二氢杨梅素联合丝裂霉素对胃癌细胞的生长抑制作用

目的:探讨二氢杨梅素(AMP)联合细胞化疗药物丝裂霉素(MMC)对胃癌细胞SGC-7901的抑制作用。方法:体外培养人胃癌细胞株SGC-7901,分别设空白对照组、AMP组、MMC组以及AMP+MMC组。用MTT法观察细胞生长;流式细胞术分析细胞凋亡率;Western blotting检测细胞Bcl-2及survivin的表达情况。结果:在AMP组中,当浓度在2.2 mg/L-14.84 mg/L时,AMP对胃癌细胞生长均有抑制作用,以14.84 mg/L抑制作用最明显(60.85%±1.13%,P<0.05)。MMC随着浓度由1×10-3g/L增加至1×10g/L,其抑制率也由17.40%±0.30%增加至72.23%±1.36%,呈递增趋势。AMP联合MMC的抑制作用随着MMC浓度由1×10-3g/L增加至5×10-3g/L,抑制率也由21.83%±2.50%增加至46.70%±1.45%。联合治疗组优于单独给药组。AMP、MMC及AMP+MMC均可以下调Bcl-2及survivin的表达,其中AMP+MMC组下调作用最明显。结论:AMP联合MMC可以增强对胃癌细胞的抑制作用,联合应用可以减低MMC的剂量;其抑制肿瘤作用可能与下调Bcl-2及survivin蛋白的表达有关。

5-氮-2'脱氧胞苷对Reh细胞增殖及RUNX3基因启动子区甲基化状态的影响

目的:探讨5-氮-2'脱氧胞苷对Reh细胞增殖及其抑癌基因RUNX3启动子区甲基化状态的影响。方法:应用MTT法观察5-氮-2'脱氧胞苷对Reh细胞增殖的抑制能力;采用甲基化特异性PCR(MSP)检测5-氮-2'脱氧胞苷干预前后RUNX3基因启动子区的甲基化状况;应用RT-PCR检测干预前后RUNX3基因的mRNA表达水平的变化。结果:经5-氮-2'脱氧胞苷处理后,RUNX3基因启动子高甲基化的区域发生部分去甲基化,5-氮-2'脱氧胞苷处理前启动子高甲基化的RUNX3 mRNA未见表达,而在其处理后该基因可见重新表达,经5-氮-2'脱氧胞苷处理后,Reh细胞生长缓慢。结论:5-氮-2'脱氧胞苷能使Reh细胞RUNX3基因启动子区发生部分去甲基化,从而调控RUNX3基因表达并能抑制其细胞生长。启动子区异常甲基化是白血病Reh细胞RUNX3基因失活的主要原因之一。

脂质体转染STAT3反义核酸对HL-60细胞增殖和凋亡的影响

目的:STAT3(signal transducer and activator of tran-scription 3)蛋白在多种肿瘤组织或细胞中高表达,研究表明STAT3蛋白可能参与了肿瘤的发生与发展。本研究拟设计针对STAT3的高效反义核酸,研究STAT3反义核酸对人白血病细胞HL-60增殖及凋亡的影响。方法:人工合成STAT3硫代ASODN,通过脂质体转染HL-60细胞,倒置显微镜下观察细胞形态学变化、应用四唑盐(MTT)比色法转染前后对细胞增生的影响,细胞凋亡检测法(POD)观察细胞凋亡。结果:①STAT3 ASODN抑制HL-60细胞增殖呈时间和浓度依赖性;②STAT3 ASODN可诱导HL-60细胞的凋亡,凋亡指数呈浓度依赖性。结论:脂质体转染STAT3 A-SODN能够明显抑制HL-60细胞增殖,且能诱导细胞凋亡,表明STAT3可能成为肿瘤治疗新的分子靶位。

STAT3反义寡核苷酸对HepG2肝癌细胞增殖抑制和凋亡诱导作用

目的:探讨STAT3反义寡核苷酸(ASODN)对HepG2细胞增殖的抑制作用和细胞凋亡的诱导作用。方法:HepG2细胞体外培养,人工合成并硫代修饰STAT3 ASODN,通过脂质体转染进入HepG2细胞,倒置显微镜下观察细胞形态学变化,MTT法检测细胞增殖抑制程度,原位末端标记法检测细胞凋亡指数,RT-PCR检测细胞中STAT3 mRNA的表达水平。结果:STAT3 ASODN各浓度组对HepG2细胞的增殖有明显的抑制作用,能明显诱导细胞凋亡。结论:STAT3 ASODN能够诱导HepG2细胞凋亡。

表没食子儿茶素没食子酸酯对Reh细胞增殖及RUNX3基因甲基化状态的影响

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对白血病细胞系Reh细胞增殖抑制作用及对RUNX3基因启动子区甲基化状态及表达的影响,探讨Reh细胞RUNX3基因的失活机制及EGCG对RUNX3基因表达的调控。方法:体外培养Reh细胞,用5、10、15和20μg/mL EGCG与Reh细胞孵育,采用MTT法检测EGCG对Reh细胞增殖活性的影响;采用流式细胞术检测EGCG对Reh细胞凋亡的影响;采用甲基化特异性PCR(MSP)检测RUNX3基因启动子区域的甲基化情况;采用RT-PCR、Western blot法分别检测RUNX3 mRNA、蛋白的表达。结果:EGCG对Reh细胞生长有明显的抑制作用,并有时间及剂量依赖性;EGCG可促进Reh细胞发生凋亡,随着EGCG浓度的增加,细胞凋亡率逐渐增加;MSP法结果显示EGCG处理后RUNX3基因启动子高甲基化的区域发生去甲基化,EGCG能够诱导Reh细胞RUNX3基因mRNA和蛋白的重新表达,具剂量依赖性。结论:EGCG可明显抑制Reh细胞的增殖,并诱导Reh细胞中异常甲基化的RUNX3基因去甲基化,使RUNX3基因恢复表达,这可能是其抗肿瘤的重要机制。

STAT3反义核酸对HL-60细胞周期及c-myc mRNA表达的影响

实验分反义组、无义组、脂质体组、空白组,转染后,应用四唑盐(MTT)比色法分析细胞增殖率,流式细胞仪检测细胞周期,RT-PCR检测细胞中STAT3 mRNA和c-myc mRNA的表达。探讨STAT3反义寡核苷酸对白血病细胞HL-60细胞周期及c-myc的影响。STAT3 ASODN抑制HL-60细胞增殖呈时间和浓度依赖性;反义寡核苷酸作用后,G0/G1期细胞明显减少,S期细胞增多,细胞周期进程受到明显阻滞;反义寡核苷酸作用48h后细胞内STAT3mRNA及c-myc mRNA的表达水平下降,与各对照组比较有显著性差异(P<0.05)。STAT3 ASODN能够明显抑制HL-60细胞增殖,并能阻滞HL-60细胞于G0/G1期、并下调c-myc mRNA的表达。