rhIFN-α对病理性瘢痕成纤维细胞影响的实验研究

目的:研究rhIFN-α对病理性瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响,探讨细胞因子对病理性瘢痕的作用机制。方法:对病理性瘢痕成纤维细胞进行体外培养,采用倒置显微镜、MTT法、流式细胞术等方法进行观察、分析,研究rhIFN-α对病理性瘢痕成纤维细胞体外生长、增殖、细胞周期、Fas、Bcl-2表达的影响,数据用方差分析和q检验处理。结果:加入rhIFN-α后,细胞表现为生长趋势及增殖活性被明显抑制,S-G2-M期细胞百分数明显降低,Fas、Bcl-2蛋白表达量分别显示升高和降低。结论:rhIFN-α对成纤维细胞的生长趋势及增殖活性有明显抑制作用,可促进成纤维细胞凋亡。提示rhIFN-α是成纤维细胞负性调节因子,在病理性瘢痕的治疗中有一定的应用价值。

RNAi RelB DC对CD4^+CD25^+双阳性T细胞诱导效应的实验研究

目的:探讨核转录因子NF-κB/RelB基因沉默的树突状细胞(RNAiRelB dendritic cell,RNAiRelBDC)诱导异基因CD4+CD25+双阳性T细胞生成的生物效应。方法:实验分为Control-DC组、LPS-DC组、RNAiRelBDC组和LPS-RNAiRelBDC组,各组DC均与同种异基因T淋巴细胞混合反应后,采用流式细胞术(FCM)分析各组CD4+CD25+双阳性T细胞生成比例。结果:Control-DC组DC较LPS-DC组DC诱导CD4+CD25+双阳性T细胞的增高幅度更显著,两者差异具有统计学意义(P<0.01)。RNAiRelBDC组和LPS-RNAiRelBDC组DC诱导CD4+CD25+双阳性T细胞生成比例与LPS-DC组相比均存在显著差异(P<0.01),RNAiRelBDC组DC诱导CD4+CD25+双阳性T细胞生成能力较Control-DC组强,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:RelB基因被沉默后DC具有较强的诱导CD4+CD25+双阳性T细胞生成的能力,表现出未成熟DC的特点,这种RNAiRelBDC有望成为一种新型的致耐受DC用于免疫耐受的诱导研究。

分析临床基因扩增检验实验室的质量控制

聚合酶链反应(PCR)是一种体外核酸扩增技术,模拟自然DNA复制过程,通过重复高温变性、低温退火、中温延伸等简单的3个温度循环,将靶DNA扩增百万倍,显示极高的敏感性,因此在临床检测和科研中有着广泛的运用。做好PCR质量控制是保证检测结果准确性的关键步骤,该文就临床基因扩增检验实验室在实验前、中、后期中涉及的质量控制问题进行分析。

老年性骨质疏松症与细胞自噬关联性的研究进展

随着老龄化社会的到来,老年性骨质疏松症(osteoporosis,OP)已经成为威胁老年人健康的常见疾病。OP是一种以全身性骨量的丢失、骨微观结构的退行性改变为特征的骨骼疾病,成骨细胞和破骨细胞的动态平衡失调是引起骨质疏松症的主要原因。自噬能够通过影响成骨细胞的矿化和破骨细胞的分化过程而改变两者之间的平衡关系。这就提示可以从调控自噬的角度对骨质疏松症的病情发展进行干预。本文作者就自噬与骨细胞、成骨细胞、破骨细胞、间充质干细胞等方面关系的研究进行综述。

肥大细胞、嗜碱性粒细胞在过敏性疾病发病机制中的作用研究进展

多种因素可使肥大细胞或嗜碱性粒细胞活化,包括各种过敏原(IgE依赖性)和其他复合物(非IgE依赖性),激活的细胞通过一系列信号转导机制介导细胞内介质释放,实现多种生物学功能。文中综述近3年肥大细胞和嗜碱性粒细胞相关疾病研究领域中的热点问题,有助于此类疾病发病机制的研究,并为发现过敏性疾病药物治疗的新靶标提供资料。

