基于代谢组学探究豨芍方治疗神经性病理性疼痛的镇痛机制

目的:通过代谢组学和网络药理学探究豨芍方(Xi Shao Formula,XSF)治疗神经性疼痛(neuropathic pain,NP)的机制。方法:建立NP的坐骨神经慢性压缩损伤(chronic compression injury,CCI)模型。造模后,分别给予生理盐水、XSF或阳性对照药物普瑞巴林灌胃治疗21天。通过代谢组学分析,明确XSF在体内的主要血清代谢产物和代谢途径。通过网络药理学和液相色谱–质谱仪分析,探究XSF治疗NP的主要活性成分和可能作用靶点。在此基础上,进一步整合代谢组学和网络药理学研究结果,使用Cytoscape 3.9.1绘制XSF治疗NP的“靶点–代谢途径–代谢物”网络关系图,并通过分子对接进行结果验证。结果:通过代谢组学分析,共获得XSF治疗NP中具有显著变化的差异代谢物11个,并通过功能富集分析获得了8条相关代谢通路。进一步通过联合代谢组学和网络药理学研究发现,“单胺氧化酶A(MAOA)/单胺氧化酶B(MAOB)/酪氨酸酶(TYR)–酪氨酸代谢途径–龙胆酸钠”可能是XSF治疗NP的重要网络途径。此外,分子对接结果显示XSF的活性成分与MAOA、MAOB和TYR(结合能<-5 kcal/mol)之间均具有高亲和力且相互作用稳定。结论:我们的发现进一步明确了XSF治疗NP的镇痛药效及作用机制,为XSF的临床应用和机制研究提供了科学基础。

4种市售发酵虫草菌粉胶囊寡糖成分分析

目的:研究4种市售发酵虫草菌粉胶囊中的寡糖成分。方法:首先应用高效薄层色谱(HPTLC)对4种市售发酵虫草菌粉胶囊(百令胶囊、金水宝胶囊、宁心宝胶囊和心肝宝胶囊)寡糖成分进行初步分析,展开剂为正丁醇-异丙醇-乙酸-水(6∶11∶3∶4),显色剂为苯胺-二苯胺-磷酸;再采用HPTLC-MS确定寡糖聚合度,质谱选用正离子模式,质量范围m/z 100~1 500;最后结合淀粉酶酶解-HPTLC分析确定主要糖苷键类型。结果:4种市售发酵虫草菌粉胶囊中,除宁心宝胶囊外,其他3种发酵虫草菌粉胶囊均基本不含寡糖类成分;HPTLC-MS结果显示,宁心宝胶囊样品HPTLC中Rf=0.53、0.48、0.40、0.32、0.27、0.22和0.18处的条带相对分子质量分别约为342、342、504、666、828、991、1 153,分别对应二糖及二糖至七糖;淀粉酶酶解结果提示:宁心宝胶囊中寡糖主要是α-1,4-葡聚寡糖。结论:4种市售发酵虫草菌粉胶囊中,仅宁心宝胶囊含相对多的寡糖类成分,且主要为α-1,4-葡聚寡糖,其产生可能与菌种和/或生产工艺有关。

基于比折光指数增量值(dn/dc)的多糖HPSEC-RID定量分析

目的建立基于比折光指数增量值(dn/dc)的多糖高效分子排阻色谱法-示差折光检测法(highperformancesize exclusion chromatography-refractive index detector,HPSEC-RID)通用定量分析方法。方法基于浓度敏感型检测器对样品响应的峰面积与浓度呈线性相关,根据已知dn/dc值的分析物如氯化钠(0.174 mL·g^(-1))水溶液峰面积与浓度线性关系,计算仪器校准常数(K_(RI)),进而根据多糖通用dn/dc值实现不需要对照品以及多角度光散射(multi-angle laser light scattering,MALLS)检测器和第三方软件的多糖含量测定;并以枸杞多糖为例,比较所建立方法与应用第三方软件方法所得结果一致性。结果基于氯化钠水溶液dn/dc值,离线和在线2种模式下测得仪器K_(RI)均为0.998;基于通用dn/dc值结合HPSEC-RID测定的不同批次枸杞子中枸杞多糖测定结果与HPSEC-MALLS-RID测定结果一致,RAD为0.45%~1.23%。结论基于dn/dc值结合HPSEC-RID即可实现天然多糖的简单、快速、准确的定量分析,无需对照品以及MALLS检测器和第三方软件。