人外周血来源树突状细胞诱导培养及鉴定的实验研究

目的探讨树突状细胞(DC)体外培养的方法。方法用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、重组人白细胞介素4、重组人肿瘤坏死因子α等细胞因子自外周血单个核细胞诱导分离DC,流式细胞仪检测其表面标志,四氮唑蓝法测定其刺激同种异体淋巴细胞增殖能力。结果体外培养第10天,大量细胞出现典型的树突状形态;流式细胞仪检测高表达CD80、CD86、CD83、CD40、CD1a、人白细胞DR抗原;在体外能强烈刺激同种异体混合淋巴细胞增殖反应。结论该方法可获得较高纯度典型的DC,为DC的临床免疫治疗提供实验依据。

含CpG寡脱氧核苷酸增强人肺癌细胞株A549放射敏感性的研究

目的探讨含CpG基序的寡脱氧核苷酸对人肺癌细胞株A549放射敏感性的影响。方法分别用不同浓度CpG ODN处理A549细胞,经β射线照射后,检测细胞增殖和集落形成情况,ELISA法检测细胞TNF-α、IL-12和INF-γ的分泌水平,G riess检测细胞NO的含量。结果 CpG ODN抑制A549细胞的增殖,并呈量效关系。CpG ODN(10μg/m l)联合β射线照射,抑制A549细胞的增殖作用最强,且增加了TNF-α、IL-12、INF-γ和NO的分泌。结论 CpG ODN对A549细胞有明显的放射增敏作用,其机制可能与CpG ODN抑制A549细胞增殖、增强TNF-α、IL-12、INF-γ和NO的分泌有关。

CpG ODN免疫活性及其抗肿瘤作用的研究进展

含有CpG基序的脱氧寡核苷酸（CpGoligodeoxynucleotide，CpGODN）广泛存在于细菌DNA中，能激活多种免疫细胞，产生多种细胞因子，具有强烈的免疫激活功能，已成为肿瘤免疫治疗研究领域的新热点。

含CpG寡核苷酸抗血管生成作用的实验研究

目的观察CpG ODN对裸鼠肺癌皮下种植瘤血管生成的作用。方法建立裸鼠皮下种植瘤模型,随机分为4组:A组[CpG ODN1826(1μg/μl)+β射线(RT:8 Gy)]、B组[CpG ODN1826(1μg/μl)]、C组[生理盐水(100μl/只)+β射线(RT:8 Gy)]、D组[生理盐水(100μl/只)]。接种肺癌细胞7 d后,开始瘤内注射药物并照射5 d。RT-PCR法测定瘤组织中VEGF-C mRNA、NRP-1 mRNA的表达。结果 4组裸鼠肿瘤组织中VEGF-C mRNA相对表达水平分别为18.34±3.19、29.62±3.14、51.13±2.81、53.46±5.67;NRP-1 mRNA相对表达水平分别为23.57±5.73、34.72±5.13、59.95±4.76、62.49±6.34,A组较其他3组显著下降(P<0.01),B组较C组和D组也显著下降(P<0.01)。结论 CpG ODN1826可显著抑制血管生成,其作用机制可能与抑制VEGF-C和NRP-1的表达有关。

树突状细胞诱导抗胃癌效应的实验研究

目的探讨树突状细胞(DC)抗胃癌效应的作用。方法分离正常人外周血单个核细胞(PBMC),加入GMCSF和IL-4培养,于第5d加入TNF-α继续培养,诱导分离DC。将淋巴细胞与DC混合培养4d后,加入胃癌细胞MKN45、MKN28及SGC7901抗原培养至10d,诱导产生肿瘤特异性的CTL。ELISA检测IL-12和IFN-γ的水平,MTT法检测DC诱导的CTL对MKN45、MKN28、SGC7901和A549体外杀伤效应,流式细胞术检测CTL对肿瘤细胞周期、凋亡的影响。结果培养10d后,IL-12、IFN-γ的分泌量明显提高,DC对同种不同分化类型的胃癌细胞株MKN45、MNK28和SGC7901均有强烈的杀伤效应,杀伤活性显著高于A549(P<0.01)。与A549比较,MKN45、MKN28和SGC7901的细胞周期显著抑制、凋亡率增加(P<0.01)。结论 DC体外可诱导出高效而特异的抗胃癌效应,显著抑制胃癌细胞分裂增殖,促进其凋亡。

