胶体金免疫层析技术在食品检测中的应用

主要介绍免疫层析技术和胶体金标记技术的原理及其在食品安全与质量控制方面的应用,并对其将来的发展方向进行了探讨。

食品中单核细胞增多李斯特菌的快速检测

单核细胞增多李斯特菌是一种能引起人畜共患病和食源性疾病的致病菌。本文简述了单增李斯特菌的特性和毒力因子,介绍了从分子生物学和免疫学发展起来的核酸探针杂交、PCR、ELISA、免疫传感器等快速检测方法。这些快速检测方法与传统检测方法相比不仅缩短了检测时间,提高了检测效率,还提高了检测方法的灵敏度和特异性,对于单增李斯特菌的检测具有良好的应用前景。

双重PCR检测食品中的动物源性成分

建立了一种检测肉制品中动物源性成分的双重PCR技术,针对五种不同动物线粒体DNA中所含有的特异性基因分别设计引物,同时对脊椎动物所共有的保守基因进行引物设计,并将其作为体系中的内参照。用此技术可同时检测出肉制品中5种动物源性成分,检测灵敏度达到1%,能够适应市场化检测的需要。

双歧杆菌完整肽聚糖对实验性胃癌抑制作用的研究

为研究双歧杆菌完整肽聚糖(WPG)对实验性胃癌生长的抑制作用,从两歧双歧杆菌中提取完整肽聚糖,以人胃癌裸鼠移植瘤为动物模型,观察不同浓度WPG对移植瘤生长的抑制情况,绘制肿瘤生长曲线,HE染色观察WPG对移植瘤组织形态的影响。结果显示,WPG低、中、高剂量组移植瘤的生长速度、平均瘤重均明显低于阴性对照组,抑瘤率分别为62.50%、67.87%和87.50%,与阳性对照(5-氟脲嘧啶)组相比无显著性差异(P>0.05)。HE染色结果显示,WPG组移植瘤中普遍存在不同程度的坏死。结果表明,双歧杆菌WPG能抑制裸鼠体内胃癌的生长,为开发新型高效、低毒的抗肿瘤药物提供试验依据。

SYBR Green I荧光定量PCR检测乳中携带sea基因金黄色葡萄球菌的研究

金黄色葡萄球菌是引起食物中毒的一种常见的致病菌,而其产生的肠毒素A是乳及乳制品食物中毒事件的主要原因。本研究建立了SYBR Green I荧光定量PCR方法对乳中携带sea基因的金黄色葡萄球菌进行检测。该方法能快速、稳定地在8h内完成对乳中金黄色葡萄球菌的检测,对人工污染乳中金黄色葡萄球菌检测的最低检出限为83CFU/ml。

实时RT-PCR检测存活于乳中的单核细胞增多性李斯特菌

单增李斯特菌是一种可在低温下生长、能引起人畜共患病的食源性致病菌。为克服传统PCR检测的假阳性问题,有效的检测单增李斯特活菌,本研究提取单增李斯特菌的总RNA并进行反转录,以单增李斯特菌的必要毒力基因hlyA为靶基因,设计特异性引物和TaqMan探针进行实时PCR检测,研究了检测的特异性和灵敏度,考查了对人工污染牛乳进行检测的应用性。结果表明,所用引物和探针能较好的扩增目的基因,而对其他食源性致病菌无交叉反应。单增李斯特菌经1h增菌,可检出3×102CFU/ml。而经3h增菌,活菌检测限可达30CFU/ml。人工污染牛乳样品经6h增菌,检测限为17CFU/ml。此方法可应用于乳中单增李斯特菌的快速检测和污染状况调查。

不同中药提取物对小鼠乳腺上皮细胞β-酪蛋白表达的影响

为探讨中药对小鼠乳腺上皮细胞泌乳功能的影响,选取5种与泌乳相关的中药(王不留行、甲珠、通草、蒲公英、漏芦)研究其对体外培养的小鼠乳腺上皮细胞β-酪蛋白表达的影响。采用荧光定量RT-PCR及毛细管电泳技术分别对β-酪蛋白的mRNA和蛋白表达水平进行检测,并应用激光共聚焦显微镜技术检测泌乳信号转录因子Stat5的含量变化。结果表明,通草、蒲公英和漏芦能显著促进β-酪蛋白的表达,王不留行和甲珠能极显著促进小鼠乳腺上皮细胞β-酪蛋白的表达。提示王不留行、甲珠和通草可通过影响乳腺上皮细胞乳蛋白基因的表达而促进泌乳,其机理尚待进一步研究。

