复制缺陷型腺病毒为载体的Math1基因内耳应用安全性研究

目的研究以复制缺陷型腺病毒为载体的Math1基因内耳应用的安全性。方法将10只成年Wistar大鼠分为正常对照组和缺失E1、E3基因片段且构建有Math1基因和绿色荧光蛋白报告基因的复制缺陷型腺病毒(adenovirus-Math1-enhanced green fluorescence protein,Ad-Math1-EGFP)前庭阶导入组(实验组),每组5只,实验组大鼠在右耳通过耳蜗底回前庭阶打孔的方法导入物理滴度为2.1×1011v.p/ml的上述腺病毒5μl,对照组大鼠不做任何处理。7天后对动物进行颈髓硬膜外短声诱发电位(click-evoked potentials on the surface of the cervical dura mater,CDM-CEP)、听性脑干反应(ABR)阈值检测和游泳试验,评价前庭和耳蜗功能,然后将动物处死进行组织形态学观察。结果Ad-Math1-EGFP导入7天后,实验组大鼠前庭及耳蜗的毛细胞及纤毛均未见破坏,形态正常。短声刺激下,对照组大鼠CDM-CEP的阈值为85±3.54dBSPL,ABR阈值为37±4.47dBSPL;实验组大鼠CDM-CEP的阈值为89±6.52dBSPL,ABR阈值为40±3.54dBSPL;对照组大鼠的游泳时间为4.0±0.71s,实验组为5.0±0.71s,两组之间比较差异均无统计学意义。结论携带Math1基因的复制缺陷型腺病毒对前庭和耳蜗毛细胞是安全的,可以作为基因导入的理想载体。

耳蜗火棉胶包埋冰冻切片技术的应用

目的通过改进耳蜗火棉胶切片技术,比较传统火棉胶切片和耳蜗火棉胶包埋冰冻切片技术,为耳科实验室制作高质量火棉胶切片,获得高质量耳蜗组织形态学图片提供方法。方法将豚鼠耳蜗组织进行常规的梯度酒精脱水、梯度火棉胶浸润、12%的火棉胶固定制作成火棉胶组织块,然后平行于蜗轴沿耳蜗侧面切取一个平面,将耳蜗其它组织修掉使得火棉胶包埋块成为一个长方体。用OCT将火棉胶组织块固定在冰冻切片机上,进行连续切片。结果用火棉胶将耳蜗包埋成块,OCT固定冰冻切片机的模具上进行切片。不用火棉胶切片机切片,同样可以获得传统火棉胶切片方法所获得的制片质量,并且具有切片效果良好、组织切片完整、厚薄均匀、不易形成皱折等优点。还可以减少火棉胶切片的费用开销,便于耳蜗火棉胶包埋制片技术的推广和应用。结论耳蜗火棉胶包埋冰冻切片技术是耳科实验室制作高质量耳蜗火棉胶切片,获得高质量耳蜗组织形态学图片简便有效的方法。

外伤性鼓膜穿孔早期贴膜修补术125例疗效观察

外伤性鼓膜穿孔属于耳鼻喉科常见急诊病种。由于鼓膜的再生能力较强，传统采取自然干燥方法，观察4周仍然不愈者才考虑行鼓膜修补术。实践证明，早期干预能够提高穿孔治愈率。本科在耳内镜和显微镜下利用鸡蛋内膜贴补方法治疗外伤性鼓膜穿孔，效果良好且可靠，现报告如下。

舌根悬吊治疗伴有舌后坠阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征的疗效观察

目的：评估悬雍垂腭咽成形术（ UPPP）联合Reposes系统舌根悬吊治疗伴有舌后坠阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（ OSAHS）的可行性和临床效果。方法回顾分析本科2010年7月～2012年12月行UPPP联合 Reposes 系统舌根悬吊治疗的14例伴有舌后坠 OSAHS 患者的临床资料。结果治愈3例（21．4％）、显效10例（71．4％）、有效1例（7．1％）。术前平均呼吸暂停低通气指数（ AHI）为50．7±19．4，术后平均AHI 为8．1±4．5（P＜0．05）；术前平均最低血氧饱和度（LSaO2）为66．6％±7．7％，术后平均LSaO2为78．6％±7．4％（P＜0．05）；术前Epworth 嗜睡量表（ESS）平均评分为（16．9±1．8）分，术后ESS平均评分为（8．3±2．4）（P＜0．05），差异均有统计学意义。主观症状均明显改善，术后1个月随访，未出现反流、吞咽及说话困难。结论 UPPP联合Reposes系统舌根悬吊治疗后，患者AHI、LSaO2及ESS指标均改善明显，该联合术式可作为治疗伴有舌后坠OSAHS的一个选择。（中国眼耳鼻喉科杂志，2015，15：13-15）