瘦素对乳腺癌生长细胞动力学和形态学影响的研究

目的:研究瘦素对乳腺癌细胞株MCF-7细胞生长的作用。方法:分别使用0、25、50、100和200nmol/L瘦素作用于细胞株MCF-7细胞,同时在上述作用后24、48和72h采用光学显微镜观察细胞形态学改变,采用MTT比色方法,观察不同浓度瘦素对MCF-7细胞生长刺激的剂量、时间效应,比较在相对应剂量胰岛素情况下,二者对细胞增殖刺激作用的强弱。结果:加用瘦素各组细胞比未加瘦素细胞密度增加,形态变异。与正常对照组相比,各浓度瘦素(25、50、100和200nmol/L)均可明显促进MCF-7细胞增殖,其中50、100和200nmol/L瘦素作用24、48和72h后差异均有统计学意义,P<0.05。瘦素对MCF-7细胞的增殖作用呈现一定的时间和剂量依赖效应。胰岛素各相对应组之间与瘦素比较,细胞增殖刺激作用差异无统计学意义,P>0.05。结论:瘦素对乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖有刺激作用,且这种作用呈现一定的剂量、时间依赖效应,结果提示瘦素是促进乳腺癌细胞增殖的因素之一。

老年COPD患者痰IL-4、IL-10、INF-γ水平及临床意义

目的探讨COPD患者痰白细胞介素4(interleukin,IL-4)、IL-10、干扰素-γ(interferon,INF-γ)水平及临床意义。方法老年COPD患者共60例(重度20例,中度20例,轻度20例),正常对照20例。采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验,检测诱导痰IL-4、IL-10、INF-γ水平。结果①急性期重、中度COPD组痰IL-4水平低于轻度组(P<0.05)。②急性期重度组痰IL-10水平均高于轻度组。治疗后重度、中度组痰IL-10水平均比治疗前显著升高(P均<0.01)。③重、中度组急性期痰IFN-γ值显著高于治疗后缓解期(P均<0.01),且重、中度组急性期痰IFN-γ值均高于轻度组。④老年COPD患者痰中IL-4与IL-10;IL-10与IFN-γ存在相关,IL-4与IFN-γ不存在相关。结论 COPD时Th1类细胞因子(IFN-γ)呈优势状态;前炎症因子水平增高。

应用双重免疫组化技术研究肥大细胞亚型与食管癌的相关性

目的:探讨食管癌组织中肥大细胞(mast cell,MC)亚型的变化及其浸润程度与食管癌临床病理特征的关系。方法:采用双重免疫组化染色方法对90例食管癌根治术手术标本中MC进行检测,并探讨MC亚型T型、TC型和C型与食管癌的组织学分级、浸润深度及淋巴结转移之间的关系。结果:食管癌组织内的MC主要分布于癌旁交界区。食管癌中MCT和MCTC两种亚型MC的表达与食管癌浸润深度及淋巴结转移呈显著的负相关性,而MCC型MC的表达与癌组织浸润深度及转移无关。结论:癌间质内MCT和MCTC型MC的浸润可能具有抑制食管癌生长及转移的作用。MC浸润的数量与食管癌的生物学行为有相关性,对食管癌患者预后评估有一定的参考价值。

以PLGA为佐剂的花粉过敏原疫苗特异性免疫治疗过敏性鼻炎的研究

目的探讨用聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)包载鱼尾葵花粉过敏原profilin蛋白的纳米疫苗特异性免疫治疗小鼠过敏性鼻炎的机制及疗效。方法将30只BALB/c小鼠随机分为5组:正常组、模型组、纳米疫苗治疗组、空白纳米治疗组及蛋白治疗组,每组6只。分别在第0、7、14天致敏小鼠,除正常组外,其余4组小鼠每次经腹腔注射50μg鱼尾葵花粉提取液和2mg Al(OH)3,正常组用PBS代替。致敏结束后,纳米疫苗治疗组、空白纳米组及蛋白治疗组分别使用PLGA-CmP纳米疫苗(含50μg profilin蛋白)、空PLGA纳米和50μg重组蛋白profilin经小鼠腹部皮下注射进行免疫治疗,每隔3d注射1次,共治疗5次。末次治疗后,取花粉粗浸液200μg分别滴鼻激发小鼠,每天1次,连续3d,激发结束后处死小鼠。小鼠激发后的30min内,观察并记录各组小鼠鼻部症状(鼻分泌物量、喷嚏次数及搔鼻)评分情况;检测血清中过敏原特异性抗体(IgE和IgG2a)及细胞因子(IL-4、IL-10和INF-γ)水平;观察鼻黏膜组织形态学变化。结果与模型组比较,蛋白治疗组及纳米疫苗治疗组小鼠鼻部症状评分、血清特异性IgE及IL-4水平均明显降低,纳米疫苗治疗组降低更明显,IgG2a、IL-10和INF-γ显著增加,纳米疫苗治疗组增加更明显(P<0.05或P<0.01)。结论以PLGA为佐剂的鱼尾葵花粉过敏原纳米疫苗可有效地抑制小鼠过敏性鼻炎的炎症反应,大大提高过敏原疫苗的治疗效果。

