新生儿外周血检出胆红素结晶1例报道

胆红素结晶临床可见于阻塞性黄疸、急性肝坏死等疾病个体,出现在胸腹水、关节液中有报道,而外周血检出胆红素结晶罕见。本文报道1例出生4 d男性患儿,诊断为新生儿呼吸窘迫综合征、高胆红素血症。外周血涂片镜检于部分中性粒细胞、单核细胞内见金黄色、折光性强,呈针状、菱形、矩形、斜方体形或长方体形胆红素结晶。根据临床经验,显著高胆红素血症的新生儿外周血偶见胆红素结晶,可造成血清胆红素测定结果偏低。提示血常规结果的审核,需在审核各项检测数值的同时,务必注意观察散点图和报警信息,并结合血清胆红素水平及临床表现,镜检时仔细观察细胞形态,以便及时发现仅仅依靠检测数值发现不了的对临床诊疗有意义的形态学异常结果。

一例HBV再激活后血清HBsAg阴性HBeAg阳性的病例分析

回顾性分析一例HBV再激活后血清HBsAg阴性HBeAg阳性的病例。通过分析其诊断过程,以加强检验对HBV再激活的认识。为HBV再激活的发生机制和诊治的探讨提供一定依据。

CXCR2基因敲除HeLa细胞株构建及转录组测序分析

目的通过基因敲除和转录组测序探究CXCR2相关功能基因及信号通路,揭示其在宫颈癌中的分子作用。方法设计构建靶向CXCR2基因的CRISPR-Cas9敲除质粒载体,转染HeLa细胞并筛选获得CXCR2基因敲除的细胞株。转录组测序分析差异表达基因,并进行基因本体(GO)分类富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析筛选信号通路和重要差异表达基因,差异表达基因经实时荧光定量PCR方法验证。结果成功构建了CXCR2基因敲除细胞株,转录组测序获得1519个差异表达基因,其中上调表达基因428个,下调表达基因1091个。GO富集分析显示了细胞组分、生物学过程、分子功能方面富集量前20的条目;KEGG信号通路富集分析显示,富集基因最多的为肿瘤相关通路,其次为PI3K-Akt信号通路和HPV感染信号通路。通过韦恩图分析获得了7个共同差异表达基因:EGF、FN1、ITGA2B、CCND3、PIK3CD、PDGFRB、CDKN1A,其中前6个基因表达显著下调,CDKN1A表达显著上调。结论转录组测序分析结果进一步提示CXCR2在宫颈癌中发挥作用,并初步确定了与其相关的信号通路和关键功能基因,为宫颈癌的分子机制和临床研究提供了理论基础。

探讨使用Image J软件进行HE染色液的质量评估

目的探讨使用ImageJ软件对HE染色结果进行质控评估及在定量评价中的应用。方法选择淋巴结质控蜡块以3μm厚度连续切片并连续HE染色5天,将染色的切片进行扫描后,使用ImageJ软件测量每张切片苏木素及伊红的染色强度,对测得的数据进行统计学分析。结果根据测量结果,苏木素染色强度值与染色天数呈正相关线性关系,R^(2)=0.8689,苏木素染色强度值可以较好的评估染液的状态,强度值越高提示苏木素染色效力越差,而伊红染色由于拟合度R^(2)过小,R^(2)=0.01924,通过强度值不适宜评估染液的状态。结论使用ImageJ软件可以对切片染色结果进行定量分析,可以客观的评价苏木素的染色结果及染液状态,为切片质量评估提供可靠的数据支撑。

哺乳动物生物钟同步化机制的研究进展

生物钟主要由视交叉上核中枢生物钟与各组织外周生物钟组成,经同步化表达后各生物钟系统呈现明显的昼夜节律性特征,最终使机体的代谢平衡与能量相互协同。笔者主要通过对生物钟同步化机制的阐述,探讨生物钟同步化相关路径对肝细胞、脂肪细胞、心肌细胞等各生物钟多组学适应代谢节律特征的影响进行综述,并对生物钟应用进行展望。倒置喂养可能不能反映正常喂养节律的内源性功能。未来的研究将侧重于能够涵盖所有器官系统,且在其他组织中采用多组学工具以揭示外周生物钟的层次结构。