胆管癌相关FXYD6基因功能区在大肠埃希菌表达的初步研究

目的对胆管癌相关基因FXYD6基因的功能区进行克隆和表达,以便进一步展开该基因功能研究。方法借助生物信息学方法分析FXYD6基因,设计FXYD6基因信号肽剪切后功能区蛋白体外表达序列,并将其克隆到pBV220表达载体上,继而以大肠埃希菌为表达系统,使功能区蛋白(不含信号肽)获得体外表达。结果该基因主要功能位点位于18～95 aa。PCR扩增出剪切掉信号肽序列的功能区序列(即包含18～95 aa的肽链段),并成功构建pBV220/FXYD6-ex基因功能区重组表达质粒克隆,其在大肠埃希菌DH5α中表达量最高,表达产物主要以包涵体形式存在。结论获得胆管癌相关FXYD6基因融合蛋白表达产物,为后续研究打下基础。

皮肤发黄应及时到医院检查

全身皮肤黄疸，明明是胆管癌，但很多患者被误诊为肝病，这让患者求医屡走弯路而使病情恶化。

腹腔镜超声在肝癌射频消融治疗中的临床应用

目的:探讨腹腔镜超声技术在肝癌射频消融(radiofrequency ablation,RFA)治疗中的临床应用.方法:2007-09/2008-04我院对15例肝癌患者的20个肝内肿瘤实施了腹腔镜超声引导下RFA治疗,肿瘤直径2.5-7.3(平均4.5)cm.HBV(+)10例,HCV(+)1例,合并有不同程度肝硬化11例,胆囊结石9例.其中1个癌灶12例,2个癌灶1例,3个癌灶2例.术后采用超声检查及螺旋CT增强扫描评价RFA疗效.结果:12例顺利完成腹腔镜下射频消融治疗,其中8例同时行胆囊切除术,单个肿瘤平均射频治疗时间40.2±12.3min,平均总手术时间98.7±28.5min,平均总出血量145.3±82.8mL.患者术中、后均未出现严重并发症.术后随访4-12mo,4例射频治疗部位复发,1例发现肝内新病灶,均采用经皮射频消融进行治疗.其中有2例患者第3次定期复查时,CT诊断原发性肝癌复发,外科医生建议行肝移植术,其余13例随访至今均存活.结论:在RFA治疗肝癌过程中,腹腔镜超声引导技术已成为协助外科医生顺利完成手术必不可少的手段之一.

脾动脉阻断技术在射频消融治疗门脉高压性脾功能亢进症中的应用

目的探讨脾动脉阻断技术联合脾脏射频消融(RFA)治疗门静脉高压性脾功能亢进症(脾亢)的有效性和临床应用前景。方法对阻断或未阻断脾动脉主干的接受脾脏RFA治疗的肝硬化性门静脉高压合并重症脾亢患者,分析随访6个月的临床疗效;并评估脾动脉阻断对肝硬化合并脾动脉盗血综合征的治疗效果。结果阻断或未阻断脾动脉主干的接受脾脏RFA治疗的门脉高压性脾亢患者各15例,术后未发生严重并发症。阻断脾动脉后实施脾脏RFA组消融(56±35)%脾脏体积,较未阻断脾动脉组消融体积(38±21)%显著增加(P<0.01);且阻断脾动脉组治疗后血小板计数、Child-Pugh评分和分级改善明显优于未阻断脾动脉组。合并巨脾的脾动脉阻断组15例患者经影像学诊断都符合脾动脉盗血综合征诊断,经脾动脉栓塞(13例)和脾动脉结扎(2例)后肝动脉内径显著增粗,肝动脉供血明显改善。结论脾动脉阻断联合脾脏射频消融术是治疗门静脉高压性脾亢,可以显著提高脾亢治疗的安全性和有效性,同时纠正脾动脉盗血综合征和有效改善肝功能。

