人精子膜甘露糖结合蛋白的研究

我们运用 Percoll密度梯度离心技术从正常捐精者的精液中分离出成熟精子并使其获能 ,经含 1 %穿通 (Triton) X 1 1 4Tris缓冲液溶解 ,超声粉碎及离心分离后获得人精子可溶性蛋白悬液。随后运用蛋白质亲和层析及 SDS PAGE电泳技术分离人精子可溶性蛋白质 ,经银染后发现 :用山羊抗人巨噬细胞甘露糖受体 (anti macrophage mannosereceptor,AMMR) Ig G包被的 Affi Prep Hz support珠能结合人精子中一种分子量为2 9KD的蛋白质 ,而对照组为正常山羊血清 (normal goat,NG) Ig G包被珠 ,其结果却呈阴性。最后运用精子膜生物素标记及蔗糖密度梯度离心技术进一步标记分离人精子膜可溶性蛋白质 ,证实了这种与 AMMR Ig G结合的蛋白质为甘露糖结合蛋白 ,存在于人精子膜上。精子膜甘露糖结合蛋白可能与精卵识别的起始过程有相当密切的关系。

人精子膜甘露糖结合蛋白的研究——蛋白的定位

作者运用生物素标记的山羊抗人巨噬细胞甘露糖受体 (GoatAnti humanMacrophageMannoseRecep tor ,AMMR)IgG对人获能精子膜上的甘露糖结合蛋白进行定位 ,经激光共聚焦显微镜分析结果显示 :AMMRIgG组阳性率显著高于运用正常山羊 (NormalGoat,NG)IgG的对照组 :AMMRIgG组的阳性率大约在 70 % (6 9.41% )左右 ,而NGIgG组小于 10 % (9.2 4% )。AMMRIgG组中 ,荧光结合部位主要在精子的顶体后区、赤道区及颈部 ,而NGIgG对照组中除少量精子显微弱的荧光外 ,绝大多数呈阴性结果。精子膜上甘露糖结合蛋白的定位研究可能对受精过程中精卵识别机制的了解具有重要意义。