miR-124靶向镁转运蛋白1调控活化后人T细胞功能耗竭

目的研究miR-124靶向镁转运蛋白1(MagT1)可否调控活化后T细胞功能耗竭。方法1)分离外周血单个核细胞,用IFN-γ、IL-2、抗-CD3抗体、抗-CD28抗体和IL-1α活化T细胞;流式细胞仪检测T细胞活化标记分子CD25和CD69所占的比例。2)构建miR-124/miR-124 sponge慢病毒载体;包装慢病毒后感染活化T细胞,用RT-qPCR检测感染后T细胞内miR-124和MagT1基因表达。3)生物信息学分析miR-124与MagT1的靶向位点,并用双荧光素酶报告基因系统鉴定。4)Western blot法检测慢病毒感染前后T细胞MagT1和PD-1蛋白水平。5)CCK8法检测慢病毒感染前后T细胞增殖能力;ELISA法检测细胞T分泌细胞因子TNF-α和TGF-β的能力。结果流式细胞仪检测表明T细胞活化成功。RT-qPCR检测表明慢病毒构建成功,miR-124/miR-124 sponge载体分别显著上调或下调miR-124的表达(P<0.01)。双荧光素酶报告基因系统证实miR-124靶向MagT1 3′UTR并抑制其表达。Western blot表明miR-124过表达组MagT1蛋白水平低于对照组(P<0.05),PD-1蛋白水平高于对照组(P<0.05),抑制miR-124后,MagT1蛋白水平高于对照组(P<0.05),PD-1蛋白水平低于对照组(P<0.05)。miR-124过表达使T细胞增殖能力和分泌TNF-α能力显著降低,而抑制miR-124使T细胞增殖能力和分泌TGF-β能力显著升高(P<0.01)。结论miR-124可以负向调节靶基因MagT1的表达,并对活化后T细胞功能耗竭具有重要的调节作用。

全息影像在机器人辅助前列腺癌根治术中保留膀胱颈的应用

目的介绍全息影像在机器人辅助前列腺癌根治术中保留膀胱颈技术的应用及初步体会。方法回顾性分析中国人民解放军中部战区总医院泌尿外科2020年1月至2021年12月收治的机器人辅助前列腺癌根治术中使用全息影像保留膀胱颈技术的43例前列腺患者的临床资料。全息影像在机器人辅助前列腺癌根治术中保留膀胱颈技术要点:(1)全息影像定位双侧精囊腺;(2)以精囊腺为起点,沿精囊筋膜和膀胱颈后壁游离,保留膀胱前列腺肌;(3)彻底游离膀胱颈后壁,挑起膀胱颈,精准辨识膀胱颈后完整离断。记录患者围手术期相关数据,分析术后患者早期尿控及性功能恢复情况。结果43例手术均成功保留膀胱颈,平均手术时间为(171±12)min,平均出血量为(90±10)ml,所有患者围手术期均未输血,术后平均住院(10.2±1.2)d,术后留置尿管时间为(9.1±0.5)d。术后病理分期≤T_(2a)期20例,T_(2b)期10例,≥T_(2c)期13例;2例淋巴结转移,3例切缘阳性。4例出现Clavien-DindoⅠ级并发症。术后1个月和3个月尿控恢复率分别为48.8%(21/43)和79%(34/43);术后3个月10例恢复勃起功能。结论全息影像应用于机器人辅助前列腺癌根治术中保留膀胱颈成功率高,术后并发症少,早期尿控恢复率高,值得推广。

siRNA沉默CD99基因对人髓母细胞瘤Daoy细胞株迁移和侵袭能力的影响

目的研究细胞黏附分子CD99对人髓母细胞瘤Daoy细胞株迁移及侵袭能力的影响及可能机制。方法采用化学合成CD99基因的小干扰RNA(CD99 siRNA)下调该基因表达,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction, qPCR)检测转染后的细胞内CD99、基质金属蛋白酶2(matirx metallo-proteinases 2,MMP 2)和MMP 9的表达,通过细胞划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测CD99对Daoy细胞迁移和侵袭的影响。结果 CD99-siRNA-2#能有效降低Daoy细胞株中CD99 mRNA和蛋白水平的表达,沉默后细胞的迁移和侵袭能力均显著降低,进一步检测发现MMP 9的mRNA水平亦明显下调,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 CD99基因对髓母细胞瘤Daoy细胞的迁移和侵袭能力相关,CD99可能通过影响MMP 9的表达参与其中,有望成为髓母细胞瘤治疗的靶点。

2例腺垂体梭形细胞嗜酸细胞瘤临床病理观察及文献复习

目的探讨腺垂体梭形细胞嗜酸细胞瘤(spindle cell oncocytoma,SCO)的临床病理特征、鉴别诊断及免疫组织化学指标的表达情况。方法对2例鞍区腺垂体SCO的临床表现、影像学特征、组织形态学及免疫表型进行分析,并复习相关文献。结果光镜下梭形肿瘤细胞呈束状排列,细胞质丰富,嗜酸性,其中夹杂少许上皮样细胞。免疫组织化学染色显示波形蛋白(vimentin)、S-100、甲状腺转录因子1(thyroid transcription factor-1,TTF-1)及上皮细胞膜抗原(epithelial membrane antigen,EMA)阳性。广谱细胞角蛋白(pan-cytokeritin,PCK)、B细胞白血病/淋巴瘤2基因(B-cell leukemia/lymphoma 2 gene,Bcl-2)、结蛋白(desmin)、神经元特异性核蛋白(neuron specific nuclear protein,NeuN)、促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)、生长激素(growth hormone,GH)、促卵泡生成激素(follicle-stimulating hormone,FSH)、催乳素(prolactin,PRL)、促甲状腺激素(throid stimulating hormone,TSH)、黄体生成激素(luteinizing hormone,LH)、平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin,SMA)、巢蛋白(nestin)均阴性,其中1病例白细胞分化抗原99(cluster of differentiation 99,CD 99)重组蛋白阳性。结论 SCO临床及影像学表现均无特异性,术前诊断比较困难,诊断主要依靠光镜下所见结合免疫组织化学。