应用达芬奇机器人手术系统治疗94例肝胆胰疾病的经验总结

目的总结达芬奇机器人手术系统治疗肝胆胰疾病的临床经验。方法回顾性分析2009年1月至12月第二炮兵总医院应用达芬奇机器人手术系统治疗94例肝胆胰疾病患者的临床资料。结果90例患者由达芬奇机器人手术系统完成手术，4例中转开腹，中转率为4％（4／94）。肝脏手术16例，其中1例右肝后叶巨大血管瘤患者因血管瘤与下腔静脉关系密切，中转开腹；肝门部手术27例；胰腺手术19例，其中2例因胰头肿瘤巨大暴露不佳，1例因胆总管下段肿瘤太小，术中通过胆道镜探查＋活组织检查无法明确肿瘤性质而中转开腹；其他部位手术32例（包括胆肠吻合6例，胆总管探查取石11例等）。结论应用达芬奇机器人手术系统可以完成各类型肝胆胰外科手术，拓展了腹腔镜外科的手术适应证。

DC-CIK过继转移联合微创技术治疗消化道肿瘤

建立免疫效应细胞联合微创技术回输治疗消化道肿瘤技术平台.新入组病人首先制定综合治疗方案,预先进行免疫效应细胞的制备并在术中、术后早期采用微创技术进行回输.经肝动脉输注+TACE2例;腹腔镜+射频消融+局部注射治疗5例;腹腔镜手术+局部注射治疗3例;达芬奇机器人+局部注射2例;超声引导下腹腔内注射120例.免疫效应细胞联合微创技术回输治疗消化道肿瘤技术具有可行性和安全性,初步分析表明疗效显著.

脾动脉盗血综合征:一个被忽视的肝病治疗靶点

肝脏对动脉低灌注所致的缺氧非常敏感,这在肝移植术后移植物并发症(如肝动脉血栓形成、动脉瘤)中已经得到证实,可导致严重的胆道缺血性损害、移植物失功能、甚至受体死亡等严重并发症。脾动脉盗血综合征(SASS)是肝移植术后一种较少认识的动脉并发症。SASS本质是粗大的脾动脉"盗走"肝动脉血流而导致肝动脉灌注不良;不及时干预,SASS亦可导致严重的移植物并发症。目前临床上尚未形成"肝硬化性SASS"概念,更未认识其危害性。肝硬化性SASS是慢性肝病损害的结果,并加重肝损害的病理过程,临床上无特异性,多表现为基础肝病合并脾脏肿大等异常。我们通过三维CT血管成像及血管造影证实失代偿期肝硬化患者普遍存在SASS,并证实纠正SASS后肝硬化患者的肝功能指标、Child-Pugh评分、评级等显著改善,并降低了消化道出血风险。因此,该文在国际上首次提出了肝硬化性SASS概念,并证实SASS是失代偿期肝硬化患者改善肝功能的一个有效治疗靶点,可作为等待肝移植的架桥性治疗措施。

应用达芬奇机器人实施腹部外科疑难手术的护理

应用达芬奇S机器人系统完成腹部外科肝、胆、胰、胃肠疑难手术200例,191例顺利完成手术,9例中转开腹。提出该手术时间长、费用昂贵,护士应注重术前评估与访视,充分了解患者的生理、心理、社会状况以及经济支持;术后重视皮肤护理,预防压疮,并逐渐适应微创术后患者恢复快的特点,鼓励患者早期活动,促进早日康复。

“达·芬奇”机器人对肝胆胰复杂手术早期经验的临床研究

目的总结"达·芬奇"机器人手术系统进行肝胆胰手术94例的临床经验。方法我院在2009年1月至2009年12月应用"达·芬奇"机器人手术系统对94例肝胆胰疾病患者进行了手术,对手术过程、术后恢复情况进行分析、总结。结果 90例患者手术成功,手术成功率95.8%(90/94),4例中转开腹手助完成,中转率4.2%(4/94),术中出血少,术后恢复快,无术后严重并发症,围手术期死亡率0。结论 "达·芬奇"机器人手术系统可以独立完成复杂的肝胆胰外科手术,将会推动微创外科的进程。

