剑叶龙血树内生真菌的分离及体外抑菌活性筛选

为研究剑叶龙血树内生真菌资源多样性,初步探讨和筛选具有抑菌活性的特异性菌株以及进一步开发剑叶龙血树内生真菌的抗菌活性化合物。该文采用植物组织分离法从剑叶龙血树茎和叶中分离内生真菌,对内生真菌进行液体发酵7 d,经乙酸乙酯萃取后制得粗提物,并采用牛津杯扩散法,以10种常见病原菌和5种临床耐药菌为靶标检测其发酵粗提物的抑菌活性,对有较好抑菌活性的内生真菌进行分子鉴定。结果表明:(1)从剑叶龙血树茎、叶中共分离得到345株内生真菌,294株对一种以上指示菌有抑制活性;(2)其中84株内生真菌对5株临床耐药菌均有不同程度的抑制活性,占所分离菌株总数的24.35%,75%的内生真菌对金黄色葡萄球菌有抑制活性。这说明剑叶龙血树中存在多种有抑菌活性的内生真菌,为剑叶龙血树内生菌抗菌活性成分挖掘及新型抗菌药物筛选奠定了基础。

双孢线虫草内生和生境土壤细菌的分离鉴定及其抑菌活性

采用8种培养基从来自云南哀牢山的12份双孢线虫草(Ophiocordyceps bispora)的子座、菌核及其生境土壤样品中分离细菌,并对细菌进行形态学分类,进行16 S rRNA测序鉴定,同时按所获菌株来源及种类随机挑取供试菌株采用琼脂块扩散法测试对25株病原菌的抑菌活性。结果表明:从双孢线虫草子座、菌核和生境土壤中分离获得302株细菌,对其中275株进行测序,它们属于4门14目18科18属65种,其中链霉菌属(Streptomyces)、芽孢杆菌属(Bacillus)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、诺卡氏菌属(Nocardia)和根瘤菌属(Rhizobium)为优势属;枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、N.nova、纳塔尔链霉菌(S.natalensis)、S.angustmyceticus、高原链霉菌(S.platensis)、杀黄孢链霉菌(S.xanthocidicus)、江西诺卡氏菌(N.jiangxiensis)、高山芽孢杆菌(B.altitudinis)为优势种。就所含细菌类群而言,双孢线虫草生境土壤(16科16属57种)明显高于子座(9科9属17种)和菌核(3科3属7种)。在199株细菌中,有99株对1个以上病原菌具有抑菌活性,初筛阳性率为49.75%;其中8个优势菌株对4个及以上病原菌具有广谱且高效的抑菌活性。

剑叶龙血树内生真菌Colletotrichum sp.B-152次生代谢产物研究

采用色谱技术和波谱学分析从剑叶龙血树内生真菌Colletotrichum sp.B-152的培养液和菌丝中,鉴定出了9个化合物:2-hydroxy-4-methyl-1-phenyl-3-pentanone(1)、4-methyl-1-phenyl-2,3-pentanediol(2)、胸腺嘧啶核苷(3)、腺嘌呤核苷(4)、(22 E,24 R)-ergosta-7,22-diene-3β,5α,6β-triol(5)、(4 E,8 E)-N-D-2′-hydroxypalmitoyl-1-O-β-D-glycopyranosyl-9-methyl-4,8-sphingadienine(6)、tuberosider(7)、(22 E,24 R)-5α,8α-epidioxyergosta-6,22-dien-3β-ol(8)、十七烷酸(9),其中化合物1作为天然产物首次报道,化合物2~4、6、7、9首次从刺盘孢属Colletotrichum真菌中分离得到。采用滤纸片扩散法对单体化合物的抑菌活性进行测定,9个化合物对至少一种指示菌表现出不同程度的抑制作用,其中化合物7和8表现出较为广谱的抑菌活性。

