蜡样芽孢杆菌总蛋白双向电泳方法的建立和优化

目的探索建立有效的蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)蛋白质组双向电泳体系,为进一步揭示其促进氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)产酸的作用机制奠定基础。方法以培养的B.cereus为材料,比较蛋白质制备超声破壁时间、新型细胞裂解液、pH梯度和不同上样量对B.cereus蛋白双向电泳结果的影响。结果与结论采用15 min超声破壁提取B.cereus总蛋白,选用新型蛋白质裂解,用长24 cm、pH 4～7的IPG胶条,采用80μg上样量进行等电聚焦,于60 V 15 min、120 V 6 h条件下进行SDS-PAGE垂直电泳,可以获得背景清晰、重复性好的双向电泳图谱,建立一套用于B.cereus蛋白质组分析的双向电泳方法。