乳胶过敏原研究进展

天然橡胶乳胶过敏日益引起人们的关注。乳胶过敏主要是由乳胶内蛋白过敏原引起,目前已有13种乳胶过敏原被鉴定出来。在分子水平上对阐明乳胶变态反应的机理,并为建立乳胶过敏的免疫学诊断和防治提供依据。

星形胶质细胞划痕或缺血损伤后亚低温保护作用的研究

目的探讨亚低温对大鼠星形胶质细胞不同类型损伤的保护作用。方法体外原代培养SD大鼠星形胶质细胞,分别以划痕和厌氧培养代表机械损伤和缺血缺氧损伤类型。实验分为对照组(C组)、单纯缺氧组(H组)、缺氧+白细胞组(H+W组)、划痕组(S组)和划痕+白细胞组(S+W组)。将各组细胞置入37、34、32℃CO2孵箱中培养24h,应用速率法和LIVE/DEAD染色分别检测和观察各组细胞在不同温度下的乳酸脱氢酶(LDH)释放率和细胞形态学变化。结果与37℃相比,H组乳酸脱氢酶(LDH)释放率从(33.02±3.58)%分别下降为34℃时的(11.48±1.53)%和32℃时的(3.79±0.45)%(P<0.05);H+W组LDH释放率从(51.14±2.17)%分别下降为34℃时的(19.53±4.37)%和32℃时的(16.68±1.47)%(P<0.05),而S组与S+WBC组LDH释放率在34℃和32℃时与37℃相比均无显著差异(P>0.05)。结论亚低温可明显减轻缺血缺氧对星形胶质细胞的损伤,但对单纯划痕损伤的保护作用不显著。

CD203c分子与变态反应性疾病临床诊断

CD203/核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶(ecto-nucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterases,ENPPs)是调节嘌呤代谢的胞外酶。近年人们应用流式细胞仪检测技术发现激活后的嗜碱性粒细胞能特异性表达CD203c,为嗜碱性粒细胞激发试验(basophil activation test,BAT)提供了重要的标记物。由于BAT一直被认为是变态反应性疾病辅助诊断的"金标准",所以嗜碱性粒细胞膜上CD203c表达水平的变化可能为变态反应性疾病辅助诊断带来突破性进展。

老年肾脏病患者血清Klotho水平与肾功能不全关系的研究

目的探讨老年慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)患者血清Klotho水平变化与肾功能不全的关系及影响因素。方法收集我院CKD患者100例,根据年龄分为老年组41例(年龄65≥岁)及非老年组59例(年龄<65岁)、匹配健康对照组30例,采用ELISA法分别检测三组受试者血清Klotho水平,并进一步分析其与肾功能不全的关系及影响因素。结果 CKD组血清Klotho水平明显低于对照组;其中,老年CKD组血清Klotho水平又明显低于非老年组(P<0.05);在排除肾功能的影响后,老年组血清Klotho水平仍然低于非老年组,差异有统计学意义;Pearson相关分析显示,老年患者血清log Klotho水平与血钙、体重、血色素、GFR呈正相关,与年龄、log FGF-23、log Scr、血磷呈负相关;多元逐步回归分析显示,年龄、log FGF-23、log Scr是影响老年组患者血清log Klotho水平的独立危险因素。结论 CKD患者血清Klotho水平下降,其中老年组患者Klotho水平的较非老年组减少更明显,Klotho的减少可能参与了老年CKD的发生发展。

新冠疫情下开放科研实验室管理的专家共识

2019新型冠状病毒的暴发给实验管理带来了新的挑战,鉴于目前形势下疫情的风险,建议各实验室务必提高工作中的风险意识,增强防护,加强管理,特提出以下建议:一、加强科研实验室开放管理1.加强入室人员的培训,除传统的实验室生物安全培训外,增加新型冠状病毒的传播和防控知识培训,并进行考核,未通过者不得进入实验室开展实验。