双歧三联活菌联合白藜芦醇治疗非酒精性脂肪性肝病小鼠效果观察

目的观察双歧三联活菌(BTV)联合白藜芦醇(RSV)治疗非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠的效果。方法将50只小鼠随机分为空白对照(CON)组7只、NAFLD模型(MOD)组8只(模型构建期间处死1只筛查造模状况)、双歧三联活菌(BTV)组7只、白藜芦醇(RSV)组7只(造模期间死亡1只)、联合用药低剂量(BTV+RSV-L)组7只、联合用药中剂量(BTV+RSV-M)组7只、联合用药高剂量(BTV+RSV-H)组7只。除CON组外,其余各组喂食高脂饲料4周建立NAFLD模型。造模成功后CON组、MOD组喂服等量生理盐水,其余各组分别给予BTV 70 mg/d、RSV 2 mg/d、BTV 35 mg/d+RSV 1 mg/d、BTV 70 mg/d+RSV 2 mg/d、BTV 140 mg/d+RSV 4 mg/d喂服。干预4周。监测各组体质量(1次/周);麻醉小鼠摘除眼球取血并分离血清备用;用颈椎脱臼法处死小鼠,剖取其肝脏称重,计算肝指数;将部分肝组织用4%甲醛溶液固定以备病理学检查。检测血清炎性因子[C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、白细胞介素6(IL-6)]、肝功能指标[谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)]、血脂指标(TG、TC、LDL-C、HDL-C),并计算AST/ALT、LDL-C/HDL-C。HE染色观察小鼠肝脏组织病理学变化。结果与CON组比较,MOD组体质量、肝湿重、血清ALT/AST、HDL-C水平低(P均<0.05),肝指数、CRP、PCT、IL-6、ALT、AST、ALP、TG、TC、LDL-C水平及LDL-C/HDL-C高(P均<0.05),肝组织脂肪变性和肝细胞水肿明显,多见静脉窦周围有淋巴细胞及中性粒细胞浸润,并伴脂褐素沉积。与MOD组比较,各用药组肝湿重、肝指数、CRP水平均低(P均<0.05),体质量均高(P均<0.05);BTV+RSV-M组、BTV+RSV-H组ALT、AST、TG低(P均<0.05);BTV+RSV-L组TG、IL-6水平低(P均<0.05);BTV+RSV-H组PCT、LDL-C/HDL-C低,HDL-C高(P均<0.05);小鼠肝内脂肪浸润和炎细胞聚集显著改善。与BTV组、RSV组比较,联合用药组肝湿重、肝指数均低(P均<0.05),体质量均高(P均<0.05);BTV+RSV-M组、BTV+RSV-H组TG低(P均<0.05);BTV+RSV-H组LDL-C/HDL-C低,HDL-C高(P均<0.05);肝脏脂肪样变和炎细胞浸润改善更显著。结论BTV、RSV均对NAFLD小鼠有治疗作用,二者联合应用治疗效果更佳。

血液复检发现白细胞绿色包涵体一例

血液复检是血液分析时的重要环节,笔者在血液复检过程中,发现白细胞内绿色包涵体一例,现报道如下。1 临床资料患者,男,81岁,因“咳嗽、咳痰并喘息2个月,加重2 d伴有发热”于2022年3月24日收入急诊ICU住院治疗。体检:T 39℃,P 106次/min, R 14次/min, BP 74/50 mmHg(多巴胺泵入维持血压);神志清醒,双肺呼吸音粗,可闻及少量湿啰音,心律齐;急诊双肺CT:双肺气肿,双肺索条影.

CUL7复合杂合变异致3-M综合征两个家系的遗传学分析

目的探讨2个3-M(Miller-Mukusick-Malvaux)综合征家系的临床特征和遗传学病因。方法选取2022年9月和2023年6月就诊于临沂市人民医院的2个3-M综合征家系为研究对象,应用全外显子测序(whole exome sequencing,WES)对先证者进行基因检测,对候选变异进行Sanger测序和致病性评估,并对2个家系中高危胎儿进行产前诊断。结果家系1先证者孕18周,身材矮小、有异常面容,出生时有先天性髋关节脱位现象;WES检出CUL7基因的复合杂合变异:c.4333C>T(p.R1445*)、c.3291_3294del(p.H1098Cfs*42),分别遗传自父亲和母亲,先证者弟弟携带相同的变异,依据美国医学遗传学和基因组学学会相关指南,2个变异位点均评级为致病性变异;先证者胎儿为c.4333C>T变异位点携带者。家系2先证者表现为身材矮小、特殊面容、脊柱侧弯、翼状肩胛骨、双侧斜指、第五指短等,检测到CUL7基因携带遗传自母亲的c.3823del(p.R1275Vfs*34)和遗传自父亲的c.758del(p.L253Rfs*2)复合杂合变异,经评判,上述变异位点分别为致病性变异和疑似致病性变异;胎儿为c.758del变异位点携带者。结论本研究在2个家系中确诊了3例3-M综合征患者,CUL7基因:c.4333C>T、c.3291_3294del和c.3823del、c.758del分别是家系1和家系2的遗传学病因,进一步扩展了CUL7基因变异谱,为遗传咨询和产前诊断提供了依据。