酪蛋白源降血压肽稳定性及其抑制作用机理的研究

酪蛋白源降血压肽经体外胃肠道蛋白酶消化后,其ACE抑制活性仍能保持原来活性的94%。降血压肽与ACE作用前后,其ACE抑制活性和肽谱基本保持不变,证实了酶解乳蛋白源降血压肽是真正的抑制剂类型,不受ACE作用。采用抑制酶解动力学方法,初步探讨降血压肽的抑制作用机理,根据lineweaver-Burk方程,确定酶解酪蛋白源降血压肽是非竞争性抑制类型。

RT-PCR检测金黄色葡萄球菌肠毒素A基因

金黄色葡萄球菌是引起细菌性食物中毒的重要病源菌之一,尤其是肠毒素。国内外由金黄色葡萄球菌肠毒素引发的食物中毒屡屡发生。目前,国内检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素仍采用传统的方法,其操作繁琐、检测时间较长,通常需要3-5 d才能完成,且灵敏度较低。本研究缩短食品中金黄色葡萄球菌肠毒素的检测时间,针对PCR检测的灵敏性、特异性,建立了检测金黄色葡萄球菌肠毒素的方法,为检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素提供了技术支持。分别采用TRIZol法和热酚法提取金黄色葡萄球菌总RNA并进行比较研究,在此基础上反转录获得cDNA,用特异引物对sea基因进行扩增,并优化PCR反应条件,获得理想的sea基因阳性扩增条带。结果表明,热酚法在总RNA提取方面优于TRIZol法,改进PCR反应时间和循环次数,最终初步建立RT-PCR检测金黄色葡萄球菌A基因的方法。

β-半乳糖苷酶研究进展

随着生物技术的发展,β-半乳糖苷酶不仅在食品工业中的用途越来越广泛,在生物技术领域如基因工程、酶工程、蛋白质工程等方面也都发挥着重要作用,并开始广泛应用于医药等领域。文章对β-半乳糖苷酶的性质、来源、作用机理、应用情况等进行概述,着重介绍了β-半乳糖苷酶在研究上的新进展和应用上的一些新领域。

原料乳中多种致病菌的快速过滤富集及多重PCR检测

针对目前原料乳中致病菌的检测方法繁琐费时耗力的缺点,建立一种能同时检测原料乳中多种致病菌的快速检测方法,采用多重PCR快速灵敏检测技术与一种不需要预增菌就可以直接从原料乳中快速过滤富集菌体的技术相结合来同时检测原料乳中主要致病菌——沙门氏菌、大肠杆菌O157:H7、金黄色葡萄球菌、单增李斯特氏菌和蜡样芽孢杆菌。整个过程只需7～8h即可完成,且检测灵敏度可达102cfu/mL。这种方法是对传统检测方法的有效改进,并且达到了原料乳检测快速、准确、灵敏的要求。

大豆发芽过程中抗营养因子的变化

大豆蛋白存在着胰蛋白酶抑制因子和凝集素等抗营养因子,影响人类对其的利用。文中采用分光光度法和免疫火箭电泳法测定了发芽过程中东农42、东农823、71434、40567、黑农40五个大豆品种中胰蛋白酶抑制因子和凝集素的含量变化。结果发现:发芽能明显改变大豆中抗营养因子的含量,不同品种的抗营养因子变化程度不同,5种大豆在发芽过程中显示出较为一致的总体趋势。发芽温度对大豆中胰蛋白酶抑制因子的含量有影响。证实在萌发的大豆中存在可失活大豆抗营养因子的内源酶。

大豆发芽过程中抗氧化活性研究

采用分光光度法测定了发芽过程中东农42、东农48、东农44、东农36号4种大豆的甲醇提取液对2,2二-苯代苦味肼基(DPPH)自由基的清除作用及其总酚和总酮类物质的含量,结果发现,4种大豆在发芽过程中显示出较为一致的总体趋势,在发芽的第1d和第4d,IC50出现两个极小值,平均为2.5mg/mL,抗氧化能力提高显著;总酚类物质含量出现两个极大值,其含量与抗氧化能力正相关;黄酮类物质含量增加显著,明显高于对照组。结果表明,食用发芽1d或4d的大豆制品对人体健康更有益处。

促熟干酪的非发酵剂乳酸菌筛选及其对干酪浆模型蛋白质降解的研究

从中国传统发酵食品酸菜中分离筛选促进干酪成熟的非发酵剂乳酸菌,并研究其对干酪浆蛋白质降解的影响。应用ROGOSA琼脂从东北农家酸菜中分离菌株,采用多元统计分析法进行复筛,通过16S rDNA基因序列分析鉴定筛选菌株,最后研究筛选菌株对干酪浆蛋白水解特性的影响。结果表明:从酸菜中筛选出一株可以促进干酪成熟的非发酵剂乳酸菌S-1,经16S rDNA基因序列分析鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum subsp.plantarum ST-Ⅲ),此菌株产酸能力低,具有较高的自溶度与氨肽酶活力,在干酪浆模型成熟过程中表现出较强的蛋白水解能力。