活性维生素D对老年慢性阻塞性肺疾病病人免疫状态及肺功能的影响研究

目的探讨活性维生素D(骨化三醇)对老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)病人免疫功能及肺功能的影响。方法本研究纳入我院124例稳定期老年COPD病人(COPDⅡ~Ⅳ级,年龄≥65岁),采用自身前后对照的方法,在活性维生素D给药前、给药后6个月及12个月分别测定纳入对象的肺功能,并采用细胞因子微球检测技术(CBA)检测外周血中干扰素(IFN)-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-4、IL-10的浓度。结果服用骨化三醇6个月后,病人肺功能无明显改善;服用12个月后,与治疗前相比,第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV1%pred)以及第1秒有力呼气容积与用力肺活量比值(FEV1/FVC)均增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。与治疗前相比,治疗6个月后血清IFN-γ、TNF-α浓度降低(P<0.05),IL-4和IL-10浓度上升(P<0.05);12个月后,IFN-γ和TNF-α浓度进一步降低(P<0.05),IL-4和IL-10浓度进一步升高(P<0.05)。结论老年COPD病人长期服用活性维生素D可以通过调节免疫功能的方式改善其肺功能。

不同年龄小鼠脾脏B细胞的表型和功能差异研究

目的探讨不同年龄小鼠脾脏B细胞表面免疫球蛋白分子、相关表面分子的表达和功能差异。方法不同年龄小鼠的脾脏制备成单个核细胞后进行流式细胞术染色,分析B细胞表面分子的表达。纯化CD19+B细胞,用LPS或CpG刺激培养,检测细胞因子和抗体的分泌。结果小鼠脾脏中的B细胞、浆母细胞和浆细胞数随小鼠年龄增加呈升高趋势,且B细胞表面免疫球蛋白和多种分子的表达也随小鼠年龄的增加而不同。相同刺激条件下,相比新生小鼠,成年小鼠脾脏B细胞产生细胞因子能力较弱,产生抗体能力更强。结论小鼠脾脏B细胞的表型和功能随年龄的变化而不同。本研究揭示了小鼠发育过程中B细胞的表型及功能改变,为B细胞在不同年龄段的动物及人群中的分布和功能研究奠定了基础。

曲美替尼对K-ras突变直肠癌细胞恶性行为、耐药蛋白及巨噬细胞极化的作用机制的研究

目的探讨曲美替尼对K-ras突变直肠癌细胞恶性行为、耐药蛋白及巨噬细胞极化的作用机制。方法取K-ras突变直肠癌细胞HCT116,将其随机分为HCT116组(HC组)、西妥昔单抗+HCT116组(CE组)、低剂量曲美替尼+HCT116组(LT组)、中剂量曲美替尼+HCT116组(MT组)、高剂量曲美替尼+HCT116组(HT组),Transwell实验及划痕实验检测细胞恶性行为,MTT法检测药物敏感性,RT-PCR法检测耐药蛋白表达,免疫印迹法检测巨噬细胞极化相关指标。结果与HC组相比,其余四组细胞侵袭、迁移及GST-π、P-gp、TopoⅡ、CD163表达显著降低(P<0.05),CD40蛋白表达显著升高(P<0.05);与LT组相比,MT组、HT组细胞侵袭、迁移及GST-π、P-gp、TopoⅡ、CD163表达显著降低(P<0.05),CD40蛋白表达显著升高(P<0.05),且HT组比MT组变化明显(P<0.05);HCT116细胞对西妥昔单抗与曲美替尼均敏感,但与西妥昔单抗相比,曲美替尼的IC_(50)明显更低(P<0.05)。结论曲美替尼对K-ras突变直肠癌细胞具有显著疗效,可显著改善其恶性行为,抑制耐药蛋白表达,抑制巨噬细胞M2极化。

硫化物对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

硫是人体内蛋白质的重要组成元素,参与机体众多代谢与催化过程,为生命所必需。近年来,随着科学家们对骨髓间充质干细胞相关研究的不断深入,含硫化合物对骨髓间充质干细胞的影响日益受到关注。含硫化合物主要包含有机硫化物、无机硫化物、天然含硫化合物以及S-非甾体抗炎药复合体等,这些化合物可能通过影响细胞信号通路、细胞周期或氧化应激反应等,调节人骨髓间充质干细胞的成骨分化能力。因此含硫化合物或许能对后续更好地利用骨髓间充质干细胞分化进行疾病治疗以及干细胞的应用提供新思路。本文作者综述了相关硫化物与骨髓间充质干细胞成骨分化的关系,并对其机制和生物学应用进行了探讨。