机器人肝切除术:附17例报告

目的:总结机器人手术系统在肝脏切除术应用中的临床经验。方法:对于2009年1月至2010年7月实施的17例机器人外科手术系统所行肝切除术的资料进行回顾性分析。结果:17例机器人肝脏手术病人中男∶女=8:9,平均年龄(55±16)(27～85)岁。包括原发性肝细胞癌3例;胆管细胞癌3例(BismuthⅢb型肝门部胆管癌1例,肝内胆管囊腺癌2例);转移性肝癌3例;良性肝脏肿瘤4例(肝血管瘤3例,胆管囊腺瘤1例);左肝内胆管结石4例。手术方式:规则性左半肝切除术2例,左肝外叶切除术5例,肝局部或楔形切除7例,亚肝段(s5a)切除术1例,联合其他机器人术式12例。机器人肝切除的平均手术时间为280 min,术中出血量为150 mL。术中发生大出血3例,其中2例(11.8%)为巨大肝血管瘤中转开腹切除。采用Pringle法肝切除4例,采用肝实质缝扎和超声刀离断肝实质交替法实施左肝外叶切除4例。机器人肝切除病例的平均住院时间为7(5～16)d。术后发生严重并发症2例(11.8%):腹腔内出血1例,肺部感染1例,经保守治疗治愈,无胆漏等严重并发症和围手术期死亡。结论:机器人肝切除术安全、可行,疗效确切。探索适合机器人手术系统优势的肝切除止血方法等创新性技术将是今后机器人肝切除的重点之一。

脾脏射频消融术治疗肝硬化性脾功能亢进症

大部分肝硬化患者合并有脾功能亢进症,表现为脾脏肿大、一种或几种血细胞(主要是血小板、白细胞)减少。传统治疗措施存在较大的局限性和/或并发症。作者在国际上率先开展的脾脏射频消融治疗脾亢的新型微创措施,本文从脾脏射频消融治疗脾亢的工作原理、治疗入路、安全性、临床疗效、提高安全性和疗效的联合脾脏射频消融的多手段治疗模式等多个角度,总结了作者近10年的实验和临床实践经验。本文可为其他单位开展该项新技术提供一定的参考价值。

丙肝抗病毒治疗前脾切除纠正血小板减少症

目的应用脾脏切除术纠正血小板减少症,为慢性丙型肝炎抗病毒治疗提供条件。方法回顾性总结了我们收治的7例慢性丙型肝炎患者的临床资料。结果7例慢性丙型肝炎或肝硬化患者,肝功能均为ChildA级,行开腹病理性脾脏切除术,术中出血量为150～400ml左右,未输血,术后所有患者血小板均在1周内升至正常水平,无手术死亡或术后门静脉血栓形成。术后10至14天后均给予干扰素加利巴韦林抗病毒治疗24～48周。结论丙型肝炎肝硬化患者施行脾脏切除术是安全有效的,术后1周患者外周血血小板就显著上升,即可开始干扰素抗病毒治疗。该方法适用于慢性丙型肝炎准备行抗病毒治疗,因外周血白细胞、血小板减少而无法进行的患者。

带血管蒂组织瓣在医源性胆道损伤中的应用

目的探讨带血管蒂组织瓣在医源性胆道损伤中的手术方式及效果。方法对于11例腹腔镜胆囊切除术后胆道损伤的患者,分别使用脐静脉瓣、胃瓣、胆囊瓣、空肠瓣以及圆韧带瓣进行修复。结果胆道修复术采用脐静脉瓣1例、胃瓣1例、胆囊瓣1例、空肠瓣4例以及圆韧带瓣4例。有1例患者术后出现胆瘘。所有患者于出院后肝功能指标及胆道影像学表现均基本正常。结论医源性胆道损伤修复手术为围肝门操作的精细手术。带血管蒂组织瓣修复重建术在恢复胆道连续性以及降低术后并发症方面具有很好的效果。