NR5A1基因变异致46,XY性发育异常1例患者的遗传学分析

目的分析1例性发育异常(DSD)患儿的临床特征,探讨其遗传学病因。方法选取2019年7月29日因原发闭经就诊于临沂市人民医院遗传咨询门诊的1例DSD患儿作为研究对象,收集其临床资料。应用染色体核型分析及实时荧光定量PCR检测Y染色体微缺失,分析患儿染色体是否存在异常。利用高通量测序对患儿及父母进行基因检测,对候选变异进行Sanger测序验证,对变异位点进行致病性评估。结果患儿年龄为13岁,社会性别女,存在原发性闭经,男性第二性征发育,超声检查未探及子宫及明确卵巢结构,可探及窄带样阴道低回声及弯曲阴茎海绵体样结构。患儿染色体核型为46,XY,Y染色体AZF区段不存在缺失。基因测序发现患儿存在母源的NR5A1:c.323delA(p.Q108Rfs*188)。根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)遗传变异分类标准与指南,NR5A1:c.323delA变异评级为致病性变异(PVS1+PM2Supporting+PP4)。结论NR5A1:c.323delA变异考虑是该DSD患儿的致病原因,为临床诊断和治疗提供遗传学依据。

非靶向串联质谱分析人早期胚胎级别与其培养液中相关氨基酸和肉碱水平的关联

目的检测体外培养不同级别早期人胚胎的培养液中氨基酸和肉碱水平, 探讨基于质谱的微量分析技术用于评价胚胎体外发育潜能的可行性。方法从2022年6至12月在临沂市人民医院生殖医学科接受体外受精-胚胎移植治疗的不孕夫妇中, 收集女方年龄31.5(26.5, 33.25)岁, 且获卵数在8~20个的不孕夫妇, 从中随机挑选30对不孕夫妇收取其第3天细胞胚的培养液共126份, 依据其所对应的胚胎的形态级别分为优(n=43)、中(n=49)和差3(n=34)组。通过液相色谱-质谱联用检测不同培养液中氨基酸和肉碱水平。通过方差分析比较不同组间氨基酸与肉碱水平的差异, 通过Pearson相关分析氨基酸与肉碱水平的关联, 偏最小二乘法分析氨基酸和肉碱水平与胚胎评估级别的关联。结果甲硫氨酸/苯丙氨酸(比值)在优胚、中胚和差胚3组间分别为3.09±1.67、4.00±1.19和4.99±2.04, 差异有统计学意义(F=7.09, P<0.05), 优胚与中胚间(t=-0.91, P<0.05)、优胚与差胚间(t=-1.91, P<0.05)及中胚与差胚间(t=-0.99, P<0.05)差异均有统计学意义。不同氨基酸之间, 苯丙氨酸与酪氨酸的正相关性最强(r=0.99, P<0.01);不同肉碱之间, 辛酰肉碱与葵酰肉碱比值(C8/C10)与(戊二酰肉碱+3-羟基己酰肉碱)/棕榈酰肉碱比值[(C5DC+C6OH)/C16]的正相关性最强(r=0.44, P<0.001);偏最小二乘法拟合模型计算氨基酸/肉碱水平与胚胎级别相关的权重:亮氨酸(异亮氨酸)为2.22, 精氨酸为1.99, 缬氨酸/苯丙氨酸为1.65, 甘氨酸为1.54, 酪氨酸为1.21, (戊二酰肉碱+3-羟基己酰肉碱)/辛酰肉碱(C5DC+C6OH)/C8为1.15。结论胚胎培养液中亮氨酸、精氨酸、缬氨酸/苯丙氨酸比值、甘氨酸、酪氨酸以及肉碱比值(C5DC+C6OH)/C8与体外培养人早期胚胎级别显著相关。

