STRING网络分析平台筛选出核心靶点并进行生物信息学分析,运用Cytoscape软件构建网络图;通过G蛋白偶联受体和酶活法检测代表性成分对胆碱能受体毒蕈碱3 (CHRM3)、肾上腺素受体β2 (ADRB2)、ADRA1A、环氧合酶-2 (COX-2)受体的作用。结果:分子对接结果表明,有机酸类和香豆素类可能是XEXJ的酸味物质基础;糖类和简单苯丙素类可能是其甘味物质基础;木脂素、苯乙醇苷、黄酮、三萜类等成分可能是其苦味物质基础;生物碱类及部分黄酮类可能是其辛味物质基础。网络药理学分析发现,XEXJ可能通过作用于神经活性配体-受体相互作用、5-羟色胺能突触、环鸟苷酸-蛋白激酶G (cGMP-PKG)信号通路、钙信号通路等90条通路发挥促消化、止咳和解热抗炎功效。功能受体实验结果表明,XEXJ清热肃肺、消积止咳的作用机制可能与激活CHRM3、ADRB2受体,抑制ADRA1A、COX-2受体有关。综上,初步确定其Q-marker为橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷、去甲基川陈皮素、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基-7-O-β-D-龙胆双糖苷、槲皮苷、异槲皮苷、金丝桃苷、山柰酚、连翘酯苷A、连翘酯苷E、连翘脂素、(+)-松脂素-β-D-吡喃葡萄糖苷、桔梗皂苷D、3,29-二苯甲酰栝楼仁三醇、辛弗林、槟榔碱、枸橼酸、绿原酸。结论:基于“性-效-物”理论,采用分子对接、网络药理学和受体实验初步确定了XEXJ发挥药效作用的Q-marker,为其质量控制和作用机制研究提供参考依据。

基于消肿定痛功效的三七粉质量标志物研究

目的探究三七粉发挥消肿定痛功效的质量标志物。方法首先,采用小鼠醋酸扭体实验,将ICR小鼠随机分成模型对照组、阳性对照阿司匹林组(0.12 g·kg^(-1))、三七粉低(1.1 g·kg^(-1))、中(2.2 g·kg^(-1))、高(4.4 g·kg^(-1))剂量组、三七总皂苷低(0.25 g·kg^(-1))、中(0.5 g·kg^(-1))、高(1.0 g·kg^(-1))剂量组,连续给药3天每日1次,第3天给药1 h后腹腔注射1%醋酸溶液,记录15 min内扭体次数。进一步采用LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7炎症模型,探讨三七粉中的三七总皂苷及14个代表性单体成分对细胞上清液中NO、TNF-α和IL-6的含量影响。结果实验表明,与模型组比较,三七粉及三七总皂苷中、高剂量组均能显著减少扭体反应次数(P<0.05,P<0.01);三七总皂苷及14个化合物均能显著降低细胞上清液中NO、TNF-α、IL-6含量(P<0.05)。结论三七粉具有良好的抗炎、镇痛作用,其发挥消肿定痛的药效物质基础可能为三七皂苷R1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rg2、人参皂苷Rh1、人参皂苷Rd、人参皂苷Rg3、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷F2、人参皂苷Rk1、槲皮素、三七素。

三七粉质量标志物研究

三七为常用中药材,具有散瘀、止血,消肿定痛的功效。三七粉作为三七市场应用的主要形式之一,市场逐年增大。现行标准难以评价和控制三七粉“多重功效”的质量特点。本课题组在系统辨识三七粉化学物质组及其传递规律的基础上,采用网络药理学和体内、体外模型,研究并阐明了三七粉的活血、心肌与血管保护、止血以及消肿定痛的药效物质基础;进一步结合成分的特有性分析,确定了三七粉的质量标志物;在此基础上,建立了基于质量标志物的三七粉的指纹图谱及“一测多评”的多指标含量测定方法,为建立三七粉整体质量控制方法提供了理论与实验证据。

