中国版纳微型猪近交系内源性逆转录病毒酶活性的定量检测

采用 Roche公司的 RT(Reverse transcriptase,RT)检测试剂盒 ,按其操作步骤进行 ,用 HIV- 1作为试剂盒的阳性参照绘制标准曲线 ,PK15作为猪内源性逆转录病毒 (Porcine endogenous retrovirus,PERV)的阳性对照 ,定量检测 34头中国版纳微型猪近交系 (Banna minipig inbreed,BMI)血浆中表达的 PERV的逆转录酶。各猪RT结果均于 4 0 5 nm处测定 OD值 ,用 HIV- 1的实测标准曲线进行定量 (pg/ m l)。检测结果表明全部 34头猪均为阳性反应 ,但各猪血浆中有活性的酶远低于 HIV- 1,也弱于

成骨分化的骨髓间充质干细胞的免疫原性

目的:骨髓间充质干细胞(mesenchymal stemcells,MSC)具有多向分化潜能,又因其低免疫原性,成为细胞移植治疗的良好选择。本实验室前期实验表明猪MSC具有低免疫原性和免疫调节作用,而猪MSC在人体内微环境中,将自动分化。本试验研究猪MSC在体外诱导分化后是否还能维持其低免疫原性,仍具有免疫调节作用。方法:MSC细胞从近交系版纳微型猪骨髓中分离获得,转入SV40基因,进行永生化。再用β-甘油磷酸钠、地塞米松、抗坏血酸磷酸盐等体外诱导其分化为成骨细胞,以未分化MSC为对照,用RT-PCR法检测分化MSC的主要组织相容性抗原(swine lymphocyte antigen classⅠ、classⅡ,SLAⅠ、SLAⅡ)的表达情况,用单向混合淋巴细胞反应(MLR)的方法检测分化MSC是否仍不能引起人外周血淋巴细胞(human peripheral blood lymphocyte,hPBL)的增殖反应。结果:RT-PCR结果显示未分化MSC只有SLAⅠ表达;分化MSC既有SLAⅠ,也有SLAⅡ的表达,但很低。这一结果支持MSC的低免疫原性特性。混培结果也显示分化猪MSC与未分化猪MSC一样都不引起hPBL增殖反应。结论:分化和未分化猪MSC均不引起人淋巴细胞增殖反应,具有低免疫原性。提示猪MSC移植到人可能不会被排斥。

版纳猪骨髓间充质干细胞体外培养最佳条件探索

目的探索近交系版纳微型猪(BannaMinipigInbred-line,BMI)骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSC)的最佳培养温度及血清种类。方法原代培养和永生化两种BMI-MSC细胞,96孔板中选用胎牛、猪、小牛三种不同血清;于37℃,38℃,39℃,40℃四种不同温度下进行培养,测定生长曲线。最终根据生长曲线确定最佳培养条件。结果10%胎牛血清较猪血清和小牛血清条件下生长速度快,差异具有统计学意义;37℃、38℃、39℃、40℃四个不同温度条件下生长速度无明显差异,差异不具有统计学意义。结论10%胎牛血清为BMI-MSC的最佳培养血清;37℃、38℃、39℃、40℃四个不同温度均适宜BMI-MSC细胞的生长。