两个遗传性并多指(趾)家系致病基因突变分析

目的探讨2个并多指(趾)畸形(SPD)家系的致病基因。方法收集2019年1月、2020年12月就诊于临沂市人民医院的2个SPD家系的临床资料,采集先证者及家系成员静脉血样本,提取基因组DNA,对先证者行全外显子组测序筛选候选基因变异;采用Sanger测序对2个家系成员验证其突变位点;采用生物信息学软件PolyPhen-2和PROVEAN对突变位点的致病性进行预测分析,结合美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)指南对突变位点进行致病性判断。结果家系1三代成员中共有5例患者(男2例、女3例),先证者为8岁女性,表现为右手第3、4指并指,指蹼融合和远端指甲融合,其余手指活动自如,双脚未见异常;家系2三代成员中共有4例患者(均为女性),先证者为4岁女性,表现为双手第3、4指并指,示指侧弯。全外显子组测序分别在2个SPD家系中检出同源盒D13(HOXD13)基因c.917G>A和c.917G>T突变,且2个突变均呈现基因型-表型共分离,其中HOXD13基因c.917G>T突变未见数据库收录,为新发杂合错义突变。生物信息学软件预测这2个突变位点均为有害,结合ACMG指南,家系1 HOXD13基因c.917G>A突变的生物学致病等级符合PS1+PS4+PM1+PM2+PP3,可判断为致病突变;家系2的HOXD13基因c.917G>T突变符合PM2+PM5+PP3+PP4,可判断为疑似致病突变。结论 HOXD13基因c.917G>A和c.917G>T突变是导致这2个SPD家系发病的原因。

BCL11A相关智力障碍一个家系的遗传学分析

目的探讨1家系中2例BCL11A相关智力障碍(BCL11A-ID)患者的遗传学病因。方法选取2020年6月19日,于临沂市人民医院遗传咨询门诊就诊的1个BCL11A-ID家系为研究对象。分析先证者及家系成员的临床资料,并进行染色体核型分析、家系全外显子组测序(trio-WES)、拷贝数变异测序(CNV-seq),可疑变异经Sanger测序验证并进行致病性评估。结果先证者及其母亲表现为智力障碍及语言发育迟缓,二者的胎儿血红蛋白(HbF)显著升高。WES发现先证者BCL11A基因第4外显子存在c.1327_c.1328delTC(p.Ser443Hisfs*128)杂合变异,导致编码蛋白截短表达,Sanger测序验证该变异遗传自母亲。检索相关数据库未见报道,为新变异。根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)指南判定为致病性变异(PVS1+PM2+PP1)。先证者及其父母、哥哥的染色体核型分析未见异常,先证者及其父母的CNV-seq未见异常。结论本研究确诊了先证者及其母亲为BCL11A-ID患者,c.1327_c.1328delTC(p.Ser443Hisfs*128)变异可能是该病的致病原因,丰富了BCL11A基因的变异谱。

多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞的基因表达与胚胎发育潜能的相关性

目的:探讨多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)的不孕患者卵巢颗粒细胞基因的转录表达差异与早期胚胎发育潜能的相关性。方法:选择3对年龄、体质指数、卵巢储备功能相近,并使用促性腺激素释放激素(gonadotrophin-releasing hormone,GnRH)拮抗剂治疗的PCOS不孕症患者,其中胚胎数少者为病例组(n=3),多者为对照组(n=3)。收集患者的卵巢颗粒细胞并提取总RNA,进行基因转录表达差异的显著性分析及功能富集分析。结果:与对照组相比,病例组76个基因显著上调,110个基因显著下调。与进周期日相比,对照组人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotrophin,HCG)日的雌二醇(estradiol,E 2)水平显著升高。与对照组相比,病例组KRT7基因表达显著上调,CCNYL2表达显著下调。基因本体条目富集差异表达基因发现,与染色体分离、调控细胞周期、脂肪酸代谢等相关的基因显著富集;调控细胞组装、细胞分化、负向调控细胞周期、负向调控发育、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)的ERK1和ERK2信号通路等相关基因表达显著下调。KEGG分析显示,与固醇激素生物合成相关的基因显著富集。结论:接受GnRH拮抗剂治疗的PCOS不孕患者卵母细胞体外正常受精数及可用胚胎数存在显著差别,可能与卵巢颗粒细胞相关基因的表达差异有关。