基于活血作用的三七粉质量标志物研究

目的探索三七粉活血作用的质量标志物。方法采集家兔血浆,采用体外凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(FIB)检测试剂盒观察三七粉主要成分对凝血系统的影响;收集家兔富含血小板血浆,以二磷酸腺苷(ADP)诱导血小板聚集,观察三七粉主要成分对血小板聚集率的影响;取家兔主动脉条,置于体外组织灌流系统中,以去氧肾上腺素诱导血管条收缩,观察三七粉主要成分对血管平滑肌收缩功能的影响。结果以蒸馏水溶解的三七总皂苷(PNS),与水溶剂组比较,可显著延长TT、APTT、PT,降低FIB含量(P<0.05、P<0.01),降低ADP诱导的血小板聚集率(P<0.01)。以5%二甲基亚砜(DMSO)溶解的单体成分,与5%DMSO溶剂组比较,人参皂苷F_(2)、人参皂苷Rb_(2)、人参皂苷Rb_(3)、人参皂苷Rk1、三七皂苷R1、人参皂苷Rg_(2),可显著延长TT(P<0.05,P<0.01);人参皂苷F_(2)、人参皂苷Rd、人参皂苷Rb_(2)、人参皂苷Rg_(2)、人参皂苷Rb1、槲皮素可延长APTT(P<0.05);人参皂苷Re、槲皮素、人参皂苷F_(2)、人参皂苷Rb_(3),可显著延长PT(P<0.05);槲皮素、人参皂苷F_(2)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rg_(3)、人参皂苷Rb_(2)、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb_(3)、三七皂苷R1、人参皂苷Rg_(2)可显著降低血浆FIB含量(P<0.05);人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rh1、人参皂苷Rb_(2)、人参皂苷Rg_(2)、三七皂苷R1、人参皂苷F_(2)、人参皂苷Rg_(3)、人参皂苷Rd和人参皂苷Rb1可显著降低ADP诱导的血小板聚集(P<0.05);人参皂苷Rg_(3)、人参皂苷Rh1、人参皂苷Rd、三七皂苷R1、人参皂苷Rk1和人参皂苷Rg_(2)可明显扩张血管动脉条(P<0.05,P<0.01)。结论三七粉活血作用表现在抗凝、抗血小板聚集、扩血管等方面,人参皂苷F_(2)、人参皂苷Rg_(2)、人参皂苷Rg_(3)、三七皂苷R1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb_(2)、人参皂苷Rb_(3)、人参皂苷Rd、人参皂苷Rg_(1)、槲皮素等可能为三七活血作用的物质基础,可作为三七粉活血作用的质量标志物进一步研究。

基于止血作用的三七粉质量标志物研究

目的探索三七粉止血作用的质量标志物。方法兔血浆中分别加入三七素样品,采用凝血记录仪,依据试剂盒说明书,测定凝血酶时间(TT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(FIB);在兔富含血小板血浆中加入三七素药物样品后,再加入诱导剂二磷酸腺苷(ADP),采用比浊法,测定血小板聚集率;取离体兔主动脉条,体外组织灌流,以去氧肾上腺素诱导动脉条收缩,分别加入三七素、人参皂苷Rb_(2),观察血管条张力变化值。结果三七素500-1000μM可显著降低血浆TT、APTT;100-1000μM显著缩短血浆PT;50-2000μM可显著增加FIB含量;1000-2000μM时可显著增加血小板聚集率;三七素处于1μM浓度时,人参皂苷Rb_(2)在25μM浓度时可显著收缩血管动脉条。结论三七素是三七促凝、促血小板聚集,发挥止血作用的物质基础;三七素、人参皂苷Rb_(2)是三七缩血管发挥止血作用的物质基础。

基于心血管保护作用的三七粉质量标志物研究

目的探索三七粉心血管保护作用的质量标志物。方法采用CoCl_(2)制备心肌细胞(H9C_(2))损伤模型,观察三七粉主要成分对心肌细胞成活率、LDH、MDA、SOD的影响;采用H_(2)O_(2)制备人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤模型,观察三七粉中主要成分对内皮细胞存活率、LDH、ACP的影响。结果人参皂苷Rb_(2)、人参皂苷Rb_(3)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rg_(3)、人参皂苷Re、人参皂苷Rd、槲皮素、人参皂苷F_(2)、人参皂苷Rk_(1)、人参皂苷Rh_(1)、三七素能够显著增加H9C_(2)细胞存活率(P<0.05,P<0.01),多个成分能够减少LDH、MDA,增加SOD;三七皂苷R1、人参皂苷Rb_(2)、人参皂苷Rb_(3)、槲皮素、人参皂苷F_(2)、人参皂苷Rk_(1)、人参皂苷Rh_(1)、三七素可显著提高HUVEC细胞存活率(P<0.05,P<0.01),多个成分能够减少LDH、ACP。结论三七粉发挥心血管保护作用的药效物质基础包括多种皂苷类成分、三七素,以及黄酮类成分槲皮素。