两株植物乳杆菌作为潜在益生菌的体外评价

采用体外试验方法,评价两株植物乳杆菌KLDS1.0391与KLDS1.0706作为益生菌的潜在能力,包括对酸和胆盐的抗性、免疫活性以及安全性评价。采用活菌计数法测量其在低酸和胆盐条件下耐受性,采用MTT法观察不同剂量活性和热致死乳杆菌对小鼠脾脏淋巴细胞增殖能力影响,采用哥伦比亚血平板测定两株植物乳杆菌溶血性,采用K-B药敏纸片法测定其抗生素抗性。结果表明,两株植物乳杆菌均对酸和胆盐有较好耐受性;活性、热致死植物乳杆菌均能促进体外小鼠淋巴细胞增殖,表现出剂量依赖关系,活性植物乳杆菌作用效果较热致死乳杆菌更为明显;两株植物乳杆菌均无溶血性,对万古霉素与链霉素具有抗性。

超滤法分离酪蛋白酶解物中的ACE抑制肽

采用不同截留分子质量的超滤膜对酪蛋白酶解物中ACE抑制肽进行初步分离,确定了超滤的条件,并测定超滤前后酶解物的ACE抑制活性。结果表明,截留分子质量为10 ku和3 ku的超滤膜能不同程度地提高酪蛋白酶解物的ACE抑制活性,但3 ku的超滤膜能更有效地提高其ACE抑制活性,并且超滤液半抑制浓度值(IC50)为0.46 mg/mL。证明超滤技术可作为一种分离ACE抑制肽的手段。

乳杆菌对原代淋巴细胞中Th1/Th2细胞平衡的影响

目的:分析7种乳杆菌对原代淋巴细胞增殖和细胞因子(CK)分泌的作用,进而探讨其对Th1/Th2细胞平衡的影响。方法:用不同种属、不同浓度的活的/热致死的乳杆菌体外作用于小鼠脾淋巴细胞培养60 h后,采用MTT比色法检测淋巴细胞的增殖效果。用ELISA法检测Th1型细胞因子(IL-12、IFN-γ)、Th2型细胞因子(IL-4、IL-10)和调节型细胞因子(TGF-β)的分泌量。结果:活的/热致死的乳杆菌单独作用,就能促进淋巴细胞体外增殖并表现出剂量依赖关系(P<0.05)。当菌的浓度为107集落形成单位(CFU)/mL(即细菌与细胞的比例为10∶1)时,热致死的发酵乳杆菌和嗜酸乳杆菌的免疫活性近似于活菌。而且,这两株热致死菌还可适当提高淋巴细胞分泌IL-12和IFN-γ,抑制IL-4、IL-10和TGF-β的分泌,使其IFN-γ/IL-4的比值(代表Th1/Th2细胞平衡)均显著高于刀豆蛋白A(ConA)对照组(P<0.05)。结论:乳杆菌可通过提高淋巴细胞的IFN-γ/IL-4分泌率来促进Th1优势状态的Th1/Th2细胞平衡,并具有菌株特异性。

产蛋氨酸益生菌的筛选和鉴定

由于益生菌产蛋氨酸的特性有利于益生菌发酵食品的开发利用,从发酵食品的酸面团、米酒、白酒曲,以及实验室提供的菌种中分离纯化出48株菌株。将这些菌株进行纯化培养,利用高效液相色谱检测各菌株发酵液中蛋氨酸的含量,筛选出蛋氨酸含量相对较高的2株菌。利用16SrDNA扩增及Blast分析、特异性引物PCR等技术鉴定这2株菌,分别为纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp).,两株菌发酵液中蛋氨酸分别为21.08、19.38g·L-1。

类黄酮化合物抗癌活性研究与进展

天然食物中的生物活性物质在人类疾病的预防和治疗中发挥重要作用,其中类黄酮化合物的抗癌活性受到不同领域科学家的广泛关注。通过归纳总结近年来有关类黄酮化合物在流行病学、分子机制以及构效关系等方面的研究进展,评述此类化合物的抗癌活性。

玉米须保健乳清蛋白饮品的研究

利用生物酶技术提取玉米须中的黄酮和多糖等功效组分,与乳清蛋白、苦瓜以及木糖醇等功能性原料,经科学调配而加工成玉米须保健乳清蛋白饮品。采用混料实验设计,优化出保健乳清蛋白饮品的基本配方为玉米须提取液添加量38.33%,乳清蛋白液添加量38.34%,苦瓜汁添加量23.33%。采用单因素实验设计,以感官评价为指标,确定该饮品中β-环状糊精添加量0.12%,柠檬酸添加量0.01%,木糖醇添加量3%。以沉淀率为检测指标,确定该饮品中的最佳稳定剂组合为CMC和刺槐豆胶,其添加量分别为0.15%和0.15%。