伊曲康唑促进AMPK磷酸化诱发结直肠癌细胞铁死亡的抗癌机制研究

目的探讨伊曲康唑(Itra)促进腺苷酸蛋白激酶(AMPK)磷酸化诱发结直肠癌(CRC)细胞铁死亡的抗癌机制。方法体外培养结肠癌HCT116细胞,并将细胞分为对照组、Itra组、Itra+AMPK抑制剂组(抑制剂组)和Itra+AMPK siRNA干扰组(干扰组);采用MTT法检测细胞存活率,活死细胞染色法检测死亡细胞比例,Western blot法检测AMPK、磷酸化AMPK(p-AMPK)、胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、xCT蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)含量,Hoechst染色法检测细胞凋亡率。结果与0μmol/L组比较,0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、25.0、50.0、100.0μmol/L的Itra处理48 h后,HCT116细胞存活率均明显下降(均P<0.05),IC_(50)为(4.86±1.23)μmol/L。活死细胞染色显示,2.5、5.0、10.0μmol/L的Itra处理48 h后,死亡细胞比例较0μmol/L组均明显增加(均P<0.05)。与0μmol/L组比较,2.5、5.0、10.0μmol/L的Itra处理48 h后,HCT116细胞p-AMPK蛋白表达水平均明显增加(均P<0.05);以5.0μmol/L为Itra的终浓度处理HCT116细胞12、24、48 h后,p-AMPK蛋白表达水平亦明显增加(均P<0.05)。与对照组比较,5.0μmol/L的Itra处理48 h后HCT116细胞内ROS含量及细胞凋亡率均明显增加(均P<0.05),GPX4、xCT蛋白表达水平均明显下降(均P<0.05);与Itra组比较,抑制剂组、干扰组细胞内ROS含量及细胞凋亡率均明显下降(均P<0.05),GPX4、xCT蛋白表达水平均明显增加(均P<0.05)。结论体外研究证实Itra通过激活AMPK信号通路来增加CRC细胞内ROS含量,进而抑制GPX4、xCT蛋白表达,促使铁死亡的发生,最终抑制CRC细胞的增殖。