非洲猪瘟病毒p22蛋白表达、多克隆抗体制备及间接ELISA方法的建立

【目的】试验旨在表达与纯化非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的结构蛋白p22,将其作为包被抗原建立ASFV抗体的间接ELISA检测方法,用于诊断非洲猪瘟。【方法】将ASFV p22编码基因KP177R的截短体(24―145位氨基酸)克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,将重组质粒pET-32a-p22转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经0.1 mmol/L IPTG诱导表达5 h,利用镍柱亲和纯化p22蛋白,并进行Western blotting鉴定。利用p22蛋白免疫BALB/c小鼠制备抗血清,并以含p22全长基因的真核表达质粒pCAGGS-EGFP-fp22转染HEK293T细胞为抗原基质,利用间接免疫荧光(IFA)鉴定抗血清的反应性。以重组p22蛋白为包被抗原,优化最佳抗原包被浓度、待检血清稀释度、封闭条件、抗原抗体反应时间、酶标二抗工作浓度等参数,建立ASFV抗体间接ELISA检测方法,并对临床猪血清样品进行检测。【结果】ASFV p22截短蛋白在大肠杆菌中高水平表达,蛋白产量为0.85 mg/100 g菌体;p22蛋白具有良好的免疫原性,小鼠血清抗体效价为1∶12800。本研究建立的ELISA方法(p22-ELISA)的最佳抗原包被浓度为0.125μg/孔,最佳待检血清稀释度为1∶800,最佳酶标二抗稀释度为1∶10000;阴阳性临界值为0.384;与CSFV、PRRSV、PCV2、PRV等抗体阳性猪血清无交叉反应,说明特异性好;批内与批间变异系数均低于10%,表明重复性好。利用p22-ELISA方法检测了263份临床猪血清样品,与商品化ASFV抗体ELISA检测试剂盒的符合率为97.7%。【结论】本研究基于原核表达的p22截短体蛋白建立了用于检测ASFV抗体的间接ELISA方法,该方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为ASFV感染诊断和流行病学调查提供了技术支撑。

低温贮藏对沂蒙山小冬桃果实采后品质的影响

【目的】探索低温贮藏对“沂蒙山小冬桃”果实品质的影响。【方法】分别研究了其在室温(25℃)和低温(1℃)贮藏条件下果实质地、色泽、部分营养物质和抗氧化物质含量的变化情况。【结果】与对照组(室温贮藏)相比,低温贮藏果实的失水率、出汁率、可溶性固形物含量、过氧化物酶活性及可溶性蛋白含量显著降低;果实硬度、叶绿素、维生素C、可滴定酸的含量显著提高;果实细胞排列更加紧密、饱满,果肉结构完整性更好。“沂蒙山小冬桃”低温贮藏能显著推迟果实的后熟,延长贮藏期。【结论】研究明确了“沂蒙山小冬桃”果实在室温和低温贮藏过程中果实采后生理变化规律,为指导冬桃果实贮藏保鲜以及品质调控研究提供参考依据。

材料化学类科研实验室安全管理实践探索

高校科研实验室是开展探索科学研究和人才培养的前沿阵地,确保科研实验室安全,是科研平稳进行,稳定社会安全的重要环节。本文以天津理工大学为例,分析了高校材料化学类科研实验室安全现状、前期实施的探索性安全管理措施以及取得的相关成效。

植物ACCase 基因的结构功能及表达调控研究

乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl-CoA carboxylase,ACCase)是催化脂肪酸合成的关键和限速步骤。该文介绍了ACCase的分类及结构特征,阐述了其在脂肪合成代谢中的作用和在除草剂中的应用,分析了它的表达调控及反馈机理,揭示了ACCase基因的克隆及表达鉴定,并展望了ACCase在植物育种中的应用前景。

活性白土中塑化剂含量测定的前处理条件优化

采用溶剂提取活性白土中的3种塑化剂(DBP、DEHP、DINP),提取液经SPE柱净化后,进气相色谱-质谱仪测定。以3种塑化剂的含量为考察指标,对活性白土中塑化剂含量测定的前处理条件进行了单因素实验和正交实验优化。结果表明,活性白土中塑化剂含量测定的最佳前处理条件为:甲醇饱和的正己烷溶液为提取溶剂,提取溶剂用量5 mL(活性白土1 g),提取时间3 min,提取温度20℃。在最佳前处理条件下,活性白土中3种塑化剂DEHP、DINP、DBP的含量分别为3.621、0.004、0.078 mg/kg。