基于质量标志物的三七粉质量标准提升研究

目的基于三七粉质量标志物的研究结果,完善三七粉质量标准,为其质量标准的修订提供科学依据。方法利用高效液相色谱技术,结合“一测多评”等分析方法,对三七粉质量标志物进行含量测定,对不同厂家三七粉及不同商品规格原料药材进行质量标志物差异分析。建立指纹图谱,采用新的相似度计算模型-等同系数法和模式识别对三七粉及原料药材进行质量一致性评价。结果不同厂家三七粉中三七素含量存在差异,收集到的白云山和黄中药三七粉中三七素含量均高于其余厂家,提示三七素可能为白云山和黄中药三七粉的优势指标。原料药材中三七素和皂苷含量与头数不具相关性,但与季节、部位具有相关性。皂苷方面表现为冬三七>春三七,芦头>主根>须根>筋条;三七素方面表现为冬三七>春三七,须根>芦头>筋条>主根。应用等同系数法计算指纹图谱相似度实现了不同厂家三七粉的区分,进一步结合化学模式识别实现了不同规格原料药材的区分。结论建立的含量测定及指纹图谱方法稳定可行,专属性强,对于控制三七粉质量具有显著意义。与2020年版《中国药典》相比,该文修订了三七粉含量测定项,增加了HPLC指纹图谱项,可为三七粉的质量标准提升及其原料药材的选择提供科学依据。

基于一测多评法对延胡索中生物碱类成分的质量控制研究

目的建立同时测定延胡索中原阿片碱、黄连碱、黄藤素、去氢延胡索甲素、D-四氢药根碱、延胡索乙素和延胡索甲素7种生物碱类成分的HPLC方法,在此基础上,建立一测多评法的方法学考察方式,验证该方法在延胡索质量控制中应用的可行性和技术适用性。方法以延胡索所含的7种成分为指标成分,采用2种校正方法分别建立各成分与延胡索乙素的相对校正因子(fk/s),计算各成分的量,实现一测多评;同时采用外标法测定延胡索中该7种成分的量,并比较2种一测多评法所得计算值与实测值的差异,以验证一测多评法的准确性和可行性。结果建立了延胡索中7种生物碱类成分一测多评法方法学的考察模式;不同的色谱柱和仪器一测多评法的计算值与外标法实测值之间没有显著性差异。结论同时测定延胡索中原阿片碱、黄连碱、黄藤素、去氢延胡索甲素、D-四氢药根碱、延胡索乙素和延胡索甲素7种生物碱的一测多评法可靠,结果准确,可用于延胡索药材的质量控制。

基于多指标综合评价胡黄连提取工艺研究

[目的]]通过正交设计筛选胡黄连的提取工艺,优化出最佳工艺参数。[方法]以提取液中胡黄连苷Ⅰ、Ⅱ转移率及出膏率的加和进行综合评价,采用L9(34)正交实验优选最佳提取工艺。[结果]胡黄连最佳提取工艺为原药材最粗粉浸泡24 h,以每分钟1.5 mL的流速渗漉,收集16倍量的渗漉液。[结论]优选的胡黄连提取工艺合理可行,为实际生产提供参考。

复方灯盏头痛片提取物的活性筛选

[目的]对不同工艺制备的复方灯盏头痛片提取物进行药效学比较研究。[方法]采用小鼠水浴甩尾反应实验、醋酸致小鼠扭体实验、硝酸甘油致小鼠偏头痛模型以及利血平低5-HT化小鼠偏头痛模型,对不同提取工艺所得复方提取物进行药效学筛选。[结果]3种工艺提取物均能有效提高甩尾潜伏期,抑制小鼠的扭体反应,具有明显的镇痛作用,其中以醇提物组效果最为显著;在硝酸甘油致小鼠偏头痛实验中,醇提物高低剂量组均能明显减少小鼠挠头次数,水提物及醇水双提物只有高剂量组可明显减少小鼠挠头次数(P<0.05);利血平低5-HT化小鼠偏头痛模型实验中,3种提取物均可提高脑组织及血液中5-HT的含量,其中以醇提物提升效果最为显著。[结论]相同剂量的复方醇提物药效活性优于水提物及醇水双提物,醇提工艺为其较优提取工艺,可作进一步研究和开发。

基于质量传递与溯源的中药质量标志物(Q-Marker)的发现策略及应用

中药形成产业链长且行业跨度大,横跨一、二、三产业,药物成分经过多环节的传递与变化,最终体内的效应成分与原料药中原有成分的构成已大不相同,因此,中药质量控制应着眼于中药形成的全过程,而中药质量标志物(quality marker,Q-Marker)的应用价值在于建立全程质量控制体系。针对目前中药质量研究存在的问题,提出"以中药Q-Marker为核心,从质量要素的传递与溯源"的基本研究模式,以中药形成的全过程及质量要素的传递规律为基础,为经典名方的质量控制及中药大品种质量标准的提升提供了新的思路和视角,有利于提升中药产品质量,为中药标准化建设提供新的思路,促进中药产业的健康发展。

