Girdin蛋白调控恶性胶质瘤细胞凋亡的研究

目的观察抑制恶性胶质瘤LN229细胞中Girdin蛋白的表达对细胞凋亡的影响，并探讨其分子机制。方法利用小RNA干扰（siRNA）技术，沉默LN229细胞中Girdin的表达，得到实验组克隆（siardin／LN229），阴性对照组命名为scr／LN229。采用Westemblot技术检测Girdin、细胞色素c（Cyt—C）及Bad蛋白水平的变化。利用增殖实验、噻唑蓝（MTT）比色法检测LN229细胞的存活率；应用流式细胞术检测线粒体释放的Cyt—C量的变化。建立成瘤模型（每组20只），观察Girdin降表达对移植瘤生长情况的影响。结果siRNA技术有效沉默了LN229细胞中Girdin的表达。增殖实验显示siGirdin／LN229细胞增殖能力下降（P〈0．05），至第6天时实验组细胞数为（15．08±1．17）×10^4；对照组为（53．93±6．26）×10^4。MTr实验发现siGirdin／LN229细胞的存活率明显下降（P〈0．05），第5天时实验组为（323．15±57．01）％；对照组为（640．67±59．66）％。流式检测显示siGirdin／LN229细胞Cyt—C含量增加，平均荧光强度为12531．00±1412．98，对照组为183．67±41．55（P〈0．01）。分析Westernblot结果显示，siGirdin／LN229细胞Cyt—C、Bad的相对灰度值分别为3．57±0．43和4．78±1．03，均高于对照组Cyt—C、Bad的表达水平（相对灰度值分别为1．13±0．11、1．78±0．20）。体内实验证实Girdin降表达组肿瘤体积明显小于对照组（P〈0．05），至第7．5周时，siGirdiir／LN229组肿瘤体积为（36．42±2．00）mm3，对照组为（262．42±24．12）mm3。结论Girdin能够调控胶质瘤细胞LN229的凋亡，其调节细胞凋亡的机制可能与Cyt—C从线粒体释放及Bad的表达有关。