化纤方通过上调外周及组织IFN-γ水平缓解放射性肺纤维化

目的:探究中药化纤方用于放射性肺纤维化的疗效及作用机制。方法:在体内实验中,36只6~8周龄雄性无特定病原(SPF)级C57BL/6小鼠被随机分为对照组、放射组(全肺17 Gy照射)、放射+化纤方组(全肺17 Gy照射+化纤方灌胃)。照射后16周,使用肺系数、HE染色和Masson染色评估肺泡炎症和肺纤维化程度,使用免疫组化染色检测肺组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平,使用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测肺组织中γ干扰素(IFN-γ)的mRNA表达水平;同时,使用ELISA法测定血清及肺泡灌洗液中IFN-γ的含量。在体外实验中,使用IFN-γ刺激6 Gy照射后的成纤维细胞NIH/3T3,继续培养48 h后,通过qPCR、免疫荧光染色、蛋白质印记法(western blot,WB)检测α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)转录及蛋白水平的表达。统计分析多组比较使用one-way ANOVA分析,组间多重比较采用Tukey检验。结果:与对照组相比,放射组的肺系数、肺泡炎评分、Ashcroft评分、肺组织α-SMA表达显著升高(P均<0.001)。相较于放射组,放射+化纤方组的上述指标均显著下降(P均<0.001)。qPCR检测结果显示放射+化纤方组IFN-γmRNA表达水平显著高于放射组(P=0.001);ELISA检测结果显示,与放射组相比,放射+化纤方组小鼠血清及肺泡灌洗液IFN-γ含量明显升高(P=0.032、0.037)。在体外实验中,放射后NIH/3T3细胞的α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白的mRNA及蛋白表达显著升高,而在IFN-γ刺激后其表达明显降低。结论:化纤方能够有效缓解放射性肺纤维化,其机制与上调外周及组织IFN-γ,抑制成纤维细胞活化有关。