瘦素诱导乳腺癌细胞的凋亡抵抗及其分子机制

目的观察瘦素对乳腺癌细胞凋亡的影响，并探讨其分子机制。方法采用TransAM酶联免疫吸附法（ELISA）检测瘦素对乳腺癌细胞T47D凋亡的影响，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞毒性，并测定T47D细胞caspase-9的活性。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blot法测定瘦素对T47D细胞survivin mRNA和蛋白表达水平的影响。采用RNA干扰技术沉默信号转导和转录激活因子3（STAT3）基因，并采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot法测定瘦素对沉默STAT3基因后T47D细胞survivin mRNA和蛋白表达水平的影响。结果瘦素可以促进人乳腺癌细胞T47D的增殖，增殖抑制率为63．6％；减少多西他赛诱导的细胞凋亡，达31．9％。不同浓度瘦素均可促进T47D细胞survivin mRNA的表达，其中以10nmol／L时作用最明显。10nmol／L瘦素作用60min后，T47D细胞中survivin mRNA的表达量是瘦素作用前的4．6倍；作用2h后，T47D细胞中survivin蛋白的表达增强。将STA33小干扰RNA（siRNA）转入T47D细胞30min后，survivin mRNA表达的变化倍率为0．55±0．15。经瘦素处理后，STAT3 siRNA质粒转染组和空质粒对照组survivin mRNA表达的变化倍率分别为0．56±0．18和1．61±0．22。将STArl3siRNA转入Tg7D细胞后，survivin蛋白表达下降。经瘦素处理后，转染空质粒的细胞survivin蛋白的表达增加，而转入STAT3 siRNA的细胞survivin蛋白无明显变化。结论在乳腺癌T47D细胞中，瘦素／STAT3信号通路是上调survivin表达的有效途径。