中药五味药性理论的现代研究进展

五味作为中药药性理论的核心内容,近年来有许多学者从不同方面对中药五味理论进行一系列的研究。由于传统中医药理论与现代药学思维方式和认识途径存在差异,导致人们对于中药五味药性理论的认识不尽相同。从中药五味的源流,哲学思想对五味属性的推演以及四气、归经、升降浮沉、功效与五味的联系对中药五味药性理论的脉络进行梳理,进一步从真实滋味和功效属性两方面对中药五味药性的现代研究进行探讨,通过探究五味的真实滋味的标定及五味物质基础与功效的关联关系,对其进行客观的描述,以期寻求一种更加科学化的现代方法阐明中药五味药性理论。

三七粉血清药物化学研究

目的 采用超高效色谱-电喷雾/四级杆飞行时间串联质谱联用(UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS)技术对三七粉中主要化学成分和血中移行成分进行准确快速鉴定。方法 采用Waters Xevo G2 Q-Tof高分辨质谱、Waters Acquity UPLC液相色谱系统、Waters Acquity UPLC?BEH C18色谱柱(2.1×100 mm,1.7μm),以0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾(ESI)离子源,在正、负离子模式下采集数据,通过与对照品的保留时间及质谱信息对比,并结合文献报道及质谱数据库中相同成分或同类成分的精确分子质量、质谱裂解规律进行匹配,对三七粉中化学成分和血中移行成分进行快速准确识别。结果三七粉中共鉴定得到54个化学成分,包括原人参二醇皂苷类36个,原人参三醇皂苷类14个,黄酮类1个,糖类1个,氨基酸类1个和酯类化合物1个。在给药大鼠血浆中共鉴定得到18个三七粉相关的外源性化合物,包括14个吸收原型药物成分和4个代谢物。结论 利用建立的定性分析方法快速准确地识别三七粉中主要化学成分和血中移行成分。明确了三七粉体外化学成分组-体内血行成分组的药效物质基础传递-转化过程,为三七粉的质量标志物确定与质量控制提供依据,也为其深入分子作用机制研究奠定基础。

中药有效成分治疗脓毒症的研究进展

脓毒症是指由感染引起的全身性炎症反应,是严重感染、重度创伤或烧伤、外科手术后常见的并发症,患病率高、病死率高,没有特效药物,是世界性医学难题。近年来的临床和实验研究发现,多个中药单体成分在治疗脓毒症方面有一定的效果。将治疗脓毒症的有效成分根据其化学结构进行分类,综述近年来中药有效成分在治疗脓毒症方面的研究进展,为进一步研究与开发治疗脓毒症的新药提供思路和参考。

三七的研究进展及其质量标志物预测分析

三七是我国常用的大宗中药材,其中化学成分类型丰富,包括三萜皂苷、黄酮、氨基酸、多糖、挥发油等类成分,传统认为三萜皂苷类成分为其主要药效成分。从化学成分和药理作用等几个方面对三七的研究现状进行综述,在此基础上,根据中药质量标志物(quality marker,Q-Marker)理论,探究人参属药用植物亲缘关系,结合三七生源途径、传统功效、传统药性等研究对三七Q-Marker进行预测分析,预测三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg2、人参皂苷Rd、三七素可作为Q-Marker的选择,以期为三七的质量控制和新标准的制定提供科学依据。

中药喷雾剂的研究进展及在产品开发中的应用

喷雾剂以其独特的给药形式,极大地方便了患者的口腔、皮肤及腔道黏膜用药,在治疗局部、全身性疾病等方面有着广泛的临床应用。中药喷雾剂将传统医药和现代制剂工艺、技术相结合,在近年来发展迅速。中药喷雾剂产品众多,但从整体而言,产品的技术水平不高,在处方设计、质量控制等方面存在诸多问题。通过查阅近年来喷雾剂的相关文献,从中药喷雾剂的产品开发现状、喷雾剂的制备工艺和质量控制等方面进行综述,以期为中药喷雾剂的研究提供新的思路,为更好地开发中药喷雾剂产品提供参考。

中药治疗非小细胞肺癌的临床应用及作用机制研究进展

非小细胞肺癌是威胁人类健康的重大疾病之一,目前尚缺乏根本的治疗方法。中药因具有整体治疗、有效提高患者生存质量和生存期等显著特点,在临床上治疗非小细胞肺癌,无论是与手术治疗、化学药物治疗、放射性治疗等联合使用,还是晚期非小细胞肺癌的维持治疗等方面均得到了广泛的应用。对近年来中药治疗非小细胞肺癌的临床应用及其抗肿瘤作用机制进行了概述,以期为中药治疗肿瘤的临床应用和中药抗癌新药的研发提供借鉴。