COMT基因多态性与乳腺癌发生及发展相关性探讨

目的:探讨与雌激素灭活相关的基因儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)基因多态性与乳腺癌发生及发展的关系。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析技术,对200例乳腺癌及100例正常乳腺组织的COMT基因第4外显子第158密码子G/A(Val/Met)多态性进行分析,采用免疫组织化学法检测乳腺癌组织ER、PR、p53及c-erbB-2蛋白的表达。比较各组中各种基因型分布频率的差异,以及各种基因型与乳腺癌预后相关因素间的关系。结果:乳腺癌患者COMT纯和变异基因型发生率显著高于对照组(P=0.0267)。随着乳腺癌临床分期(P=0.0082)、组织学分级(P=0.0146)的升高及淋巴结转移数目的增加(P=0.0387),变异性基因型所占比例明显增大。在肿瘤组织ER阳性的患者中,COMT基因型与临床分期(P=0.0004)、组织学分级(P=0.0116)及淋巴结转移(P=0.0008)间关系的差异更加显著。结论:Met/Met变异基因型与乳腺癌危险性相关;具有低活性COMT等位基因(COMT-LL及COMT-HL)的乳腺癌患者与高临床分期、高组织学分级以及淋巴结转移多等预后不良的因素相关。

Cripto-1蛋白在乳腺癌中的表达和预后意义

目的:研究具有促进上皮间质转化作用的Cripto-1蛋白在乳腺癌中的表达及意义。方法:采用免疫组织化学LSAB法检测205例乳腺癌标本中Cripto-1、E-cadherin(E-CD)及β-catenin的表达,并分析Cripto-1蛋白与E-CD及β-catenin的关系,同时分析Cripto-1蛋白与临床病理学特征、复发转移及生存时间的关系。结果:Cripto-1蛋白表达于癌细胞质,阳性表达率为82.9%(170/205),其表达与病理组织学分期(r=0.418,P=0.000)、HER2/neu(r=0.223,P=0.001)、淋巴结转移个数(r=0.293,P=:0.000)、淋巴结外软组织癌浸润(r=0.206,P=0.003)、肿瘤远处转移(r=0.273,P=0.000)呈正相关;而与ER、PR表达及年龄无明显相关性;在179例浸润性导管癌中Cripto-1蛋白的表达与其组织学分级(r=0.194,P=0.009)呈正相关;E-CD表达在肿瘤细胞膜,而β-catenin除了表达在细胞膜外还表达在细胞质。Cripto-1的表达与E-CD呈明显负相关(r=-0.324,P=0.000),而与β-catenin在胞质中的表达呈明显正相关(r=0.412,P=0.000);Mann-Whitney检验结果显示Cripto-1蛋白在淋巴结阳性组的表达明显高于阴性组(Z=-3.465,P=0.001);在远处转移组的表达明显高于无远处转移组(Z=-3.899,P=0.000);Kaplan-Meier生存分析结果显示Cripto-1蛋白的表达程度与患者的生存率呈明显负相关(P<0.05);Cox-Regression证明Cripto-1蛋白的表达是乳腺癌独立的预后因素(HR=2.353)。结论:Cripto-1蛋白可能通过EMT促进乳腺癌的侵袭和转移,其表达与乳腺癌的侵袭、转移密切相关,是导致预后不良的重要因素之一,可作为乳腺癌的独立预后因子。

Girdin蛋白调控恶性胶质瘤细胞凋亡的研究

目的观察抑制恶性胶质瘤LN229细胞中Girdin蛋白的表达对细胞凋亡的影响，并探讨其分子机制。方法利用小RNA干扰（siRNA）技术，沉默LN229细胞中Girdin的表达，得到实验组克隆（siardin／LN229），阴性对照组命名为scr／LN229。采用Westemblot技术检测Girdin、细胞色素c（Cyt—C）及Bad蛋白水平的变化。利用增殖实验、噻唑蓝（MTT）比色法检测LN229细胞的存活率；应用流式细胞术检测线粒体释放的Cyt—C量的变化。建立成瘤模型（每组20只），观察Girdin降表达对移植瘤生长情况的影响。结果siRNA技术有效沉默了LN229细胞中Girdin的表达。增殖实验显示siGirdin／LN229细胞增殖能力下降（P〈0．05），至第6天时实验组细胞数为（15．08±1．17）×10^4；对照组为（53．93±6．26）×10^4。MTr实验发现siGirdin／LN229细胞的存活率明显下降（P〈0．05），第5天时实验组为（323．15±57．01）％；对照组为（640．67±59．66）％。流式检测显示siGirdin／LN229细胞Cyt—C含量增加，平均荧光强度为12531．00±1412．98，对照组为183．67±41．55（P〈0．01）。分析Westernblot结果显示，siGirdin／LN229细胞Cyt—C、Bad的相对灰度值分别为3．57±0．43和4．78±1．03，均高于对照组Cyt—C、Bad的表达水平（相对灰度值分别为1．13±0．11、1．78±0．20）。体内实验证实Girdin降表达组肿瘤体积明显小于对照组（P〈0．05），至第7．5周时，siGirdiir／LN229组肿瘤体积为（36．42±2．00）mm3，对照组为（262．42±24．12）mm3。结论Girdin能够调控胶质瘤细胞LN229的凋亡，其调节细胞凋亡的机制可能与Cyt—C从线粒体释放及Bad的表达有关。

水通道蛋白4调控恶性胶质瘤细胞凋亡的研究

目的观察抑制胶质瘤细胞LN229中水通道蛋白4（AQP4）的表达对胶质瘤细胞凋亡的影响，探讨其分子机制。方法利用小RNA干扰（siRNA）技术稳定转染恶性胶质瘤细胞株LN229并得到细胞克隆（实验组siAQP4／LN229和对照组scr／LN229），Westernblot技术检测AQP4的蛋白表达；噻唑蓝（MTr）比色法检测细胞的存活率；流式细胞术（FCM）检测细胞色素C（Cyt—C）含量的变化．并用Westernblot检测Cyt—C、bcl-2及Bad的变化。建立裸鼠皮下成瘤模型，接种siAQP4／LN229和ser／LN229两组细胞（每组20只），观察AQP4降表达对移植瘤生长的影响。结果稳定转染LN229筛选出AQP4降表达的稳定克隆（clone2），与对照组比较AQP4的表达明显降低，MTr比色法分别检测在6d内两组细胞的存活率，第6天存活率分别为：scr／LN229组（587．00±4．68）％，siAQP4／N229组（317．00±26．30）％，差异有统计学意义（P〈0．05）；应用流式细胞术检测发现Cyt-C的平均荧光强度分别为scr／LN229组（57．20±16．64），siAQP4／LN229组（468．80±46．90），差异有统计学意义（P〈0．05）；在蛋白水平上，siAQP4／LN229组Cyt—C含量的相对灰度值（1．62±0．16）较scr／LN229组（0．83±0．29）显著升高，siAQP4／LN229组Bad含量（1．30±0．24）较scr／LN229组（0．56±0．21）显著增加，而siAQP4／LN229组bcl-2含量（0．53±0．03）较scr／LN229组（0．73±0．12）的表达明显降低（P〈0．05）。裸鼠皮下成瘤实验显示第6周时，成瘤平均体积分别为对照组（402．67±34．27）mm3，实验组（65．15±32．12）mm。，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论AQP4能够调控胶质瘤细胞LN229的凋亡，其调节机制可能与Cyt—C的释放及凋亡相关基因Bad和bcl-2有关。