大鼠慢性铜绿假单胞菌生物膜肺部感染TNF-α的测定及意义

目的:探讨大鼠慢性铜绿假单胞菌(Pa)生物膜肺部感染肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达情况及作用。方法:从大鼠切开的气管内注入0.1mL1012CFU/L藻酸盐包裹的PAO579或浮游PAO579,术后第3、7、14d观察大鼠肺部的细菌学、病理学特点及TNF-α的表达情况。结果:(1)藻酸盐珠组的细菌形成单位(CFU)显著高于浮游菌组(P<0.01);(2)藻酸盐珠组的肺大体病理及炎症反应程度均较浮游菌组严重;(3)藻酸盐珠组的肺TNF-α水平均高于浮游菌组(P<0.01)。回归分析表明,藻酸盐珠组的TNF-α水平与肺大体病理有明显相关性(r=0.78,P<0.05)。结论:TNF-α可能在大鼠铜绿假单胞菌生物膜肺损伤中发挥介导作用。

铜绿假单胞菌生物膜肺部感染大鼠血清IgG抗体及肺部IFN-γ水平的变化

目的了解人工铜绿假单胞菌(PA)生物膜肺部感染对机体免疫功能的影响。方法由支气管内直接注入PA(菌种为PAO579)藻酸盐微粒(1×109CFU/mL),建立慢性PA生物膜肺部感染大鼠模型,以支气管内注入生理盐水作为对照,2周后评估血清PA特异性抗体IgG水平、肺部IFN-γ反应的变化及其与肺组织病理学的相关性。结果 PA感染2周后,PA感染组的血清抗PAIgG抗体水平显著升高(P<0.01),并与其肺部大体观病理指数(LIMP)呈正相关(r=0.89,P<0.05);而肺部IFN-γ水平明显降低(P<0.01),其变化水平与LIMP呈负相关(r=-0.9,P<0.05),镜下观肺病灶内大量多形核白细胞浸润。结论 PA生物膜肺部感染可能通过诱导Th2型免疫反应为主,从而引发以多形核白细胞浸润为主的Ⅲ型变态反应所导致的肺组织损害。

共价键固定抗菌基团聚丙烯的溶出性及抗菌性能实验研究

目的:研究共价键固定抗菌基团聚丙烯的溶出性及抗菌性能。方法:采用改良的高分子抗菌材料溶出性测试方法及抗菌性能实验方法研究共价键固定抗菌基团聚丙烯的溶出性及抗菌性能;使用扫描电镜观察材料表面的细菌形态。用菌落计数方法来评估抗菌效果。结果:①溶出性测试:共价键固定抗菌基团聚丙烯抑菌圈宽度(D)=0。②共价键固定抗菌基团聚丙烯对大肠杆菌ATCC8099,金黄色葡萄球菌ATCC6538,铜绿假单胞菌ATCC27853,白色念珠菌ATCC10231的抗菌率均大于99%。③扫描电镜观察,共价键固定抗菌基团聚丙烯表面黏附的铜绿假单胞菌变形萎缩,细菌出现溶解和死亡。结论:共价键固定抗菌基团聚丙烯属于非溶出型抗菌物质,对大肠杆菌ATCC8099,金黄色葡萄球菌ATCC6538,铜绿假单胞菌ATCC27853,白色念珠菌ATCC10231有较强抗菌作用。

绿原酸对铜绿假单胞菌生物膜干预作用的体外研究

目的研究绿原酸(chlorogenic acid)在体外抑制铜绿假单胞菌(PAE)生物膜(BF)形成的作用;对早期、成熟BF的破坏及其与头孢他啶(CAZ)的协同杀菌作用。方法构建体外PAO1生物膜模型;2倍稀释法测定最低抑菌浓度(MIC);扫描电镜(SEM)观察载体表面BF形态;连续稀释法行活菌计数。结果24 h载体表面PAE黏附量,绿原酸组少于红霉素(ERY)组和空白对照组(P<0.05);SEM观察绿原酸组和ERY组仅见少量散在的游离细菌,而空白对照组可见大量分布均匀的微菌落和游离细菌;建模3 d,SEM观察绿原酸组仅偶见聚集的细菌,菌体间有少量稀薄的黏液样物质,BF规模小于ERY组和空白对照组,建模7 d SEM观察绿原酸组仅见稀少的薄层BF;绿原酸组载体表面活菌计数少于空白对照组和ERY组(P<0.05);对于早期和成熟BF内PAE,绿原酸+CAZ组,载体表面PAE数量明显少于各对照组(P<0.05)。结论绿原酸可以抑制PAE的BF形成,并对早期和成熟BF具有破坏作用,对于BF内PAE与CAZ有协同杀菌作用,并且强于ERY组。

苦参碱对慢性铜绿假单胞菌生物膜肺部感染大鼠的免疫保护作用

目的:探讨苦参碱对慢性铜绿假单胞菌(PA)生物膜肺部感染大鼠的免疫保护作用及其机制。方法:由支气管内直接注入PA(菌种为PAO579)藻酸盐微粒(1×109 CFU/mL),建立慢性PA生物膜感染模型,并于术后第2d开始给予苦参碱注射液(Mat,100mg·kg-1)或灭菌生理盐水(NS)ip,每天1次,连续治疗14d。2周后评估各组的肺部细菌学、病理学、肺部细胞因子白介素(IL-4),干扰素γ(IFN-γ)反应的变化。结果:PA感染2周后,苦参碱可显著减轻肺部大体观病理改变(P<0.001),肺脓肿发生率明显低于模型组(P<0.001)。镜检发现有80%的动物已由急性炎症(以多形核白细胞浸润为主)逆转为慢性炎症(以单个核细胞浸润为主),显著高于模型组的比例(P<0.05);苦参碱治疗组肺组织匀浆PA菌落计数仅为模型组1/20(P<0.001),PA检出率仅为50%(P<0.05),肺部细菌清除速度显著加快;另外,与模型组比较,苦参碱治疗2周后感染动物肺部IL-4水平明显下调(P<0.001),而肺部IFN-γ水平显著升高(P<0.001)。结论:以上结果提示苦参碱能够诱导肺部Th1型免疫反应,加快PA生物膜肺炎大鼠肺部的细菌清除及减轻肺部病理损伤,因而对PA生物膜肺感染大鼠具有免疫保护作用。

密度感应对铜绿假单胞菌运动能力及其生物被膜形成调控的研究

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa，Pa）生物被膜（BF）的形成主要受密度感应（quorum sensing，QS）系统调控，尤其在BF形成早期，QS对P.a泳动、丛集运动和颤搐运动起着非常重要的作用。因此本研究以P．a野生型中PA01菌株及其QS相关基因缺失菌株为实验菌株，检测其泳动、丛集和颤搐运动，测量菌落生长形成的云雾状区域半径，观察菌落生长形态。以无菌1cm×1cm聚氯乙烯气管导管为载体，建立体外P．a静止BF模型，扫描电镜观察载体表面BF。