常德市丁玲公园园林树种配置调查与评价

公园是城市绿色植物的集中区,能够提供良好的生活环境和改善城市生态环境。调查了常德市丁玲公园的园林树种配置,丁玲公园主要包括纪念馆景观区、湿地景观、休闲娱乐区、民俗文化街,由47科112属92种园林植物组成。纪念馆景观区采取三色堇、龙柏、桂花、杜鹃等配置,红色、墨绿、浅绿色搭配,立体性、层次性、多样性分布,突出纪念性以及宁静、肃穆的氛围,以拟人化形式表达哀思之情和仰慕之意。湿地景观以水体为主,以乔草及乔灌草搭配层次分布,突出观赏性、生态性,达到生态性、功能性、艺术性、美观性的统一。休闲娱乐区中合欢、杜仲、苏铁、红花檵木、红叶石楠等规则配置,常绿、落叶搭配,季相变化丰富,突出了宜人性、生态性、趣味性和观赏性。民俗文化街以传统民居建筑群和民俗文化长廊为基础,以香樟、银杏、榉树、栀子花等植物为主,乔灌草层次分布,展示了本土文化和地方特色。

生物菌肥对油茶果实性状及产量的影响

以湖南应用技术学院和湖南省慈利县东岳乡北坪村的油茶林为研究对象,设置4处理3重复,在常规施肥基础上,每次用微生物菌剂45L/hm2兑水4500kg/hm2,分别于油茶保果期和果实膨大期灌根。结果表明:在两处油茶试验林地,施用菌肥(处理1)比施用基质(处理2)的单果重、果横径、果纵径、果皮厚度分别增加15.0g与13.5g、6.12mm与4.30mm、3.56mm与3.21mm、0.98mm与0.53mm,鲜籽率提高2.60%和2.27%,鲜果平均产量分别增加9.4%和9.9%;油茶果实性状和产量差异均达到极显著水平。

加强网购餐饮食品卫生安全风险管理措施分析

随着信息时代的发展,人们的日常生活变得更加方便快捷,人们的衣食住行方式发生了天翻地覆的变化,本文将针对加强网购餐饮食品卫生安全风险管理的措施进行分析,提高外卖餐饮的卫生程度,切实保障人们的身体健康。随着人们生活节奏的加快,越来越多的人选择通过网上订购餐饮的形式省去自己做饭的时间,网络订购餐饮能够极大地便利人们的生活,并且为人们节省了大量的时间.

园林苗圃学课程教学改革与实践

园林苗圃学是一门理论性和实践性都很强的园林专业基础课程。该文总结了当前园林苗圃学课程教学中存在的问题,在明确专业特色和人才培养目标的基础上,通过合理调整教学内容、加强实践教学、改革考核制度等措施,激发学生的学习兴趣和积极性,提高其实践技能。

高职环保专业教学和教学管理的现状

伴随生态危机的不断加剧和人们自我意识的增强,高职环保专业教学备受国家关注。在高职院校教育中,加大环保法制宣传及环保教学的重视力度,对更好地建立人与自然的和谐关系以及促进社会经济可持续发展均起到了至关重要的作用。本文围绕高职环保专业教学和教学管理的现状进行了探讨,旨在提升高职环保教学成效,仅供大家参考。

精细化管理在高职院校教学管理中的应用探讨

随着社会的快速发展,高职院校作为我国人才培养的重要基地,受到了越来越多的重视与关注。教学管理工作是高职院校教育教学的主要组成部分,但就目前高职院校管理工作情况而言,仍存在许多不足之处,对教学质量与效率造成了一定的不良影响。而在高职院校教学管理中应用精细化管理,不仅有助于提高院校管理水平,也能推动院校加快发展,实现高职院校立德树人的教学目标。基于此,本文针对精细化管理在高职院校教学管理中的应用进行研究,并提出相关策略,以期为高职院校管理人员提供借鉴。

高校环保教育存在的问题及对策研究

随着经济社会快速发展,社会大众愈加注重环境污染问题,我国各大高校是为国家和社会培养优秀人才的重要场所,身上肩负着环保教育的重大责任。近些年来我国环境污染问题日渐严重,因此,推动高校学生提升环保意识,重视环保教育是当前我国高校教育工作的重中之重,在潜移默化中影响身边人自觉树立环境保护意识,从身边环保小事开始做起,保护人类赖以生存的生态环境,用实际行动防止生态环境遭受污染,营造出一个良好的生存环境。基于此,本文主要阐述高校环保教育中存在问题,并提出相关优化对策,以供相关人士参考。