咽侧壁成形术联合软腭低温等离子消融治疗重度阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征

目的探索咽侧壁成形术联合软腭低温等离子消融治疗重度阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(obstructive sleep apnea hypopnea syndrome,OSAHS)的可行性和临床效果。方法收集整理我科2011年4月~2012年12月行咽侧壁成形术联合软腭低温等离子消融的21例重度OSAHS患者临床资料,并进行回顾性分析。结果治愈1例(5%),显效19例(90%),有效1例(5%),无效0例。术前平均呼吸暂停低通气指数(AHI)为(54.2±15.7)次/h,术后平均AHI为(8.3±2.8)次/h(t=-9.631,P<0.05);术前平均最低动脉血氧饱和度(lowest Sa O2,LSa O2)为(66.6±6.4)%,术后平均LSa O2为(78.6±5.6)%(t=4.689,P<0.05);术前Epwor t h嗜睡量表(Epwor t h sleepi ness score,ESS)平均评分为17.0±1.5,术后E S S平均评分为7.6±2.2(t=-11.376,P<0.05)。主观症状均明显改善,术后1个月随访未出现反流及吞咽困难。结论咽侧壁成形术联合软腭低温等离子消融术后患者AHI、LSa O2及ESS指标均改善明显,咽侧壁成形术联合软腭低温等离子消融可以作为治疗重度OSAHS的一个选择。

Toll样受体2和4在小鼠肺炎链球菌中耳急性感染中的作用

目的 探讨Toll样受体2（Toll-like receptor 2,TLR2）和Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）在小鼠肺炎链球菌中耳感染中的作用.方法 野生型（wild type,WT）C57BL/6J小鼠、TLR2缺陷（TLR2-/-）和TLR4缺陷（TLR4-/-）小鼠分别通过中耳鼓膜接种肺炎链球菌悬液[1×106菌落形成单位（colony forming unit,CFU）].在细菌接种前、接种后第3天和第7天分别进行听性脑干反应（ABR）和鼓室声导抗测试,血液及中耳积液中细菌滴度测定,颞骨病理切片形态学观察,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测不同基因型小鼠炎性细胞因子IκB激酶β（IκB kinase β,IKKβ）、核因子κB（NF-κB）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、巨噬细胞炎性蛋白1α（MIP-1α）、黏蛋白/黏液素5AC和5B（MUC5AC和MUC5B）mRNA的表达.结果 中耳接种肺炎链球菌3d后,TLR2-/-小鼠死亡率为58.8％（40/68）,TLR4-/-小鼠死亡率为35.6％（21/59）,而WT小鼠的死亡率仅为17.3％（9/52）.接种7d后,TUR2-/-小鼠死亡率为82.4％（54/68）,TLR4-/-小鼠死亡率为54.2％（32/59）,而WT小鼠的死亡率仅为23％（12/52）,三组之间差异具有统计学意义（P＜0.01）.ABR测试结果显示,接种后存活3d及7d的TLR2-/-和TLR4-/-小鼠ABR阈值高于WT小鼠,三组之间的差异具有统计学意义（P＜0.01）.颞骨病理发现,TLR2-/-和TLR4-/-小鼠接种肺炎链球菌后第3天中耳出现积液和组织破坏,接种后第7天感染极为严重.TLR2-/-鼠出现严重的耳蜗炎性细胞浸润,内外毛细胞破坏、盖膜肿大和血管纹退变,以及螺旋神经节细胞的损伤；TLR4-/-鼠可见耳蜗内外毛细胞和螺旋神经节细胞的损伤；而WT鼠的耳蜗未见炎性细胞浸润和组织破坏,内外毛细胞基本正常.在接种细菌3d和7d的TLR2-/-鼠中耳黏膜未发现肥大细胞,但在TLR4-/-和WT鼠中耳黏膜发现较多的肥大细胞并有脱颗粒现象.接种肺炎链球菌后3d和7d的TLR2-/-和TLR4-/-小鼠血液中细菌滴度均高于WT小鼠,差异具有统计学意义（P值均＜0.05）.接种肺炎链球菌3d后,TLR2-/-小鼠听泡组织中NF-κB、TNFα、IL-1β、MIP-1α、MUC5AC、MUC5B等因子的mRNA表达水平低于TLR4-/-和WT小鼠,差异具有统计学意义（P值均＜0.05）.结论 TLR2-/-鼠在肺炎链球菌激惹后产生相对低水平的致炎性细胞因子,中耳清除细菌能力下降,引发脓毒血症,导致高死亡率.TLR2和TLR4是2种重要的小鼠中耳炎性反应的受体和信号转导分子.

RNA干扰研究进展

RNA干扰（RNA interference,RNAi）是转录后调控的一种重要途径,近年来其成为功能基因组学、微生物学、基因表达调控机制领域研究的热点,已经成为一种新型的基因沉默方法,其中尤以非编码RNA中的小干扰RNA （small interfering RNA）与微小RNA（microRNA）的研究日益受到重视.本文从RNAi技术的发展、作用机制、生物学特性及应用等方面进行综述.