云南嵩明大哨天然虫生真菌及其内生真菌的分离鉴定与抑菌活性分析

【背景】云南存在着丰富的虫草资源,天然虫草群落中蕴藏多样的真菌资源,是挖掘新型抑菌活性化合物的潜在来源。【目的】了解云南嵩明大哨天然虫生真菌及其内生真菌的物种多样性,并从中筛选具有抑菌活性的菌株。【方法】采用组织分离法对所采集的野生虫草样本进行虫生真菌及其内生真菌的分离,并通过形态观察和ITS联合nrSSU、nrLSU、tef-1α、rpb1、rpb2多基因测序进行物种鉴定及多样性分析;通过平板对峙法以7株病原细菌、5株植物病原真菌为病原指示菌进行抑菌活性测试。【结果】共采集86份天然虫草样本,经鉴定隶属于3科5属7种,包括虫草科(Cordycipitaceae)虫草属(Cordyceps)(1种)、白僵菌属(Beauveria)(2种)、鳞翅虫草属(Samsoniella)(2种)、麦角菌科(Clavicipitaceae)泛普可尼亚属(Metapochonia)(1种),以及线虫草科(Ophiocordycipitaceae)线虫草属(Ophiocordyceps)(1种)。同时,从采集到的虫草样本中分离得到26株内生真菌,分属于9科9属,其中木霉属(Trichoderma)(38%)和镰刀菌属(Fusarium)(19%)为此次分离得到的优势菌属。对所分离保存的真菌按其分离源及种类归属,从虫生真菌和内生真菌菌株中共挑取20株代表性菌株进行抑菌活性筛选,有11株真菌对2株及以上病原指示细菌具有不同程度的抑菌活性,13株真菌对1株以上植物病原真菌具有不同程度拮抗能力;其中Trichoderma sp.Y3-1和Fusarium sp.WZ3-1具有广谱抑菌活性。【结论】云南嵩明大哨分布有丰富的虫生真菌及内生真菌资源,分离所得的真菌对多种病原菌具有不同程度的抑制作用。本研究丰富了云南虫草资源多样性,为云南省虫草及其内生真菌资源的开发利用提供了数据支持,也为下一步从虫草及其相关真菌资源中挖掘抑菌活性物质提供了菌株资源。

昆明西山森林公园天然虫生真菌及其内生真菌的分离鉴定及多样性分析

【背景】不同地区虫草物种多样性的调查是虫草相关研究的热点之一,虫草真菌区系研究是真菌资源研究的重要内容。【目的】了解云南省昆明市西山森林公园天然虫生真菌及其内生真菌的多样性,增加对虫草真菌区系的认识。【方法】对该地区通过资源调查并采用组织分离法对采集的虫草样本进行虫生真菌及其内生真菌的分离,利用形态特征观察及ITS联合nr SSU、nr LSU、translation elongation factor-1α(tef-1α)、rpb1、rpb2多基因测序进行虫生真菌物种鉴定及多样性分析。【结果】共采集45份云南省昆明市西山森林公园天然虫草样本,鉴定结果表明隶属于2科5属12种,包括虫草科(Cordycipitaceae)的鳞翅虫草属(Samsoniella)(2种,含疑似新种1个)、虫草属(Cordyceps)(4种)和白僵菌属(Beauveria)(4种),以及线虫草科(Ophiocordycipitaceae)的紫枝孢属(Purpureocillium)(1种)和弯颈霉属(Tolypocladium)(1种,为疑似新种),优势属为虫草属(Cordyceps),优势种为环链虫草(Cordyceps cateniannulata)(生态优势度=0.241380)。同时,从采集的虫草样本中分离鉴定得到67株隶属于13科14属的内生真菌,其中,木霉属(Trichoderma)(28%)和镰刀菌属(Fusarium)(19%)为此次分离鉴定得到的优势菌属。【结论】本研究补充了西山森林公园虫草生物多样性资源数据库,有利于云南虫草生物多样性资源的保护和利用,同时对虫草真菌区系的系统研究也加深了我们对虫草真菌区系的认识。

海洋放线菌S592次级代谢产物及其体外抑菌活性研究

对海洋放线菌S592的次级代谢产物以及体外抑菌活性进行研究。将菌株S592进行大量发酵,采用色谱方法对菌株发酵产物进行分离纯化,通过波谱技术对所获单体化合物进行结构鉴定,并测定化合物的体外抑菌活性。从海洋放线菌S592中分离得到6个化合物,含2个螺环抗生素lobophorin类化合物,1个环肽类化合物,2个苯甲酰胺类化合物以及1个喹唑啉酮类化合物。这6个化合物对至少一种病原菌表现出不同程度的抑制作用,其中,6个化合物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA 28300)均具有抑制活性,4个化合物对耻垢分枝杆菌抑制活性较好,且化合物1和2对MRSA的抑制活性为首次发现。