惠阳胡须鸡IFN-α基因的克隆 表达和重组蛋白的抗病毒活性圆二色性分析

IFN-α是一种具有很强抗病毒活性的细胞因子。从惠阳胡须鸡肝脏克隆了IFN-α基因,为新的亚型。将IFN-α成熟肽与毕赤酵母pPICZαA连接,经酶切鉴定、PCR鉴定和测序后确定目的基因无突变并且插入方向正确,将重组质粒转化到GS115中,阳性转化子经甲醇诱导表达,获得了高效分泌表达,重组IFN-α分子量约为35kD,表达量达到了0.307mg/ml,在CEF/VSV细胞系上的抗病毒活性为3.2×106U/mg。圆二色实验结果表明IFN-α重组蛋白中含有53.2%α螺旋、3.1%β折叠、10.6%转角和33.1%无规谱卷曲,属于全α型蛋白。结果表明,采用毕赤酵母分泌表达了有活性的鸡IFN-α,并首次证实鸡IFN-α属于全α型蛋白。